化妆品中苯酚、氢醌检测方案(液相色谱仪)

【仪电分析】化妆品中苯酚、氢醌的测定-液相色谱法 苯酚、氢醌具有一定美白、祛斑的功效，但由于其具有很大的毒性和刺激性，长时间使用会引起皮肤病变和全身性副作用。研究表明，苯酚属高毒类化合物，对细胞有直接毒害作用，能使黏膜、心血管和中枢神经系统受到腐蚀、损害和抑制；而氢醌可对许多系统及器官产生毒害作用，具有作用机制多、遗传后果多的特点。我国《化妆品安全技术规范》中规定美白祛斑类化妆品中禁用苯酚和氢醌。 本方案参考《化妆品安全技术规范》中2.26氢醌、苯酚第三法：高效液相色谱法，本方法适用于祛斑类化妆品和香波中氢醌、苯酚含量的测定。 一、方法原理 样品中氢醌、苯酚经甲醇提取，用高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量。 二、主要仪器及试剂 a.高效液相色谱仪：LC220，配备紫外检测器； b.自动进样器： AS2000； c.色谱柱： C18，4.6mmx250mm，粒径为5um； d.分析天平； e.超声波清洗机； f.甲醇：色谱纯； g.氢醌、苯酚混合标准溶液： p=1000 ug/mL， 有证标准溶液。 三、实验方法 3.1参考色谱条件 色谱柱 C18 (250mmx4.6mm×5um) 流速 1.0mL/min 波长 280nm 柱温 室温 进样量 5uL 流动相 甲醇：水=60：40 3.2标准曲线的绘制 取5个洁净的1ml容量瓶，预先加入适量的甲醇溶液，分别移取OpL、10pL、50pL、100pL、200uL的混合标准溶液，然后用甲醇定容至刻度线。配制成含氢醌和苯酚的质量浓度分别为 0.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L 的混合标准系列溶液。按照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析，以目标化合物的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。 3.3样品预处理 称取样品1g(精确到0.001g)于具塞比色管中，必要时在水浴上蒸馏除乙醇等挥发性有机溶剂，用甲醇定容至10mL，常温超声提取 15min， 取上清液经0.45 um 滤膜过滤，滤液作为样品待测溶液。 四、实验结果 4.1标准工作曲线 苯酚的标准工作曲线如图1所示，氢醌的标准工作曲线如图2所示： 图1苯酚标准工作曲线 图2氢醌标准工作曲线 4.2标准样品色谱图 浓度为 200mg/L的混合标准溶液的色谱图如图3所示： [mV] 图3浓度为200mg/L 的混合标准溶液色谱图 4.3样品色谱图 样品经前处理，按照仪器参考条件分析测定，色谱图如图4所示： 图4样品色谱图 4.4结果计算 式中：ω一样品中氢醌或苯酚的质量分数， ug/g； m一样品取样量， g； p一从标准曲线得到待测组分的质量浓度， mg/L； V一样品定容体积，mL。 4.5实际样品测试 对市面上某化妆品进行分析测定，测试结果未检出。 【仪电分析】化妆品中苯酚、氢醌的测定-液相色谱法苯酚、氢醌具有一定美白、祛斑的功效，但由于其具有很大的毒性和刺激性，长时间使用会引起皮肤病变和全身性副作用。研究表明，苯酚属高毒类化合物，对细胞有直接毒害作用，能使黏膜、心血管和中枢神经系统受到腐蚀、损害和抑制；而氢醌可对许多系统及器官产生毒害作用，具有作用机制多、遗传后果多的特点。我国《化妆品安全技术规范》中规定美白祛斑类化妆品中禁用苯酚和氢醌。本方案参考《化妆品安全技术规范》中2.26 氢醌、苯酚 第三法：高效液相色谱法，本方法适用于祛斑类化妆品和香波中氢醌、苯酚含量的测定。一、方法原理样品中氢醌、苯酚经甲醇提取，用高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量。二、主要仪器及试剂a.高效液相色谱仪：LC220，配备紫外检测器；  b.自动进样器：AS2000；c.色谱柱：C18，4.6mm×250mm，粒径为5µm； d.分析天平；e.超声波清洗机；f.甲醇：色谱纯；g.氢醌、苯酚混合标准溶液：ρ=1000 μg/mL，有证标准溶液。三、实验方法3.1 参考色谱条件色谱柱C18（250mm×4.6mm×5μm）流  速1.0mL/min波  长280nm柱  温室温进样量5μL流动相甲醇:水=60:403.2 标准曲线的绘制 取5个洁净的1ml容量瓶，预先加入适量的甲醇溶液，分别移取0μL、10μL、50μL、100μL、200μL的混合标准溶液，然后用甲醇定容至刻度线。配制成含氢醌和苯酚的质量浓度分别为0.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L 的混合标准系列溶液。按照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析，以目标化合物的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。3.3 样品预处理 称取样品1g（精确到0.001g）于具塞比色管中，必要时在水浴上蒸馏除乙醇等挥发性有机溶剂，用甲醇定容至10mL，常温超声提取15min，取上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品待测溶液。四、实验结果4.1 标准工作曲线苯酚的标准工作曲线如图1所示，氢醌的标准工作曲线如图2所示： 图1 苯酚标准工作曲线 图2 氢醌标准工作曲线4.2标准样品色谱图浓度为200mg/L的混合标准溶液的色谱图如图3所示： 图3 浓度为200mg/L的混合标准溶液色谱图4.3 样品色谱图样品经前处理，按照仪器参考条件分析测定，色谱图如图4所示： 图4 样品色谱图 4.4 结果计算式中：w—样品中氢醌或苯酚的质量分数，μg/g；  m—样品取样量，g；ρ—从标准曲线得到待测组分的质量浓度，mg/L；V—样品定容体积，mL。 4.5 实际样品测试对市面上某化妆品进行分析测定，测试结果未检出。