人血浆中血浆中25种精神安定剂检测方案(液质联用仪)

SSL-CA19-131Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-410 LCMS-8050CL 检测血浆中25种精神安定剂药物 LCMSMS-410 摘要：本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A CL 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 CL联用检测血浆中25种精神安定剂药物的方法。血浆样品使用试剂进行蛋白沉淀后即可移取上清液，进样分析。采用ESI离子源模式， MRM模式采集数据，内标法定量，用超高效液相色谱LC-30A CL 在11.0 min 内完成分析，三重四极及质谱仪 LCMS-8050 CL 进行定量分析。结果显示，25种精神安定剂类药物线性良好；低、高两个浓度水平的质控品均在试剂盒允许范围内，保留时间和含量相对标准偏差分别在0.07~0.16%和1.91~7.00%之间，精密度实验结果良好。该方法可为临床同时快速、准确定量多种精神安定剂药物提供参考。 关键词：LCMS-8050CL 精神安定剂药物三重四极杆质谱血浆样品 治疗药物监测 (Therapeutic drug monitoring，TDM) 是临床药理学的重要研究内容之一，主要通过采用灵敏的现代分析测试手段来定量分析患者血液样本中的药物及其代谢产物的浓度，探讨血药浓度与药物疗效、毒性之间的关系，以确定药物有效浓度及毒性浓度之间的范围，并可根据药物动力学公式来计算最佳的治疗剂量，做到用药个体化，指导临床合理用药。 同时精神安定类药物代谢动力学特点及严重的不 良反应要求应用这些药物时应采取个体化给药方案，随着监测方法的快速发展，在对患者的治疗过程中进行必要的血药浓度监测具有重要意义。本文利用岛津LCMS-8050CL 三重四极联串联质谱仪实现了血浆样品中25种精神安定类药物的快速定量分析。方法具有分析速度快、灵敏度高，准确性好等特点，可为临床精神安定类药物的浓度监测提供参考。 |实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津临床用超高效液相色谱仪 LC-30A CL 与三重四极杆质谱仪LCMS-8050 CL联用系统。具体配置为 LC-30AD CL×2(输液泵)， DGU-20A5R CL(线线脱气机)， SIL-30AC(自动进样器))， CTO-30ACL (柱温箱)， CBM-20A CL 系统控制器， LCMS-8050 CL 三重四极杆质谱仪，、LabSolutions Ver. 5.97色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件： 流动相：A相-5mM乙酸铵-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 流速：0.3mL/min 色谱柱： BEH C18 2.1 mml.D. ×100 mm L.， 1.7 um 柱温：40℃ 进样体积：1uL 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1梯度洗脱条件 时间 单元 处理命令 值 0.00 泵 B.Conc 15 6.00 泵 B.Conc 85 6.10 泵 B.Conc 90 8.00 泵 B.Conc 90 8.10 泵 B.Conc 15 11.00 控制器 Stop 质谱条件：接口温度：300℃离子源：ESIDL 管温度：250℃接口电压：3.0KV加热块温度：400℃雾化气：3.0 L/min干燥气流量：10.0 L/min 扫描模式： MRM模式，见表2 表2 MRM 参数 化合物 CAS No. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE (V) Q3 Pre Bias (V) Sulpiride 84-80-0 342.15 112.15* -10 -28 -22 342.15 58.10 -10 -30 0lanzapine 132539-06-1 313.15 256.20* -24 313.15 84.30 -25 9-Hydroxyrisperidone 144598-75-4 427.25 207.05* -22 -28 -22 427.25 110.00 -22 -44 -20 Risperidone 106266-06-2 411.20 191.05* -12 -31 -23 411.20 69.05 -12 -50 -27 Clozapine 5786-21-0 327.15 270.05* -17 -23 -29 327.15 192.00 -17 -44 -20 Quetiapine 111974-69-7 384.15 253.10* -11 -24 -19 384.15 221.20 -11 -40 -25 Promethazine 60-87-7 285.15 86.20* -14 -16 -17 285.15 71.15 -14 -45 -14 Aripiprazole 129722-12-9 448.15 285.00* -22 -26 -21 448.15 98.10 -13 -40 -20 Levomepromazine 60-99-1 329.15 100.20 -16 -23 -21 329.15 58.15 -16 -40 -23 Chlorpromazine 50-53-3 319.10 