化妆品中海克替啶检测方案

XIC of+MRM (3 pairsj： 341300/156.100 Da from Sample 14(MGII-A151A01352-04-30-20-2uL-001)ofDate 202 10323.wiM(Turbo Spray).s. 《化妆品安全技术规范(2015年版)》修订新增-海克替啶的质谱确证 海克替啶的质谱结果确证方法为2015版《化妆品安全技术规范》中新添加的防腐剂检测方法(4.5)，该项目将自2021年5月1日起正式开始实施。 海克替啶 使用色谱柱： CAPCELL CORE C18 S2.7； 4.6 mm i.d.×100 mm 1.标准品分析结果 《技术规范》中要求使用2.7 um， 4.6 mmi.d.×100 mm 规格色谱柱，在0.45mL/min 流速下进行分析，我们按照该方法，对海克替啶标准品进行分析，结果下图所示。 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL CORE C18 S2.7；4.6 mm i.d. ×100 mm 流动相： A： 5mmol/L 乙酸铵-水溶液 B： 5mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液 B% 5% (0 min)->5%(1 min)->60%(3 min) -> 95% (6 min)->95% (12 min)->5%(12.1min)->5%(18min) 流速：0.45mL/min(最大压力15.18MPa) 温度：30℃ 检测： AB SCEIX QTRAP 5500； ESI； Positive；喷雾电压5500V，离子源温度500℃，浓度：20ng/mL(溶剂甲醇) 进样量：2uL 结果中，海克替啶具有良好的保留和峰形，其在液质检测中响应值高，基线噪声小， 但容易残留，进样分析时需要降低样品浓度。另外样品溶剂影响质谱响应，使用有机试剂更有利于得到高的响应值和好的峰形。 根据信噪比计算定量限((S/N=10) 为1.95ng/mL，检出限(S/N=3) 为0.58ng/mL。 2.加标样品测定结果 我们将化妆水按照《技术规范》中样品处理方法进行处理后，未检出含有海克替啶。 由于样品中未检测出海克替啶，我们在样品中加入标准溶液后进行分析，结果如下图所示。 XIC of-MRM (3 pairs： 341300/156.100 Da from Sample 6 (CORE C18-A34AA01320-045-30-huazhuangshul-bino10-2uL-001]ofDAtA202. Max.5.304 cps. HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL CORE C18 S2.7；4.6 mm i.d.×100 mm 流动相： A： 5mmol/L 乙酸铵-水溶液 B： 5mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液 B% 5% (0 min) -> 5% (1 min)-> 60% (3 min) -> 95% (6 min) ->95%(12 min) ->5%(12.1min)->5%(18 min) 流速：0.45 mL/min 温度：30℃ 检测： AB SCEIX QTRAP 5500； ESI； Positive；喷雾电压5500V， 离子源温度500℃，浓度：10ng/mL (溶剂甲醇) 进样量：2uL 加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100pL 1pg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋 30s 后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000r/min 高速离心 5min， 过 0.22um有机相滤膜，待测。 使用色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGIII S5； 2.0 mm i.d.×100 mm 1.标准品分析结果 考虑《技术规范》中使用色谱柱为一般液相规格(内径4.6mm)，我们也使用了对应的质谱规格色谱柱(内径2.0mm)作为补充分析，将色谱柱规格调整为 2.0 mmi.d.×100 mm， 流速则调整为0.4 mL/min， 得到标准品分析谱图如下图所示。 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGIII S5； 2.0 mm i.d. × 100 mm 流动相： A： 5mmol/L 乙酸铵-水溶液 B：5 mmol/L乙酸铵-甲醇溶液 B% 5%(0 min)->5%(1 min)->60%(3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min)->5%(12.1min)-> 5% (18 min) 流速： 0.4mL/min(最大压力15.59MPa) 温度：30℃ 检测： AB SCEIX QTRAP 5500； ESI； Positive；喷雾电压5500V，离子源温度500℃，浓度： 20ng/mL (溶剂甲醇) 进样量：2uL 结果表示，使用 CAPCELL PAK C18 MGIII S5； 2.0 mmi.d.×100 mm 色谱柱，同样可 以得到良好峰形。 根据信噪比计算定量限限((S/N=10) 为1.41 ng/mL， 检出限 (S/N=3) 为 0.42ng/mL。 2.加标样品测定结果 我们也在该色谱柱及上述实验条件下对加标样品溶液进行了分析，结果下图所示： 结果谱图： HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELLPAK C18 MGIII S5； 2.0 mmi.d. ×100 mm 流动相： A： 5mmol/L 乙酸铵-水溶液 B： 5mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液B% 5%(0 min)->5%(1 min)->60%(3 min) ->95% (6 min) -> 95% (12 min)->5%(12.1 min)-> 5% (18 min) 流 速：0.4 mL/min 温 度：30℃ 检 测： AB SCEIX QTRAP 5500； ESI； Positive；喷雾电压5500V， 离子源温度500℃，浓 度： 10ng/mL(溶剂甲醇) 进样量：2uL 加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100pL 1ug/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋 30s 后超声 20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000r/min 高速离心5min， 过 0.22um有机相滤膜，待测。 使用色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGIII S5； 2.0 mm i.d.×100mm(调整梯度条件) 由于海克替啶在反相中具有良好的保留，我们也尝试调整梯度条件以缩短分析时间，梯度调整后，得到标准品和加标样品的分析谱图如下面两个谱图所示(上图为标准品，下图为加标样品)。海克替啶的保留时间由8.82 min 缩短到 6.27 min， 可在 10min 内完成分析。 根据信噪比计算定量限!((S/N=10)为 2.62 ng/mL， 检出限(S/N=3) 为 0.79ng/mL。 XIC of+MRM (3 palrs：341300/156.100 Da trom Samplo 20(MGII-A15A01352-04-t3-30-huazhuangs hul+blao10-2uL-001)of Dzta2021032.. Max.48o4 cps. HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGIII S5； 2.0 mm i.d.