雨生红球藻粉中虾青素检测方案(液相色谱仪)

【仪电分析】雨生红球藻粉中虾青素的测定-液相色谱法 虾青素是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一，具有许多重要的生物学功能，可作为维生素A原，抗氧化性强于β-胡萝卜素和维生素E， 虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等。 一、方法原理 用甲醇-二氯甲烷(体积比3：1)的混合溶剂，在恒温水浴振荡器中振荡后低温下离心，重复2-3次，收集上清液，，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 二、主要仪器及试剂 a.高效液相色谱仪： LC220； b.针式过滤器； c.电子天平； d.高速冷冻离心机； e.水浴恒温振荡器； f.虾青素标准品； g.甲醇：色谱纯； h.二氯甲烷：分析纯。 三、实验方法 3.1参考色谱条件 色谱柱 C18(250mmx4.6mm×5um) 流速 1.0mL/min 波长 478nm 柱：温 30°C 进样量 20pL 流动相 甲醇 3.2标准溶液配制 a.准确称取10.0 mg虾青素标准品，用甲醇-二二甲烷(体积比为3：1) 溶剂定容于100mL的棕色容量瓶中，制得 100mg/mL 虾青素储备液，密封冷藏备用。 b.取6个洁净的1ml容量瓶，预先加入适量的甲醇-二氯甲烷(体积比为3：1)溶剂，然后分别加入10pL、20uL、40uL、60uL、80 uL、100pL的虾青素标准储备液，配制成虾青素浓度分别为 1ug/mL、2ug/mL、4ug/mL、6pg/mL、8ug/mL、10pg/mL 的标准系列，按参考的色谱条件进样，以虾青素的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制线性回归方程，由色谱工作站处理数据得到的回归方程。 3.3样品预处理 用二次蒸馏水将雨生红球藻粉样品水洗3次后冷冻干燥，称取5g已除去水分的藻粉于具塞三角瓶中，加入甲醇-二氯甲院(体积比为3：1)的混合溶剂50 mL， 同时加10颗玻璃珠，最后将三角瓶外罩褐色塑料薄膜，放入40℃的水浴恒温振荡器中振荡 30min，提取液在低温下离心20 min， 将上清液转移至另一三角瓶中。重复以上的提取步骤2~3次，直至藻粉中的色素基本提取完全，藻粉沉淀呈土灰色。收集所有的上清液，混合，低温冷藏待测。 四、实验结果 4.1标准工作曲线 虾青素的标准工作曲线如图1所示： 图1虾青素标准工作曲线 4.2标准样品色谱图 浓度为 10mg/L 青虾青素标准溶液的色谱图如图2所示： [mV] 图2浓度为10mg/L 的虾青素标准溶液色谱图 4.3实际样品测试 取某样品经前处理，测试结果未检出。 【仪电分析】雨生红球藻粉中虾青素的测定-液相色谱法虾青素是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一，具有许多重要的生物学功能，可作为维生素A原，抗氧化性强于β -胡萝卜素和维生素E，虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等。一、方法原理用甲醇-二氯甲烷（体积比3:1）的混合溶剂，在恒温水浴振荡器中振荡后低温下离心，重复2-3次，收集上清液，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 二、主要仪器及试剂a. 高效液相色谱仪：LC220； b. 针式过滤器；c. 电子天平；d. 高速冷冻离心机；e. 水浴恒温振荡器；f. 虾青素标准品； g. 甲醇：色谱纯；h. 二氯甲烷：分析纯。 三、实验方法3.1 参考色谱条件色谱柱C18（250mm×4.6mm×5μm）流  速1.0 mL/min波  长478nm柱  温30℃进样量20μL流动相甲醇3.2 标准溶液配制a. 准确称取10.0 mg虾青素标准品，用甲醇-二氯甲烷（体积比为3:1）溶剂定容于100 mL的棕色容量瓶中，制得100mg/mL虾青素储备液，密封冷藏备用。b. 取6个洁净的1ml容量瓶，预先加入适量的甲醇-二氯甲烷（体积比为3:1）溶剂，然后分别加入10μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL的虾青素标准储备液，配制成虾青素浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL的标准系列，按参考的色谱条件进样，以虾青素的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制线性回归方程，由色谱工作站处理数据得到的回归方程。3.3 样品预处理用二次蒸馏水将雨生红球藻粉样品水洗3次后冷冻干燥，称取5 g已除去水分的藻粉于具塞三角瓶中，加入甲醇-二氯甲院（体积比为3:1）的混合溶剂50 mL，同时加10颗玻璃珠，最后将三角瓶外罩褐色塑料薄膜，放入40℃的水浴恒温振荡器中振荡30min，提取液在低温下离心20 min，将上清液转移至另一三角瓶中。重复以上的提取步骤2~3次，直至藻粉中的色素基本提取完全，藻粉沉淀呈土灰色。收集所有的上清液，混合，低温冷藏待测。四、实验结果4.1 标准工作曲线虾青素的标准工作曲线如图1所示：  图1 虾青素标准工作曲线4.2 标准样品色谱图浓度为10mg/L的虾青素标准溶液的色谱图如图2所示： 图2 浓度为10mg/L的虾青素标准溶液色谱图4.3 实际样品测试取某样品经前处理，测试结果未检出。