玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测方案(氨基酸分析仪)

SSL-CA22-114Excellence in Science Excellence in ScienceLC-289 岛津应用云岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 高效液相色谱法测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)含量 LC-289 摘要：本文参照食品安全国家标准《GB5009.111-2016 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法》，利用 Essentia LC-16系统测定了玉米中的脱氧雪腐雪刀菌烯醇 (DON)含量。仪器精密度良好，0.5 ug/mL标准品溶液平行测定6次，目标峰保留时间和峰面积的RSD 值分别为 0.15%和0.62%；外标法定量，在0.1-5.0 ug/mL浓度范围内，校准曲线线性相关系数为0.9999；仪器检出限为7.87ng/mL；加标样品的平均回收率为 99.97%。 关键词： Essentia LC-16 脱氧雪腐腐刀菌烯醇 (DON) 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON) 因其能引发动物呕吐的特性，故被定名为呕吐毒素。 瘤的重要诱因。 在粮食谷谷中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)导致的污染情况非常普遍。被脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染的粮谷在被食用后，是导致胃癌、食管癌等恶性肿 本文参照《GB 5009.111-2016食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法》，利用 Essentia LC-16 系统测定了玉米中的脱氧雪腐雪刀菌烯醇 (DON) 含量。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Essentia LC-16高效液相色谱系统，具体配置为： 系统控制器： CBM-20Alite 脱气机： DGU-20As 输液泵： LC-16×2 自动进样器：SIL-16 柱温箱： CTO-16L 检测器： SPD-16 色谱工作站： LabSolutions Essentia V.5.98 1.2分析条件 1.2.1液相色谱条件 色谱柱： WondaSillMC18，150mm×4.6mm(W)， 5um 流动相：A-甲醇；B-水 流速：1.0 mL/min 柱温：35℃ 进样体积：50uL 波长：218nm 洗脱方式：等度洗脱，A相浓度为20%，B相浓度为80% 1.3样品前处理 参照《GB 5009.111-2016食品中脱氧雪腐醇刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法》。 1.3.1试样提取 称取25g(精确到0.1 g) 磨碎的玉米试样(过1mm孔径筛网)于100mL具塞三角瓶中，加入5g聚乙二醇(相对分子质量8000)，加水100mL，混匀，超声提取20 min。以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液于干净的容器中，10000r/min 离心5 mino 1.3.2净化 事先将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，待柱内原有液体流尽后，取上述滤液2.0mL注入免疫亲和柱中。调节下滴速度，控制样液以每秒1滴的速度通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱中。用5 mL PBS 缓冲盐溶液和5mL水先后淋洗免疫亲和柱，流速约为每秒1滴，直至空气进入柱中，弃去全部流出液，抽干小柱。 1.3.3洗脱 准确加入2mL甲醇洗脱亲和柱，控制每秒1滴的下滴速度，收集全部洗脱液于试管中，在45℃氮吹洗脱液至近干，加入1mL流动相，涡旋30s溶解残留物，溶液用 0.45 um 滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中，等待进样。 结果与讨论 2.1脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)标准溶液(0.5ug/mL)谱图 图1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)标准溶液 (0.5 pg/mL)谱图 表1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)信息 中文名称 英文名称 CAS号 保留时间 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 Deoxynivalenol 51481-10-8 6.004 2.2重复性实验 取0.5 ug/mL标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果显示保留时间和峰面积的 RSD%分别为 0.15%和0.62%，表明系统精密度良好。 图22标准品溶液色谱图重复性 2.3校准曲线和检出限 分别配制0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 ug/mL的脱氧雪腐希刀菌烯醇标准溶液，取50uL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做校准曲线。根据0.1 ug/mL标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出限，化合物检出限以及线性相关系数如图3所示。 图3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇校准曲线及相关信息 2.4加标回收率 取三分玉米样品进行测定，并平行3份对该样品进行 0.2 ug/mL 浓度 DON 加标，按照上述前处理方法处理后上机测试，具体结果显示：加标回收率分别为 98.71%、101.18%和100.03%， RSD 为1.23%，加标回收率及重复性满足一般定量分析要求。 表4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)加标回收率及 RSD(%) # 测试结果(ug/mL) 回收率结果 玉米样品 加标样 加标回收率(%) RSD% 1 N.D. 0.214 98.71 2 N.D. 0.219 101.18 1.23% 3 N.D. 0.217 100.03 结论 本文参照《GB 5009.111-2016食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法》，建立了 Essentia LC-16 对玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)的含量测定方法。结果显示在 0.1~5.0 ug/mL 浓度范围内校准曲线线性良好，相关系数为0.9999，仪器检出限在7.87 ng/mL。0.5 ug/mL 标准品溶液连续进样6针，峰面积RSD 为0.62%，精密度良好。0.2 ug/mL 加标浓度的加标平均回收率为99.97%.该方法灵敏度高，准确性好，适合玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON) 含量的检测。 本文参照《GB 5009.111-2016 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法》，建立了Essentia LC-16对玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的含量测定方法。结果显示在0.1~5.0 μg/mL浓度范围内校准曲线线性良好，相关系数为0.9999，仪器检出限在7.87 ng/mL。0.5 μg/mL标准品溶液连续进样6针，峰面积RSD为0.62%，精密度良好。0.2 μg/mL加标浓度的加标平均回收率为99.97%. 该方法灵敏度高，准确性好，适合玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)含量的检测。