化妆水和乳液中米诺地尔检测方案

标准品LC-MS分析图Max. 5.8e5 cps 化妆品中禁用物质米诺地尔的测定 (GB/T35837-2018) 目前米诺地尔是使用最为广泛的皮肤科外用生发产品，是非处方类的外用药，乱用可能会产生一系列的不良反应。 但有一些打着可以生发的化妆品里面也偷偷添加了米诺地尔，一些睫毛膏中也有偷偷使用的情况。因此《化妆品安全技术规范》中规定米诺地尔为禁用物质。 米诺地尔 米诺地尔，化学名为6-(1-哌啶基)-2，4-嘧啶二胺，3-氧化物，为白色或类白色结晶性粉末。实验室参考国标方法 (GB/T 35837-2018)对米诺地尔进行分析，并对方法学进行考察。 高效液相色谱法 CAPCELL PAK C18 ACR 1.1 标准品分析结果 大曹实验室按照国标方法，流动相使用0.3%三氟乙酸溶液，酸性较强，色谱柱选择使用耐酸型色谱柱 CAPCELL PAK C18 ACR S5； 4.6 mm i.d.×250 mm对标准品进行分析，结果下图所示。米诺地尔主峰保留时间5min 左右，理论塔板数7707，不对称因子1.06，峰形良好。 E Minutes HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 ACR S5；4.6 mm i.d.×250mm 流动相：甲醇：0.3%三氟乙酸水溶液=45：55(体积比) 流速：1.0 mL /min 温度：30°C 检测： PDA 230nm 进样量：10pL 浓度：10mg/L，70%甲醇溶解稀释 1.2 方法学考察 标准曲线的绘制： 按照国标方法配制浓度为 0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面面-浓度作图，绘 制标准工作曲线，如下图所示。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数R2=0.9994。 米诺地尔标准曲线 精密度： 连续进样6针标准品溶液 (5mg/L)，计算相对标准偏差，， RRSD=1.39%，精密度良好，结果如下表所示。 精密度结果 序号 峰面积 1588582 2 1641140 3 1619947 4 1589521 5 1605970 6 1584131 平均值 1604881.833 标准偏差 22248.75212 相对标准偏差 RSD 1.39% 检出限和定量限： 计算得到米诺地尔检出限为 0.24 mg/L， 定量限为 0.80 mg/L。 回收率： 按照国标方法分别对乳液和水剂样品进行加标回收实验，添加量为5mg/L， 对空白样品和加标样品进行分析，计算得到回收率结果，如下面两个谱图以及下面的表所示。乳液样品加标回收率为 114.7%，水剂样品加标回收率为 96.0%，回收率较好，无基质干扰。 乳液样品 米诺地尔 样品加标 乳液样品- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14Minutes HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 ACR S5；4.6 mmi.d.×250 mm 流动相：：1甲醇：0.3%三氟乙酸水溶液=45：55(体积比) 流速：1.0mL/min 温度：30°℃ 检测：PDA 230 nm 进样量：10uL 浓度：空白样品和加标样品((乳液、水剂)，添加量5mg/L， 70%溶解样品处理： 乳液：称取0.5g试样(精确值0.001g)置于10mL具塞塑料离心管中，加入1g氯化钠，加入70%甲醇水溶液10mL，摇匀，超声提取20 min， 5000r/min 离心 15min 后，上清液经0.22 um 滤膜过滤即得。 水剂：称取0.5g试样((精确值0.001g) 置于10mL具塞塑料离心管中，加入70%甲醇水溶液10mL，摇匀，超声提取20min， 5000 r/min 离心 15min后，上清液经0.22 um滤膜过滤即得。 回收率结果 样品 峰面积 添加浓度mg/L 计算浓度 mg/L 回收率 乳液样品 1865345 5 5.73 114.7% 水剂样品 1573508 5 4.81 96.0% 液质确认试验 CAPCELL PAK C18 MG III 大曹实验室参考国标附录B确认试验方法，对流动相比例进行调整后，使用低柱流失C18 色谱柱 CAPCELL PAK C18 MG III S3； 2.0 mmi.d.×150 mm 对米诺地尔标准品和加标样品进行分析，结果如下面两张图所示。标准品和加标样品保留和峰形良好。 XIC of +MRM (2 pairs) 210.100/193.100 Da D： 1 from Sample 22 (std-10ppbwater dikte-300ulmin-10%acn-gra-5ul)of Data210220 wiff (Turb 水剂加标分析图(添加量50 ppb) XIC of +MRM (2 pairs) 210 100/193.100 Da D： 1 from Sample 24 (apika sample-10ppbwater dilute-300ulmin-10%acn-gra-5ul)of Data210220 Max 2 465 cps 4.96 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MG III S3； 2.0 mmi.d.