化妆品中6-甲基香豆素检测方案(液相色谱仪)

【仪电分析】化妆品中6-甲基香豆素的测定-液相色谱法 香豆素是一种可以在很多植物中发现的化合物，此外还可以人工合成这种物质。由于具有特殊的气味，很多人喜欢用它作为食品添加剂和香水成分使用。香豆素被视为对肝脏和肾脏存在潜在毒性，有毒理实验发现，香豆素是大鼠的可疑致肿瘤物，此外，对人体肝脏有损伤。因此，香料的安全性将直接影响化妆品的安全性。 本方法参考《化妆品安全技术规范》 (2015版)中第一法：高效液相色谱法，该方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、粉类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。 一、方法原理 样品处理后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 二、主要仪器及试剂 a.高效液相色谱仪： LC220，配备紫外检测器； b.自动进样器： AS2000； c.色谱柱： C18，4.6mmx250mm， 粒径为 5um； d.分析天平； e.离心机； f.超声波清洗机； g.涡旋振荡器； h.甲醇：色谱纯； i.磷酸二氢钠：分析纯； j.6-甲基香豆素：纯度≥99.0%； k.磷酸： 分析纯。 三、实验方法 3.1参考色谱条件 色谱柱 C18(250mmx4.6mmx5um) 流速 1.0mL/min 波长 275nm 柱温 35°℃ 进样量 10uL 流动相 0-11min：55%流动相A； 11-12min：55%→90%流动相A； 12-40min：90%流动相A；40-41min： 90%→55%流动相A； 41-50min：55%流动相A。 流动相A：甲醇。 流动相B：磷酸二氢钠缓冲溶液[c(NaH2PO4)=0.02mol/L，pH=3.5]：称取 3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调 pH 值至3.5。 3.2标准曲线的绘制 3.2.1标准储备溶液I：称取6-甲基香豆素0.1g(精确到 0.0001g)于100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为 1.0mg/mL 的6-甲基香豆素标准储备溶液。 3.2.2标准储备溶液II：精密量取标准储备溶液I5mL 于50mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得浓度为 100ug/mL 的6-甲基香豆素标准储备溶液。 3.3.3标准系列溶液：取6个洁净的10ml容量瓶，预先加入适量的甲醇，然后分别量取10pL、50pL、100pL、300pL、500pL、1000pL 的标准储备溶液Ⅱ，配制成含6-甲基香豆素的质量浓度分别为0.1ug/mL、0.5pg/mL、1.0ug/mL、3.0ug/mL、5.0ug/mL、10.0pg/mL 的标准系列溶液。按照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析，以浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。 3.3样品预处理 称取样品1g(精确到0.001g) 于10mL 容量瓶中，加入5mL甲醇，涡旋振荡使样品与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇稀释至刻度，混匀后转移至10mL刻度离心管中，以 5000r/min 离心 5min。上清液经 0.45um 滤膜过滤，滤液备用。 四、实验结果 4.1标准工作曲线 6-甲基香豆素的标准工作曲线如图1所示： 图16-甲基香豆素示准工作曲线 4.2标准溶液色谱图 浓度为10.0ug/mL 的6-甲基香豆素标准溶液的色谱图如图2所示： 图2浓度为10.0ug/mL 的6-甲基香豆素标准溶液色谱图 4.3样品色谱图 样品经前处理，按照仪器参考条件分析测定，得到的色谱图如图3所示： 图3样品色谱图 4.4结果计算 中： o—-化妆品中6-甲基香豆素的质量分数，%； m—-样品取样量， g； p——从标准曲线得到待测组分的质量浓度， ug/L； -样品定容体积， mL。 4.5实际样品测试 对市面上某化妆品进行分析测定，测试结果未检出。 【仪电分析】化妆品中6-甲基香豆素的测定-液相色谱法香豆素是一种可以在很多植物中发现的化合物，此外还可以人工合成这种物质。由于具有特殊的气味，很多人喜欢用它作为食品添加剂和香水成分使用。香豆素被视为对肝脏和肾脏存在潜在毒性，有毒理实验发现，香豆素是大鼠的可疑致肿瘤物，此外，对人体肝脏有损伤。因此，香料的安全性将直接影响化妆品的安全性。本方法参考《化妆品安全技术规范》（2015版）中第一法：高效液相色谱法，该方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、粉类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。 一、方法原理样品处理后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。二、主要仪器及试剂a.高效液相色谱仪：LC220，配备紫外检测器；  b.自动进样器：AS2000；c.色谱柱：C18，4.6mm×250mm，粒径为5µm； d.分析天平；e.离心机；f.超声波清洗机；g.涡旋振荡器；h.甲醇：色谱纯；i.磷酸二氢钠：分析纯；j.6-甲基香豆素：纯度≥99.0%；k.磷酸：分析纯。 三、实验方法3.1 参考色谱条件色谱柱C18（250mm×4.6mm×5μm）流  速1.0mL/min波  长275nm柱  温35℃进样量10μL流动相0-11min：55%流动相A；11-12min：55%→90%流动相A；12-40min：90%流动相A；40-41min：90%→55%流动相A；41-50min：55%流动相A。流动相A：甲醇。 流动相B：磷酸二氢钠缓冲溶液[c(NaH2PO4)=0.02mol/L，pH =3.5]：称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调pH值至3.5。 3.2 标准曲线的绘制 3.2.1 标准储备溶液Ⅰ：称取6-甲基香豆素0.1g（精确到0.0001g）于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/mL的6-甲基香豆素标准储备溶液。 3.2.2 标准储备溶液Ⅱ：精密量取标准储备溶液Ⅰ 5mL于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得浓度为100µg/ mL的6-甲基香豆素标准储备溶液。3.3.3 标准系列溶液：取6个洁净的10ml容量瓶，预先加入适量的甲醇，然后分别量取10μL、50μL、100μL、300μL、500μL、1000μL的标准储备溶液Ⅱ，配制成含6-甲基香豆素的质量浓度分别为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、3.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的标准系列溶液。按照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析，以浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。3.3 样品预处理 称取样品1g（精确到0.001g）于10mL容量瓶中，加入5mL甲醇，涡旋振荡使样品与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇稀释至刻度，混匀后转移至10mL刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液备用。四、实验结果4.1 标准工作曲线6-甲基香豆素的标准工作曲线如图1所示： 图1 6-甲基香豆素标准工作曲线4.2 标准溶液色谱图浓度为10.0μg/mL的6-甲基香豆素标准溶液的色谱图如图2所示： 图2 浓度为10.0μg/mL的6-甲基香豆素标准溶液色谱图4.3 样品色谱图样品经前处理，按照仪器参考条件分析测定，得到的色谱图如图3所示： 图3 样品色谱图4.4 结果计算式中：ω——化妆品中6-甲基香豆素的质量分数，%；m——样品取样量，g；ρ——从标准曲线得到待测组分的质量浓度，μg/L；V——样品定容体积，mL。 4.5 实际样品测试对市面上某化妆品进行分析测定，测试结果未检出。