维生素B1又名硫胺素或抗神经炎素,是最早发现的维生素之一,由吡啶环和噻唑环结合而成的一种B族维生素。动物缺乏维生素B1,碳水化合物就不能进行正常代谢,丙酮酸和乳酸在体内积聚,造成对神经系统、血液循环、消化系统等的机能障碍。
本方法参考GB/T 14700-2018《饲料中维生素B1的测定》,适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中维生素B1的测定。
【仪电分析】预混合饲料中维生素Bi的测定高效液相色谱法 维生素Bi又名硫胺素或抗神经炎素,是最早发现的维生素之一,由吡啶环和噻唑环结合而成的一种B族维生素。动物缺乏维生素Bi,碳水化合物就不能进行正常代谢,丙酮酸和乳酸在体内积聚,造成对神经系统、血液循环、消化系统等的机能障碍。 本方法参考GB/T 14700-2018《饲料中维生素Bi的测定》,适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中维生素B1的测定。 一、方法原理 维生素预混料用流动相提取,试液注入高效液相色谱柱,用紫外检测器在 242 nm 处测定,外标法计算维生素Bi的含量。 二、主要仪器及试剂 a. 高效液相色谱仪:L220,带紫外检测器; b. 超声波水浴; c. 自动进样器; d. 电子天平; e. 针式过滤器; f. 离心机。 三、实验方法 3.1色谱参考条件 色谱柱:: Welch C18, 200mmx4.6 mmx5um; 进样量:20pL; 流速:11.0 mL/min: 柱温:28℃; 波长:242 nm; 3.2流动相配制 称取庚烷磺酸钠1.1 g、50 mg EDTA于 1000 mL 容量瓶中,加入约1000mL水,同时加入25 mL冰乙酸、约10 mL三乙胺,超声使固体溶解, pH计调节溶液 pH为3.7,过0.45um滤膜过滤3-5次至泡沫明显减少,取800 mL 该溶液, 与200 mL 甲醇混合既得,超声脱气30 min 冷却至室温待用。 3.2维生素Bi标准工作液配制 维生素Bi标准贮备液:取维生素Bi标准品(纯度大于99%)0.01g(精确至0.0001g),溶解于酸性20%乙醇溶液(pH=3.5-4.3)中并定容至100 mL, 盛于棕色瓶中,4℃冰箱保存,可使用3个月。该溶液含 0.1 mg/mL 维生素 Bi. 维生素Bl标准工作液:准确吸取5mL 维生素Bl标准贮备液于 50 mL 棕色容量瓶中,用流动相定容至刻度,该标准工作液浓度为1000 ug/mL, 该溶液存于2℃~8℃冰箱可以使用48h。 用标准工作液梯度稀释至100 ug/mL、50 ug/mL、20 ug/mL、10 ug/mL、5 ug/mL。 3.3试样溶液的制备 维生素预混合饲料提取液:称取50mg EDTA于1000 mL容量瓶中,加入约1000 mL去离子水,同时加入25 mL 冰乙酸、约10mL三乙胺,超声使固体溶解,调节溶液 pH=3~4,过0.45 um 滤膜,取800 mL 该溶液, 与200 mL甲醇混合既得。 称取试样0.05g(精确到0.0001g), 置于25 mL棕色容量瓶中,加入提取液约40 mL,边加边摇匀,置于超声水浴中超声提取 15 min, 期间摇动2次,冷却,用提取液定容至刻度,摇匀。取少量溶液于离心机上4000 r/min 离心10 min, 上清液过 0.45 um 微孔滤膜,上HPLC测定。 测定:取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间定性,峰面积外标法定量。 四、实验结果 4.1标准工作曲线 维生素Bi工作曲线见图1: 维生素B,标准曲线 峰面积 图1标准工作曲线 4.2标准工作液色谱图 标准工作液色谱图见图2: 图2标准工作液色谱图 4.3预混料实际样品色谱图 实际样品色谱图见图3: [mV 图3实际样品色谱图 4.4计算 y=1509141.25×0.00003-1.0258=44.25 pg/mL 0.05g样品中含维生素 Bi: 44.25×25=1106.25 ug=1.10625 mg 1kg 样品中含维生素Bi: 1.10625×20=22.125 mg/g=22.125 g/kg 【仪电分析】预混合饲料中维生素B1的测定高效液相色谱法维生素B1又名硫胺素或抗神经炎素,是最早发现的维生素之一,由吡啶环和噻唑环结合而成的一种B族维生素。