饲料中百里香酚检测方案(气相色谱仪)

【仪电分析】饲料中百里香酚的测定-气相色谱法 百里香酚是--种从百里香和牛至中分离出来的天然酚类物质，主要应用于传统医学、食品和化妆品工业中。近年来，百里香酚作为一种极具潜力的、安全的饲用抗生素替代品而备受关注。百里香酚是一种纯天然的植物提取物，具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种活性，在动物生产中具有很大潜力。但有研究发现，百里香酚对动物皮层和黏膜等组织有刺激作用，浓度过高还会损坏肝脏和肾脏，因此使用时需注意用量。 一、方法原理 试样中的百里香酚经乙酸乙酯提取后，经无水硫酸钠、N-丙基乙二胺和石墨化炭黑分散固体萃取净化，用配有氢火焰离子化 FID 检测器的气相色谱仪检测，外标法定量。 二、主要仪器及试剂 a.气相色谱仪： GC128.冬cm检. b.微孔滤膜：0.45um滤膜有机相； c.电子天平； d.离心机； e.乙酸乙酯：色谱纯 f. 百里香酚标准贮备液：准确称取百里香酚0.25 g， 置于25 ml 棕色容量瓶中，用色谱纯乙酸乙酯溶解并定容到刻度，混匀，4℃下保存。该贮备液浓度为 10 mg/ml， 有效期为三个月。 g.标准中间溶液：移取标准储备液5ml， 置于50m 棕色容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容到刻度，混匀， 4℃下保存。该中间液浓度农1 mg/ml， 有效期为两周。 h.标准工作液：准确移取标准中间溶液适量，用色谱纯乙酸乙酯稀释至浓度分别为1ug/ml、10pg/ml、50pg/ml、100pg/ml、400ug/ml 的标准工作溶液。现用现配。 三、实验方法 3.1色谱参考条件 色谱柱： HP-5，30mx0.32mmx0.25um； 进样口温度：250℃； 柱温：起始温度80℃，保持 1min， 以10℃/min 升至200℃， 5℃/min 升至145℃，35℃/min 升至250℃，保持2min； 检测器温度：300℃； 进样方式：分流进样； 分流比：10：1； 进样量：1u1. 3.2试样溶液的制备 称取一定量试样置于 50mL 离心管中，加入20ml乙酸乙酯，超声波提取90min， 温度不超过30℃，其间用手摇动两次，以4000r/min 离心1min，待净化。取 1ml提取液与存有50mg 无水硫酸钠、50mgPSA、50mgGCB的2ml离心管，涡旋混合30s， 0.45 u.m 滤膜过滤。供上机测定 测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入气相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。 3.3结果计算 试样中百里香酚的含量按下式进行计算。 式中： X——试样中百里香酚的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) C-标准曲线上查得百里香酚酚浓度为微克每毫升(ng/ml) V—试样溶解定容体积， 单位为毫升(mL) n——试样稀释倍数 m——试样质量，单位为克(g)。 计算结果保留三位有效数字。 四、实验结果 4.1标准工作曲线 百里香酚的标准工作曲线如图1所示： 图1百里香酚标准工作曲线 4.2百里香酚标准溶液谱图 浓度为 50 ug/mL 的百里香酚标准溶液谱图如图2所示： 图2标准溶液谱图 【仪电分析】饲料中百里香酚的测定-气相色谱法百里香酚是一种从百里香和牛至中分离出来的天然酚类物质，主要应用于传统医学、食品和化妆品工业中。近年来，百里香酚作为一种极具潜力的、安全的饲用抗生素替代品而备受关注。百里香酚是一种纯天然的植物提取物，具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种活性，在动物生产中具有很大潜力。但有研究发现，百里香酚对动物皮层和黏膜等组织有刺激作用，浓度过高还会损坏肝脏和肾脏，因此使用时需注意用量。一、方法原理    试样中的百里香酚经乙酸乙酯提取后，经无水硫酸钠、N-丙基乙二胺和石墨化炭黑分散固体萃取净化，用配有氢火焰离子化FID检测器的气相色谱仪检测，外标法定量。二、主要仪器及试剂a. 气相色谱仪：GC128，配备FID检测器； b. 微孔滤膜：0.45μm滤膜有机相；c. 电子天平；d. 离心机；e．乙酸乙酯：色谱纯f. 百里香酚标准贮备液：准确称取百里香酚0.25 g，置于25 ml棕色容量瓶中，用色谱纯乙酸乙酯溶解并定容到刻度，混匀，4℃下保存。该贮备液浓度为10 mg/ml，有效期为三个月。g. 标准中间溶液：移取标准储备液5ml，置于50m棕色容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容到刻度，混匀， 4℃下保存。该中间液浓度为1 mg/ml，有效期为两周。h. 标准工作液：准确移取标准中间溶液适量，用色谱纯乙酸乙酯稀释至浓度分别为1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、400μg/ml的标准工作溶液。现用现配。三、实验方法3.1 色谱参考条件色谱柱：HP-5，30m×0.32mm×0.25μm；进样口温度：250℃；柱温：起始温度80℃，保持1min，以10℃/min升至200℃，5℃/min升至145℃，35℃/min升至250℃，保持2min；检测器温度：300℃；进样方式：分流进样；分流比：10﹕1；进样量：1μl。3.2 试样溶液的制备称取一定量试样置于50mL离心管中，加入20ml乙酸乙酯，超声波提取90min，温度不超过30℃，其间用手摇动两次，以4000r/min离心1min，待净化。取1ml提取液与存有50mg无水硫酸钠、50mgPSA、50mgGCB的2ml离心管，涡旋混合30s，0.45 μm滤膜过滤。供上机测定测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入气相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。3.3 结果计算试样中百里香酚的含量按下式进行计算。X =   式中：X——试样中百里香酚的含量，单位为毫克每千克(mg／kg)C——标准曲线上查得百里香酚的浓度为微克每毫升(μg／ml)V——试样溶解定容体积，单位为毫升（mL）n——试样稀释倍数m——试样质量，单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。四、实验结果4.1 标准工作曲线百里香酚的标准工作曲线如图1 所示： 图1 百里香酚标准工作曲线4.2 百里香酚标准溶液谱图浓度为50 μg/mL的百里香酚标准溶液谱图如图2所示：图2 标准溶液谱图