×150mm 流动相：A：0.1%甲酸溶液友B：乙腈 B(%)：10%(0 min)→10%(2min)→40%(4min)→40%(6min)→10%(6.1min) 流速：0.3mL /min 温度：40°C 检测：QTRAP 5500；ESI Positive 离子源4500V450°C； MRM210.1>193.1(CE=19) 210.1>164.1(CE=28) DP=60 进样量：5pL 浓度：标准品10 ppb， 水剂样品添加量 50 ppb， 70%溶解，纯水稀释。 总结 参考国标方法 GB/T 35837-2018，使用CAPCELL PAK C18 ACR S5；4.6mm i.d.×250 mm 色谱柱可得到良好分析结果，线性、精密度和回收率良好(HPLC)。。使用 CCAPCELL PAK C18 MG III S3； 2.0 mm i.d.×150 mm色谱柱可完成确认试验 (HPLC-MS)验，分析结果良好。 注：图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。 化妆品中禁用物质米诺地尔的测定（GB/T 35837-2018） 米诺地尔，化学名为6-（1-哌啶基）-2,4-嘧啶二胺,3-氧化物，为白色或类白色结晶性粉末。实验室参考国标方法（GB/T 35837-2018）对米诺地尔进行分析，并对方法学进行考察。 高效液相色谱法 CAPCELL PAK C18 ACR1.1      标准品分析结果大曹实验室按照国标方法，流动相使用0.3%三氟乙酸溶液，酸性较强，色谱柱选择使用耐酸型色谱柱CAPCELL PAK C18 ACR S5; 4.6 mm i.d.×250 mm对标准品进行分析，结果下图所示。米诺地尔主峰保留时间5min左右，理论塔板数7707，不对称因子1.06，峰形良好。HPLC Conditions色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6 mm i.d.×250 mm流动相：甲醇 : 0.3%三氟乙酸水溶液= 45:55（体积比）流速：1.0 mL / min温度：30°C检测：PDA 230nm进样量：10 µL浓度：10mg/L，70%甲醇溶解稀释 1.2      方法学考察标准曲线的绘制：按照国标方法配制浓度为0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线，如下图所示。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数R2=0.9994。  精密度：连续进样6针标准品溶液（5 mg/L），计算相对标准偏差，RSD=1.39%，精密度良好，结果如下表所示。 检出限和定量限：计算得到米诺地尔检出限为0.24 mg/L，定量限为0.80 mg/L。 回收率：按照国标方法分别对乳液和水剂样品进行加标回收实验，添加量为5 mg/L，对空白样品和加标样品进行分析，计算得到回收率结果，如下面两个谱图以及下面的表所示。乳液样品加标回收率为114.7%，水剂样品加标回收率为96.0%，回收率较好，无基质干扰。  HPLC Conditions色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5; 4.6 mm i.d.×250  mm流动相：甲醇 : 0.3%三氟乙酸水溶液=45 : 55（体积比）流速：1.0 mL / min温度：30 °C检测：PDA 230 nm进样量：10 µL浓度：空白样品和加标样品（乳液、水剂），添加量5mg/L，70%溶解样品处理：乳液：称取0.5 g试样（精确值0.001 g）置于10 mL具塞塑料离心管中，加入1 g氯化钠，加入70%甲醇水溶液10 mL，摇匀，超声提取20 min，5000 r/min离心15min后，上清液经0.22 μm滤膜过滤即得。水剂：称取0.5 g试样（精确值0.001 g）置于10 mL具塞塑料离心管中，加入70%甲醇水溶液10 mL，摇匀，超声提取20 min，5000 r/min离心15 min后，上清液经0.22 μm滤膜过滤即得。  液质确认试验 CAPCELL PAK C18 MG III大曹实验室参考国标附录B确认试验方法，对流动相比例进行调整后，使用低柱流失C18色谱柱 CAPCELL PAK C18 MG III S3；2.0 mm i.d.×150 mm对米诺地尔标准品和加标样品进行分析，结果如下面两张图所示。标准品和加标样品保留和峰形良好。  HPLC Conditions色谱柱：CAPCELL PAK C18 MG III S3; 2.0 mm i.d.×150 mm流动相：A:0.1%甲酸溶液 B:乙腈        B(%):10%(0 min)→10%(2min) →40%(4min) →40%(6min) →10%(6.1min)流速：0.3 mL / min温度：40°C检测：QTRAP 5500; ESI Positive 离子源4500V 450°C; MRM 210.1>193.1(CE=19) 210.1>164.1(CE=28) DP=60进样量：5 µL浓度：标准品10 ppb，水剂样品添加量50 ppb，70%溶解，纯水稀释。 总结参考国标方法GB/T 35837-2018，使用CAPCELL PAK C18 ACR S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱可得到良好分析结果，线性、精密度和回收率良好（HPLC）。使用CAPCELL PAK C18 MG III S3; 2.0 mm i.d.×150 mm色谱柱可完成确认试验（HPLC-MS），分析结果良好。 注：图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。