血浆中氟乙酰胺含量检测方案(气质联用仪)

SSL-CA22-134Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-241 Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS/MS法测定血浆中氟乙酰胺含量 GCMSMS-241 摘要：本文使用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪 GCMS-TQ8050 NX 建立了血浆中氟乙酰胺含量的检测方法。在0.01~0.5 ug/mL浓度范围内，氟乙酰胺线性相关系数为0.997。取浓度为 0.01 ug/mL血浆基质标准溶液连续进样6针，峰面积RSD% 为 1.76%。在加标回收实验中，每0.5mL血浆样品中加标氟乙酰胺0.1 ug(加标浓度 0.2ug/mL)，测得加标回收率结果为74.5%，三份加标样品回收率 RSD% 为 3.62%。实验结果表明：血浆样品前处理操作简单便捷，方法灵敏度高，结果准确，为疑似中毒血浆浆氟乙酰胺含量测定提供了参考。 关键词：气气色谱-三重四极杆质谱联用仪血浆 氟乙酰胺 氟乙酰胺 (2-Fluoroacetamide)又名敌蚜胺，是一种无色无味的有机氟内吸性杀虫剂。氟乙酰胺是一种神经毒剂，进入人体后会中断三羧酸循坏，并且氟与血红蛋白结合生成氟血红蛋白，造成人体缺氧，损害心脏及中枢神经系统。 由于氟乙酰胺的剧毒性和潜在风险，上世纪80年代，国家农业部门己将氟乙酰胺列入了明令禁用灭鼠药范围，但氟乙酰胺中毒事件仍然时有发生。 目前，氟乙酰胺检测方法主要有气相色谱法 (GC法)和气相色谱质谱联用法(GCMS法)等。生物样品 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX气相色谱-三重四极杆质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rtx-Wax (30 m×0.25mm×0.25 um) 柱温程序：80℃(1min)_10℃/min_140℃(0 min)_25℃ /min_250℃(10 min) 进样口温度：250℃离子化方式：EI进样模式：不分流进样离子源温度：230℃流速控制方式：恒线速度色谱质谱接口温度：250℃柱流量：1.5mL/min检测器电压：调谐电压+0.5 kV进样量：1uL采集模式：MRM，离子对信息见表1 样品前处理 基质复杂，氟乙酰胺保留时间较短，对于此类样品及目标物， GC 法和 GCMS 法抗干扰能力较弱。所以建立一种准确可靠的、快速的氟乙酰胺检测方法既能够为临床诊治方案提供科学依据，也可为中毒、投毒等刑事案件侦破提供有效的技术参考。 本文利用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪GCMS-TQ8050 NX 建立了血浆中氟乙酰胺检测方法，测定血浆中氟乙酰胺含量。本方法可有效消除生物样品基质干扰，样品处理简单快捷、灵敏度高、结果准确，，可为突发事件中氟乙酰胺快速定性定量分析提供参考。 结果与讨论 3.1标准品色谱图 取氟乙酰胺标准溶液1 uL 进 GCMS-TQ8050 NX分析，氟乙酰胺标准溶液色谱图见图2，化合物信息见表1。 图2 氟乙酰胺标准溶液色谱图 (0.1 ug/mL) 表1 氟乙酰胺 MRM条件 化合物名称 保留时间 定量离子对 碰撞能量 参考离子对 碰撞能量 英文名称 CAS号 (min) (m/z) CE (m/z) CE 氟乙酰胺 2-Fluoroacetamide 640-19-7 7.697 77.00>44.00 4 77.00>62.00 1 3.2标准曲线及质量色谱图 以空白血浆提取液为溶剂，配制氟乙酰胺标准溶液，浓度梯度为0.01、0.05、0.1、0.25、0.5 ug/mL， 取1uL进样，以浓度值为横坐标，氟乙酰胺定量离子对峰面积为纵坐标绘制标准曲线。氟乙酰胺标准曲线如图3所示，线性相关系数见表2，目标物质量色谱图如图4所示。 图3 标准曲线 图4质量色谱图(0.01pg/mL) 表2 氟乙酰胺标准曲线线性相关系数r、仪器检出限 化合物名称 浓度范围 (ug/mL) 相关系数(r) 检出限(ug/L) 氟乙酰胺 0.01~0.5 0.997 0.026 3.3检出限及重复性 取浓度为0.01 ug/mL 氟乙酰胺标准溶液，连续进样6次，考察峰面积重复性，测定结果见表3。根据标准溶液数据计算化合物仪器检出限(3倍信噪比，峰至峰)，检出限见表2。 表3 氟乙酰胺峰面积重复性实验结果(n=6) 化合物 峰面积1 峰面积2 峰面积3 峰面积4 峰面积5 峰面积6 RSD((%) 氟乙酰胺 26966 27977 27909 28014 28043 28447 1.76 3.4加标回收率实验 加标回收率实验中，选取空白血浆添加氟乙酰胺标准溶液，每0.5mL血浆中加标氟乙酰胺100 ug，加标样品按前述样品处理流程平行处理3份，上机分析。氟乙酰胺平均回收率结果为74.5%，平行处理三份加标样品回收率 RSD%(n=3)为3.62%，加标回收率详细结果见表4，加标样品谱图如图5. 图5 血浆加标氟乙酰胺样品质量色谱图(加标浓度0.2 ug/mL) 表4 血浆加标氟乙酰胺回收率结果 加标样品 加标浓度(0.2ug/mL) 平均回收率 RSD% 回收率结果1 回收率结果2 回收率结果3 (n=3) 血浆 72.1 74.2 77.2 74.5 3.62 3.5实际样品分析结果 选取2份疑似中毒血浆样品，按前述样品处理流程进行样品制备，并采用上述仪器条件测定，氟乙酰胺检测结果如表5所示。 表5 血浆样品中氟乙酰胺测定结果 样品编号 样品名称 氟乙酰胺含量量(ug/mL) 血浆样品1 N.D. 2 血浆样品2 N.D. 注：N.D.表示未检出 结论 本文使用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪 GCMS-TQ8050 NX建立了血浆中氟乙酰胺含量的检测方法。在0.01~0.5 ug/mL浓度范围内，氟乙酰胺标准曲线线性相关系数为0.997。取浓度为 0.01 ug/mL标准溶液连续进样6针，氟乙酰胺峰面积 RSD% 为 1.76%。在0.2 ug/mL加标浓度下，氟乙酰胺平均加标回收率结果为74.5%，三份加标样品回收率 RSD% 为 3.62%。实验正果证明：血浆样品前处理操作简单便捷，方法灵敏度高，结果准确，为疑似中毒血浆中氟乙酰胺含量测定提供了参考。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心 本文使用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪GCMS-TQ8050 NX建立了血浆中氟乙酰胺含量的检测方法。在0.01~0.5 μg/mL浓度范围内，氟乙酰胺标准曲线线性相关系数为0.997。取浓度为0.01 μg/mL标准溶液连续进样6针，氟乙酰胺峰面积RSD%为1.76%。在0.2 μg/mL加标浓度下，氟乙酰胺平均加标回收率结果为74.5%，三份加标样品回收率RSD%为3.62%。实验结果证明：血浆样品前处理操作简单便捷，方法灵敏度高，结果准确，为疑似中毒血浆中氟乙酰胺含量测定提供了参考。