动物缺乏维生素B1,碳水化合物就不能进行正常代谢,丙酮酸和乳酸在体内积聚,造成对神经系统、血液循环、消化系统等的机能障碍。本方法参考GB/T 14700-2018《饲料中维生素B1的测定》,适用于复合预混料饲料、维生素预混合饲料中维生素B1的测定。一、方法原理 维生素预混料用流动相提取,试液注入高效液相色谱柱,用紫外检测器在242 nm处测定,外标法计算维生素B1的含量。二、主要仪器及试剂a. 高效液相色谱仪:L220,带紫外检测器; b. 超声波水浴;c. 自动进样器;d. 电子天平;e. 针式过滤器;f. 离心机。三、实验方法3.1 色谱参考条件色谱柱:Welch C18, 200mm×4.6 mm×5μm;进样量:20 μL;流速:1.0 mL/min;柱温:28 ℃;波长:242 nm;3.2 流动相配制 称取庚烷磺酸钠1.1 g、50 mg EDTA于1000 mL容量瓶中,加入约1000 mL水,同时加入25 mL冰乙酸、约10 mL三乙胺,超声使固体溶解,pH计调节溶液pH为3.7,过0.45μm滤膜过滤3-5次至泡沫明显减少,取800 mL该溶液,与200 mL甲醇混合既得,超声脱气30 min冷却至室温待用。3.2 维生素B1标准工作液配制维生素B1标准贮备液:取维生素B1标准品(纯度大于99%)0.01g(精确至0.0001g),溶解于酸性20%乙醇溶液(pH=3.5-4.3)中并定容至100mL,盛于棕色瓶中,4℃冰箱保存,可使用3个月。该溶液含0.1mg/mL维生素B1。维生素B1标准工作液:准确吸取5 mL维生素B1标准贮备液于50 mL棕色容量瓶中,用流动相定容至刻度,该标准工作液浓度为1000μg/mL,该溶液存于2 ℃~8 ℃冰箱可以使用48h。用标准工作液梯度稀释至100 μg/mL、50 μg/mL、20 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL。3.3 试样溶液的制备维生素预混合饲料提取液:称取50 mg EDTA于1000 mL容量瓶中,加入约1000 mL去离子水,同时加入25 mL冰乙酸、约10mL三乙胺,超声使固体溶解,调节溶液pH=3~4,过0.45 μm 滤膜,取800 mL该溶液,与200 mL甲醇混合既得。称取试样0.05 g(精确到0.0001g),置于25mL棕色容量瓶中,加入提取液约40 mL,边加边摇匀,置于超声水浴中超声提取15min,期间摇动2次,冷却,用提取液定容至刻度,摇匀。取少量溶液于离心机上4000r/min离心10 min,上清液过0.45μm微孔滤膜,上HPLC测定。测定:取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间定性,峰面积外标法定量。四、实验结果4.1 标准工作曲线维生素B1工作曲线见图1: 图1 标准工作曲线4.2 标准工作液色谱图标准工作液色谱图见图2: 图2 标准工作液色谱图4.3 预混料实际样品色谱图实际样品色谱图见图3: 图3 实际样品色谱图4.4 计算y=1509141.25×0.00003-1.0258=44.25μg/mL0.05g样品中含维生素B1:44.25×25=1106.25μg=1.10625 mg1kg样品中含维生素B1:1.10625×20=22.125 mg/g=22.125 g/kg
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上海仪电分析仪器有限公司为您提供《饲料中维生素B1检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于饲料中营养成分检测,参考标准--,《饲料中维生素B1检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有上海仪电分析-LC220液相色谱仪(LC)