食品中蛋白质检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 食品中的蛋白质的测定方案 原理当脲被小心加热至150~160℃时，两分子问脱去一个氨分子形成双缩脲，双缩脲在碱性条件下，能与硫酸铜生成紫红色配合物，称为双缩脲反应，由于蛋白质分子中有肽键(一CO-NH)，与双缩脲结构相似，故也能呈现此反应而生成紫红色配合物，在一定条件下其颜色深浅与蛋白质含量成正比，据此可用吸光光度法来测定蛋白质含量，该配合物的最大吸收波长为560nm。 仪器及试剂 美析V-1500PC分光光度计 1.碱性硫酸铜溶液。 a.以甘油为稳定剂，将10ml。10mol/L 氢氧化钾和 3.0ml 甘油加到937mL蒸馏水中，剧烈搅拌(以免生成氢氧化铜沉淀)，同时慢慢加入40ml。145%硫酸铜溶液。 b.以酒石酸钾钠作稳定剂，将10ml。10mol/L氢氧化钾和 20mL25%酒石酸钾钠溶液加到930mL蒸馏水中，剧烈搅拌(否则将生成氢氧化铜沉淀)，同时慢慢加入40mL 4%硫酸铜溶液。 2.四氯化碳。 标准曲线的绘制 以采用凯氏定氮法测出蛋白质含量的样品作为标准蛋白质样品。按蛋白质含量 40mg、50mg、60mg、70mg、80rag、90mg、100mg、110mg分别称取混合均匀的标准蛋白质样于8支50mL纳氏比色管中，然后各加入1mL四氯化碳，再用碱性硫酸铜溶液(①或②)准确稀释至50mL，振摇 10min， 静置Ih， 取上层清液离心 5min(2000r/min)， 取离心分离后的透明液于比色皿中，在560nm波长下以蒸馏水作参比液，调节仪器零点并测定各溶液的吸光度值，以蛋白质的含量为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。 样品的测定 准确称取样品适量(即使得蛋白质含量在40~110mg)于 50mL纳氏比色管中，加1mL四氯化碳，按上述步骤显色后，在相同条件下测其吸光度值。用测得的吸光度值在标准曲线上可查得蛋白质的质量(mg)，由此求得蛋白质含量。 结果计算 X=m*100/m1 式中X--样品中蛋白质的含量， mg/100g。 上海美析仪器有限公司 m--由标准曲线上查得的蛋白质含量，nmg，m1一一样品质量， g。 注意事项 1.蛋白质的种类不同，对发色程度的影响不大。 2.标准曲线做完整之后，无需每次再做标准曲线。 3.含脂肪高的样品应预先用醚脱脂。 4.样品中有不溶性成分存在时，会给比色测定带来困难，此时可预先将蛋白质抽出后再进行测定。 5.当肽链中含有脯氨酸时，若有大量糖类共存，J则显色不好，测定值偏低。 6.本法灵敏度较低，但操作简单快速，故在生物化学领域中测定蛋白质含量时常用此法。本法亦适用于豆类、油料、米谷等作物种子及肉类等样品的测定。 仪器参数 V-1500PC可见分光光度计 仪器特点 *采用单片微机控制，128*64位液晶显示 *宽大的液晶显示器可显示多组数据 *巨大的内存空间，，可存储多组数据和曲线 *自动调0、调100%功能 *波长自动调节 *虑色片自动切换 *宽大样品品(5mm~100mm) *具有最多十点标样建标准曲线测量功能 *可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量 *可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量 *可断电保存测量设置的标准曲线参数 *配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线*配USB 接口 *可通过 PC 软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求 技术指标及基本参数 *波长范围： 320~1100nm *光谱带宽： 2nm *波长准确度： ±0.5nm *波长重现性：：≤0.2nm *透射比准确度： ±0.3%t *透射比重复性：0.15%T *杂散光：： ≤0.05% T (340nm NaNO2) *稳定性： 0.001A/h (500nm 预热后) *测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量 *波长调节：自动调节 *光度范围： -0.3~3A *显示方式： 128*64液晶 *检测器：进口硅光二极管 *光源：进口钨灯 *电源： AC 220V/50Hz 或 110V/60Hz *功率： 120W *仪器尺寸：480×350×220mm *主机净重： 11Kg 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技-因你改变"，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 上海美析仪器有限公司 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。 美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 了解更多内容请关注我公司微信公众号：美析仪器 上海美析仪器有限公司 当脲被小心加热至150～160℃时，两分子问脱去一个氨分子形成双缩脲，双缩脲在碱性条件下，能与硫酸铜生成紫红色配合物，称为双缩脲反应，由于蛋白质分子中有肽键(一CO—NH )，与双缩脲结构相似，故也能呈现此反应而生成紫红色配合物，在一定条件下其颜色深浅与蛋白质含量成正比，据此可用吸光光度法来测定蛋白质含量，该配合物的最大吸收波长为560nm。