饲料中聚醚类抗生素检测方案(液相色谱仪)

ApplicationNews岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司http：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2021年3月400-650-0439 ApplicationNews 高速液相色谱仪 NexeraTMlite/CRB-40 01-00127-CN 用柱后衍生化法分析饲料中的聚醚类抗生素安藤惠美子、寺田英敏 使用益处 可以根据“饲料分析标准”在较宽的浓度范围内对聚醚类抗生素的3种组分进行稳定的定量分析。 与《饲料分析标准》中收载的微生物学定量法相比，操作简单，可快速进行分析。 可实现装置从启动到停止自动化完成，分析时可大幅节省人力，提高效率。 |前言 根据农林省第750号公告”，聚醚类抗生素被指定为饲料添加剂。关于这些组分的分析法，农林水产省消费/安全局长通知的《饲料分析标准》中列出了微生物学定量法、HPLC 法和 LC/MS法”。微生物学定量法需要长时间的预处理，例如，培养试验菌16~24小时，而 HPLC法的平均预处理操作时间为20分钟，可快速得出结果。 在本文中，我们将介绍盐霉素钠(SL)、莫能菌素钠(MN)和那拉霉素(NR)的分析示例，也在 HPLC法中也指定了柱后衍生化可视检测法。此外，将在01-00128-JP上报告中介绍使用指定的荧光检测法分析拉沙洛西钠的示例。 |检测方法原理 本次作为研究对象的3种组分的结构式汝图1所示。通过反相色谱法分离各组分后，在硫酸-甲醇中与图2所示的香草醛(4-羟基-3-甲氧基苯甲醛)进行加热反应 (Komarowsky反应)，在520nm 附近生成吸收最大的衍生化物并进行检测。 图3流路图 表1分析条件 <分离> 系统 Nexera lite 色谱柱 Shim-pack ScepterTM C18-120 (150mm×4.6mmI.D.， 5 pm) 流动相 水/甲醇/乙酸=60：940：1(v：v：v) 流速 0.6 mL/min 柱温 40°℃ 样品瓶 SHIMADZULabTotalTM LC 1.5 mL玻璃 进样瓶 <柱后反应> 反应剂 甲醇/硫酸/香草醛=95：2：3(v：v：w) 流速 0.6 mL/min 反应温度 95℃ 反应盘管 5m x 0.5 mm内径 检测 SPD-40V(惰性电池*3)(灯：W)，检测波 长520nm *1 P/N： 227-31020-05*2 P/N： 227-34001-01*3 P/N： 228-64728-42 标准曲线的线性度和面积重现性 《饲料分析标准》中将所述目标饲料标准溶液的最低浓度规定为0.5 ug(效价)/mL。图4、6、8所示为进样20uL相当于规定浓度一半的0.25 ug (效价)/mL时的色谱图。图5、7、9所示为“饲料分析标准”中所述浓度的范围内创建的各组分的标准曲线。红点表示以《饲料分析标准》中所述饲料为对象基于预处理对各组分的标准值3)进行换算后得到的数值。各组分的线性相关系数大于(r)为0.999，线性良好。表2、3、4所示为对同一小瓶中连续分析6次时各组分的保留时间及峰面积的平均值和重现性(%RSD)。由此得出，即使在低浓度下，也能获得良好的重现性，且系统性能稳定。 0.5mAU SL 0.4 0.3 图6莫能菌素钠的色谱图 面积(x105) (浓度：0.25~20 pg(效价)/mL) 图8那拉霉素的色谱图 面积(x105 图9标准曲线 (浓度：0.25~25ug(效价)/mL) 标准样品的分析 将 SL、MN、NR添加到基于“饲料分析标准”所述目标饲料程序创建的鸟类饲料萃取液中，使其浓度为 0.5 ug(效价)/mL，这相当于标准曲线范围的最低浓度。图10所示 Wie 进样 20 uL该溶液时的色谱图。表5所示为加标回收试验的结果以及未知峰(*)与MN、SL和 NR 各峰之间的分离度(各3次的平均值)。各峰的分离度均大于1.5，加标回收率也获得了良好的结果。 图10添加有聚醚类抗生素3种组分的鸟饲料萃取液的色谱图 表5分离度和加标回收率 分离度 加标回收率(%) MN 1.93* 103.3 SL 3.60 100.6 NR 2.45 104..6 *1：MN与未知谱峰之间的分离度 |结论 在本文中，我们介绍了根据《饲料分析标准》利用柱后衍生化法分析聚醚类抗生素3种组分的示例。可以在较宽的浓度范围内快速获得稳定的定量结果。此外，该装置从启动到停止自动化，有助于提高工作效率。 岛津应用云 1)根据确保饲料安全性及质量改善相关的法律规定来确定饲料添加剂的事项(1976年7月24日农林省公告第750号) 2)饲料分析标准(2008年4月1日/19消安第14729号农林水产省消费/安全局长通知) 3)饲料以及饲料添加剂的组分标准等相关省令(1976年7月24日农林省令第35号)Nexera、Shim-packScepter 以及 SHIMADZULabTotal 是株式会社岛津制作所在日本及其他国家的商标。 ( 免责声明： ) *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 根据农林省第750号公告，聚醚类抗生素被指定为饲料添加剂。关于这些组分的分析法，农林水产省消费/安全局长通知的《饲料分析标准》中列出了微生物学定量法、HPLC法和LC/MS法。微生物学定量法需要长时间的预处理，例如，培养试验菌16~24小时，而HPLC法的平均预处理操作时间为20分钟，可快速得出结果。本文中我们将介绍盐霉素钠（SL）、莫能菌素钠（MN）和那拉霉素（NR）的分析示例，也在HPLC法中也指定了柱后衍生化可视检测法。此外，将在01-00128-JP上报告中介绍使用指定的荧光检测法分析拉沙洛西钠的示例。