86.10* -16 -22 -18 319.10 58.10 -16 -35 -23 Zotepine 26615-21-4 332.10 72.15* -16 -17 -15 332.10 44.05 -16 -50 -19 Amisulpride 71675-85-9 370.10 242.05 -30 -27 -25 370.10 196.00 -30 -41 -19 Ziprasidone 146939-27-7 413.10 194.05" -17 -29 -19 413.10 159.05 -17 -43 -30 Chlorprothixene 113-59-7 316.10 271.10* -16 -25 -18 316.10 231.00 -15 -30 -17 D8-Perazine 348.20 149.20 -15 -35 -15 D10-Pipamperone - 386.20 98.10 -15 -35 -15 D6-Prothipendyl 292.10 241.10 -11 -17 -26 D4-Sertindole 445.20 117.10 -15 -35 -15 D3-Thioridazine 374.20 129.20 -15 -35 -15 D4-Zuclopenthixol 405.10 231.00 -15 -35 -15 *定量离子对 1.3样品前处理方法 参考德国 RECIPE《血清/血浆中精神安定剂药物试剂盒使用指南》，进行样品制备。 该试剂盒包含以下部分： 基质标准品：3个水平的人血浆基质加标冻干粉 质控品：2个水平的人血浆基质加标冻干粉 内标：含D3-Sulpiride、D3-Olanzapine 等22种同位素标记的内标的冻干粉 优化用混标：冻干粉 蛋白沉淀剂：乙腈-甲醇=9：1配制 50mL 基质标准品 (Level0~ 3)和质控品(Level I、Levelll)： 1.0mL纯水溶解，涡旋混匀15 min。 内标工作液：准确加入5.0mL蛋白沉淀剂，混匀，超声 15 min。 优化用混标：加入2.0mL流动相B，混匀。 基质标准品、质控品和样品前处理方法： (1)、吸取对照品、质控品或血清样品50uL至离心管；(2)、吸取内标工作液沉淀剂100 uL 至离心管进行沉淀蛋白；(3)、震摇90秒；(4)、10000 rpm 离心3 min；\(5)、取上清液转移至进样小瓶，进样1uL。 ■分析结果 2.1基质标准品色谱图 图125种精神安定剂药定量下限色谱图 2.2线性范围 RECIPE试剂盒中各级别基示标品浓度和线性回归各浓度的准确度如表3所示，利用内标法制作校准曲线，线性良好，线性方程、相关系数见图2。 表3.25种精神安定剂药基质标曲浓度范围和标线准确度 Compounds 基质标曲浓度(nmol/L) 准确度(%) Calibratorl Calibrator2 Calibrator3 Sulpiride 162.30 1，095.21 3.402.13 98.0~101.4 Olanzapine 23.62 154.31 471.37 95.8~103.1 9-Hydroxyrisperidone 15.91 103.96 317.88 98.1~101.4 Risperidone 15.39 111.99 334.81 96.8~104.7 Clozapine 166.33 1，339.34 3，664.15 95.0~107.7 Quetiapine 83.13 468.25 1，546.94 89.7~106.3 Promethazine 69.29 533.05 1，427.76 94.8~109.2 Aripiprazole 118.70 852.02 2，478.49 97.3~105.6 Levomepromazine 25.83 184.73 553.46 99.3~100.9 Chlorpromazine 56.71 411.40 1，160.57 98.0~103.9 Zotepine 27.27 183.27 563.47 98.1~103.0 Amisulpride 102.83 661.37 2，059.52 95.9~102.8 Ziprasidone 40.05 287.03 804.79 98.4~102.1 chlorprothixene 53.00 426.40 1，169.88 94.5~108.2 Dehydroaripiparzole 22.69 168.25 479.23 96.6~105.8 Desmethylolanzapine 25.54 144.44 511.64 87.5~113.0 092 0 214 052 214 009 24 005 052 -000 -00 -00 0 50 100 150 浓度比 图225种精神安定剂药基质标曲相关信息 2.3质控样品检测结果 试剂盒 RECIPE 提供2个不同浓度质控样品QC1和QC2，标示浓度和允许波动范围如表4所示，实际检测浓度在允许波动范围内(表4)。 