饲料中泛酸检测方案(气相色谱仪)

【仪电分析】预混合饲料中泛酸的测定-高效液相色谱法 泛酸又叫维生素B5， 是-一种水溶性维生素，在饲料工业用作维生素添加剂，提高动物对病原体的抵抗力。还能调节蛋白质、碳水化合物及脂肪的代谢，保持皮肤和黏膜，改善毛发(或羽色)色泽以及预防疾病的发生，特别是对家禽家畜及鱼科类动物生长发育、脂肪的合成和分解，对泛酸的需求是必不可少的。 本方法适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。参考标准 GB/T18397-2014《预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法》。 一、方法原理 维生素预混料用流动相提取，试液注入高效液相色谱柱，用紫外检测器在 200nm处测定，外标法计算泛酸的含量。 二、主要仪器及试剂 a. 高效液相色谱仪：L220，带紫外检测器； b. 超声波水浴； c. 自动进样器； d. 离心机(3000 r/min)； e. 电子天平； f. 样品筛。 三、实验方法 3.1色谱参考条件 色谱柱： C18， 4.6 mmx250 mmx5um； 进样量：10pL； 流动相流速：：1.0mL/min： 柱温：室温；；波长：200nm； 3.2流动相配制 将50mL的乙腈加入到950 mL 0.05%磷酸溶液中混匀。 3.3泛酸标准工作液配制 将 20 mg 泛酸钙(泛酸=0.920×泛酸钙)标准物溶于 50 mL 棕色容量瓶中，用流动相定容，使该标准储备液中泛酸的浓度为 368 ug/mL。置4℃冰箱保存，可保存期3个月。 分别准确吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0mL、5.0mL、10.0 mL、20mL于50 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，得到浓度为 3.68 ug/mL、7.36 ug/mL、14.72 ug/mL、36.8 ug/mL、73.6ug/mL、147.2 ug/mL 的标准泛酸工作液。 3.4试样溶液的制备 称取维生素混合饲料0.10g，精确至0.0001 g， 置于 50 mL 棕色容量瓶中，加入20 mL流动相，在超声波提取器中超声提取 15 min (中间旋摇一次以防样品附着瓶茋)，取适量溶液离心后取上清液，过滤，滤液过 0.45 um (或0.20pm)滤膜，i再用流动相稀释5倍，待上机。 测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间按定性，外标峰面积法定量。 四、实验结果 4.1泛酸工作曲线 泛酸工作曲线见图1： 泛酸标准曲线 图1泛酸工作曲线 4.2标样色谱图 浓度为 73.6 ug/mL 的泛酸标准工作液色谱图见图2： [mV] 图2泛酸标准工作液谱图 4.3预混料实际样品色谱图 样品色谱图见图3： [mV] 图3样品色谱图 4.4数据计算 平均峰面积： S=(Si+S2+S3)-3=(757783.688+774184.813+773599.375)-3=768522.625 样品溶液中含泛酸浓度： y=0.00017X-1.7579=128.89 ug/mL 0.1g样品中含泛酸的质量： m=y×5×20=12.889 mg 该饲料中泛酸含量： w=128.89 g/kg 【仪电分析】预混合饲料中泛酸的测定-高效液相色谱法泛酸又叫维生素B5，是一种水溶性维生素，在饲料工业用作维生素添加剂，提高动物对病原体的抵抗力。还能调节蛋白质、碳水化合物及脂肪的代谢，保持皮肤和黏膜，改善毛发（或羽色）色泽以及预防疾病的发生，特别是对家禽家畜及鱼科类动物生长发育、脂肪的合成和分解，对泛酸的需求是必不可少的。本方法适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。参考标准GB/T 18397-2014《预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》。一、方法原理 维生素预混料用流动相提取，试液注入高效液相色谱柱，用紫外检测器在200nm处测定，外标法计算泛酸的含量。二、主要仪器及试剂a. 高效液相色谱仪：L220，带紫外检测器；b.    超声波水浴；c. 自动进样器；d. 离心机（3000 r/min）； e. 电子天平；f. 样品筛。三、实验方法3.1 色谱参考条件色谱柱：C18，4.6 mm×250 mm×5μm；进样量：10 μL；流动相流速：1.0 mL/min；柱温：室温；波长：200 nm；3.2 流动相配制 将50 mL的乙腈加入到950 mL 0.05%磷酸溶液中混匀。3.3 泛酸标准工作液配制将20 mg泛酸钙（泛酸=0.920×泛酸钙）标准物溶于50 mL棕色容量瓶中，用流动相定容，使该标准储备液中泛酸的浓度为368 μg/mL。置4 ℃冰箱保存，可保存期3个月。分别准确吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL、20 mL于50 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，得到浓度为3.68 μg/mL、7.36 μg/mL、14.72 μg/mL、36.8 μg/mL、73.6μg/mL、147.2 μg/mL的标准泛酸工作液。3.4 试样溶液的制备称取维生素混合饲料0.10 g，精确至0.0001 g，置于50 mL棕色容量瓶中，加入20 mL流动相，在超声波提取器中超声提取15 min（中间旋摇一次以防样品附着瓶底），取适量溶液离心后取上清液，过滤，滤液过0.45 μm（或0.20 μm）滤膜，再用流动相稀释5倍，待上机。测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间按定性，外标峰面积法定量。四、实验结果4.1 泛酸工作曲线泛酸工作曲线见图1：图1 泛酸工作曲线4.2 标样色谱图浓度为73.6 μg/mL的泛酸标准工作液色谱图见图2：图2 泛酸标准工作液谱图4.3 预混料实际样品色谱图样品色谱图见图3： 图3 样品色谱图4.4 数据计算平均峰面积：S=（S1+S2+S3）÷3=（757783.688+774184.813+773599.375）÷3=768522.625样品溶液中含泛酸浓度：y=0.00017X-1.7579=128.89 μg/mL0.1 g样品中含泛酸的质量：m=y×5×20=12.889 mg该饲料中泛酸含量：w=128.89 g/kg