贝类食品中麻痹性贝类毒素检测方案

麻痹性贝类毒素的 LC-MS分析(参考 GB 5009.213-2016) 海洋毒素是由海洋中的有毒藻类通过食物链传递给藻食性的鱼、虾及贝类等生物，并在其体内蓄积形成的有毒高分子化合物。海洋毒素种类繁多，其中贝类毒素是危害较大者之一。 麻痹性贝类毒素是毒性很强的毒素之一，其毒性与河豚毒素相当。这也意味着贝类食品中麻痹类贝类毒素的检测至关重要。 GB5009.213-2016中使用亲水性氨基甲酰键合凝胶柱作为分析色谱柱，需要耗时35min完成一个梯度(见下图)，且峰形略宽。 表3 流动相梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 0.0 30 70 3.0 30 70 3.1 40 60 16.0 40 60 19.0 94 6 23.0 94 6 27.0 30 70 35.0 30 70 10种麻痹性贝类毒素标准溶液的多反应监测色谱图 10种麻痹性贝类毒素标准溶液的多反应监测色谱图见图 G.1。 RT：0.00-20.00 SM：9G 因此，我们在国标条件基础上，筛选了色谱柱，最终选择磷酸胆碱键合的HILIC型色谱柱—―PC HILIC S5；2.0 mm i.d.×150 mm，并对梯度条件进行调节，最终结果如下面的图所示。在 15min 内可以将 10 种贝类毒素良好洗脱，峰形良好，3对同分异构体 GTX1 和 4、GTX2和3以及dcGTX2和3均得到良好分离。 HPLC Conditions： 色谱柱： PC HILIC S5；2.0 mm i.d.×150mm 流动相：A： 10 mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸 B：乙腈 B% 80%(0min) ->80%(2min)->50%(8min)->50%(10min)->80%(10.1min)->80%(15min) 流速：0.4mL/min 温度：35°C 检测： SCIEX 5500； MRM；m/z 数据见国标，CEDP等数值根据仪器调谐 样品浓度：客户提供：GTX1、2、5， dcGTX2，.， neoSTX，， STX， dcSTX200ppb； GTX3 84.8ppb； dcGTX3 58.7ppb； GTX4 63ppb 进样量：5uL 在以上实验的基础上，我们也尝试使用了更高柱效的核壳型 PC 色谱柱--CAP CELL CORE PC S2.7； 2.1 mm i.d.×150 mm 进行分析，该色谱柱具有高柱效低压力的特点，在常压及超高效液相上均可以使用，得到结果如下图所示，色谱峰形较全多孔型色谱柱更好。 HPLC Conditions： 色谱柱： CORE PC S2.7；2.1 mm i.d.×150mm 流动相： A： 10mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸B：：乙腈 B% 80%(0min)->80%(2min)->50%(8min)->50%(10min)->80%(10.1min)->80%(15min) 流速：0.3mL /min 温度：35°C 检测： SCIEX5500； MRM；m/z数据见国标，CEDP等数值根据仪器调谐 样品浓度：客户提供：GTX1、2、5， dcGTX2， neoSTX， STX， dcSTX200ppb； GTX3 84.8ppb； dcGTX3 58.7ppb； GTX4 63ppb 进样量：5pL 在这个实验中，因为使用的 CAPCELL CORE PC 核壳柱为 2.7 um且柱长为 150mm，考虑系统压力的原因，流速选择了 0.3 mL/min，若希望更快地得到分析结果， 可以考虑使用更高的流速或使用更短柱长的色谱柱。 综上所述，使用|PC HILIC S5； 2.0 mmi.d.×150 mm 或 CAPCELL COREPC S2.7；2.1 mm i.d.×1m5m0 m色m色谱谱柱柱，，参考国标方法，重新调整梯度条件后，能够获得良好分析结果。 麻痹性贝类毒素的LC-MS分析（参考GB 5009.213-2016）海洋毒素是由海洋中的有毒藻类通过食物链传递给藻食性的鱼、虾及贝类等生物，并在其体内蓄积形成的有毒高分子化合物。海洋毒素种类繁多,其中贝类毒素是危害较大者之一。 麻痹性贝类毒素是毒性很强的毒素之一，其毒性与河豚毒素相当。这也意味着贝类食品中麻痹类贝类毒素的检测至关重要。 GB 5009.213-2016中使用亲水性氨基甲酰键合凝胶柱作为分析色谱柱，需要耗时35min完成一个梯度（见下图），且峰形略宽。  因此，我们在国标条件基础上，筛选了色谱柱，最终选择磷酸胆碱键合的HILIC型色谱柱——PC HILIC S5;2.0 mm i.d.×150 mm，并对梯度条件进行调节，最终结果如下面的图所示。在15min内可以将10种贝类毒素良好洗脱，峰形良好，3对同分异构体GTX1和4、GTX2和3以及dcGTX2和3均得到良好分离。  HPLC Conditions ：色谱柱：PC HILIC S5;2.0 mm i.d.×150 mm流动相：A：10 mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸  B：乙腈         B% 80%(0min) ->80%(2min) ->50%(8min) ->50%(10min) ->80%(10.1min) ->80%(15min)流速：0.4 mL / min温度：35°C检测：SCIEX 5500; MRM;m/z数据见国标,CE DP等数值根据仪器调谐样品浓度：客户提供：GTX1、2、5，dcGTX2，neoSTX，STX，dcSTX 200ppb；GTX3 84.8ppb；dcGTX3 58.7ppb；GTX4 63ppb进样量：5 µL 在以上实验的基础上，我们也尝试使用了更高柱效的核壳型PC色谱柱——CAP CELL CORE PC S2.7; 2.1 mm i.d.×150 mm进行分析，该色谱柱具有高柱效低压力的特点，在常压及超高效液相上均可以使用，得到结果如下图所示，色谱峰形较全多孔型色谱柱更好。  HPLC Conditions ：色谱柱：CORE PC S2.7;2.1 mm i.d.×150 mm流动相：A：10 mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸  B：乙腈         B% 80%(0min) ->80%(2min) ->50%(8min) ->50%(10min) ->80%(10.1min) ->80%(15min)流速：0.3 mL / min温度：35°C检测：SCIEX 5500; MRM;m/z数据见国标,CE DP等数值根据仪器调谐样品浓度：客户提供：GTX1、2、5，dcGTX2，neoSTX，STX，dcSTX 200ppb；GTX3 84.8ppb；dcGTX3 58.7ppb；GTX4 63ppb进样量：5 µL 在这个实验中，因为使用的CAPCELL CORE PC核壳柱为2.7 μm 且柱长为150mm，考虑系统压力的原因，流速选择了0.3 mL/min，若希望更快地得到分析结果，可以考虑使用更高的流速或使用更短柱长的色谱柱。 综上所述，使用PC HILIC S5; 2.0 mm i.d.×150 mm或CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1 mm i.d.×150 mm色谱柱，参考国标方法，重新调整梯度条件后，能够获得良好分析结果。