化合物 允许波动范围(nmol/L) 实测浓度(nmol/L) QC1 QC2 QC1 QC2 Sulpiride 502-753 1199-1768 607.53 1426.46 Olanzapine 71.7-108 170-255 84.99 224.77 9-Hydroxyrisperidone 47.5-71.2 113-169 57.48 136.54 Risperidone 49.7-74.5 113-170 59.08 141.10 Clozapine 549-824 1284-1925 744.11 1724.65 Quetiapine 244-365 562-842 291.65 630.83 Promethazine 213-320 505-758 294.11 654.21 Aripiprazole 386-579 881-1321 486.67 1122.70 Levomepromazine 80.6-121 195-293 110.68 228.33 Chlorpromazine 174-261 418-627 236.33 547.49 Zotepine 82.2-123 188-482 108.12 260.88 Amisulpride 298-448 699-1049 360.08 827.08 Ziprasidone 126-189 304-456 149.28 405.18 Chlorprothixene 167-251 396-594 207.15 563.20 Dehydroaripiparzole 67.1-101 156-233 93.66 209.29 Desmethylolanzapine 75.9-114 179-269 102.51 238.13 Melperone 116-175 276-414 139.00 313.77 Norclozapine 480-720 1137-1706 671.62 1404.44 Norquetiapine 94.5-142 222-333 116.73 262.04 Perazine 218-327 510-765 258.28 709.48 Pipamperone 255-383 602-904 315.17 720.93 Prothipendyl 11.2-16.8 26.4-39.6 14.68 33.59 Sertindole 74.1-111 174-262 96.06 213.02 Thioridazine 160-240 390-585 210.68 489.66 Zuclopenthixol 29.1-43.6 66.6-99.9 33.98 88.48 2.4 精密度结果 表5质控精密度结果表 化合物 保留时间RSD%(n=6) 浓度RSD% (n=6) QC1 QC2 QC1 QC2 Sulpiride 0.07 0.03 3.09 3.28 Olanzapine 0.05 0.05 3.58 3.24 9-Hydroxyrisperidone 0.03 0.02 3.00 2.91 Risperidone 0.02 0.03 3.68 2.55 Clozapine 0.02 0.02 4.26 3.25 Quetiapine 0.02 0.05 3.80 2.49 Promethazine 0.03 0.03 4.10 5.87 Aripiprazole 0.05 0.02 3.79 4.94 Levomepromazine 0.04 0.01 4.73 4.96 Chlorpromazine 0.02 0.02 5.47 1.30 Zotepine 0.03 0.02 5.16 7.00 Amisulpride 0.06 0.06 0.77 1.32 Ziprasidone 0.04 0.03 4.02 2.47 Chlorprothixene 0.04 0.03 4.48 3.59 Dehydroaripiparzole 0.03 0.04 4.13 1.90 Desmethylolanzapine 0.16 0.08 6.23 6.28 Melperone 0.03 0.02 2.35 6.36 Norclozapine 0.04 0.03 4.47 2.59 Norquetiapine 0.05 0.03 5.62 6.99 Perazine 0.03 0.02 6.08 1.91 Pipamperone 0.03 0.03 3.88 2.62 Prothipendyl 0.06 0.03 6.84 3.86 Sertindole 0.01 0.02 3.63 2.99 Thioridazine 0.02 0.02 3.66 3.15 Zuclopenthixol 0.05 0.03 6.47 6.78 ■结论 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A CL 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 CL 联用在11分钟内完成血浆中25种精神安定剂类药物的检测方法。此方法所有待测化合物的线性关系良好，线性相关系数均大于0.99；低，高两个浓度水平的质控测定值均在试剂盒规定范围内，满足要求，保留时间和含量相对标准偏差分别在0.07~0.16%和1.91~7.00%之间，仪器和方法的准确性和精密度良好。该方法可为临床同时快速、准确检测多种血浆中精神安定剂类药物提供参考。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center t-SWSWpuaps ui abuajjaoxinzavWIHS罗田 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜宜路B栋咨询电话：otline：uilding B， No.Yizhou Road，Shanghai 此应用在11min内同时准确，快速检测血浆中25种精神安定剂药物。结果显示，25种精神安定剂类药物线性良好；低、高两个浓度水平的质控品均在试剂盒允许范围内，精密度实验结果良好。该方法可用为临床同时快速、准确定量多种精神安定剂药物提供参考，协助医生及时调整临床用药剂量，保障临床治疗效果。