×100 mm 流动相： A： 5 mmol/L 乙酸铵-水溶液 B： 5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液 B%20%(0min)->20% (1min) ->95%(2 min)->95%(8 min)->20%(8.1 min)->20%(10min) 流速：0.4mL/min 温度：30℃ 检测： AB SCEIX QTRAP 5500； ESI； Positive；喷雾电压5500V， 离子源温度500℃，浓度：标准溶液：20 ng/mL；加标样品溶液： 10ng/mL(溶剂甲醇) 进样量：2uL 加标样品处理：里取1.0g化妆水置于 10mL 具塞比色管中，加入100pL 1pg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋 30s 后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000r/min 高速离心5min， 过0.22um有机相滤膜，待测。 综上所述，按照《技术规范》中分析方法，使用 CAPCELL PAK系列色谱柱 CORE C18 S2.7； 4.6 mm i.d.×100 mm 和 C18 MGIII S5； 2.0 mm i.d.×100mm 色谱柱，均可以得到对海克替啶的良好分析结果。o在C18 MGIII S5； 2.0mmi.d.×100 mm 色谱柱上，调整梯度后可以缩短整体分析时间。 《化妆品安全技术规范（2015年版）》修订新增 —海克替啶的质谱确证 海克替啶的质谱结果确证方法为2015版《化妆品安全技术规范》中新添加的防腐剂检测方法（4.5），该项目将自2021年5月1日起正式开始实施。海克替啶 使用色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d.×100 mm 1.标准品分析结果《技术规范》中要求使用2.7 μm，4.6 mm i.d.×100 mm规格色谱柱，在0.45 mL/min流速下进行分析，我们按照该方法，对海克替啶标准品进行分析，结果下图所示。结果谱图：HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d. × 100 mm流动相： A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液  B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)流速：0.45 mL/min（最大压力15.18MPa）温度：30 °C检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，浓度：20 ng/mL（溶剂甲醇）进样量：2 µL 结果中，海克替啶具有良好的保留和峰形，其在液质检测中响应值高，基线噪声小，但容易残留，进样分析时需要降低样品浓度。另外样品溶剂影响质谱响应，使用有机试剂更有利于得到高的响应值和好的峰形。根据信噪比计算定量限（S/N=10）为1.95 ng/mL，检出限（S/N=3）为0.58 ng/mL。 2.加标样品测定结果我们将化妆水按照《技术规范》中样品处理方法进行处理后，未检出含有海克替啶。由于样品中未检测出海克替啶，我们在样品中加入标准溶液后进行分析，结果如下图所示。 HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d. × 100 mm流动相： A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液  B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)流速：0.45 mL/min温度：30 °C检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，浓度：10 ng/mL（溶剂甲醇）进样量：2 µL加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100µL 1µg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋30s后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000 r/min高速离心5min，过0.22μm有机相滤膜，待测。 使用色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm 1.标准品分析结果考虑《技术规范》中使用色谱柱为一般液相规格（内径4.6 mm），我们也使用了对应的质谱规格色谱柱（内径2.0 mm）作为补充分析，将色谱柱规格调整为2.0 mm i.d.×100 mm，流速则调整为0.4 mL/min，得到标准品分析谱图如下图所示。 结果谱图： HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d. × 100 mm流动相： A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液   B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)流速：0.4 mL/min（最大压力15.59MPa）温度：30 °C检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，浓度：20 ng/mL（溶剂甲醇）进样量：2 µL 结果表示，使用CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱，同样可以得到良好峰形。根据信噪比计算定量限（S/N=10）为1.41 ng/mL，检出限（S/N=3）为0.42 ng/mL。 2. 加标样品测定结果我们也在该色谱柱及上述实验条件下对加标样品溶液进行了分析，结果下图所示： 结果谱图： HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d. × 100 mm流动相： A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液       B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液B% 5% (0 min) -> 5% (1 min) -> 60% (3 min) -> 95% (6 min) -> 95% (12 min) -> 5% (12.1 min) -> 5% (18 min)流  速：0.4 mL/min温  度：30 °C检  测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，浓  度：10 ng/mL（溶剂甲醇）进样量：2 µL加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100µL 1µg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋30s后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000 r/min高速离心5min，过0.22μm有机相滤膜，待测。 使用色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm（调整梯度条件） 由于海克替啶在反相中具有良好的保留，我们也尝试调整梯度条件以缩短分析时间，梯度调整后，得到标准品和加标样品的分析谱图如下面两个谱图所示（上图为标准品，下图为加标样品）。海克替啶的保留时间由8.82 min缩短到6.27 min，可在10min内完成分析。根据信噪比计算定量限（S/N=10）为2.62 ng/mL，检出限（S/N=3）为0.79 ng/mL。结果谱图： HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d. × 100 mm流动相： A：5 mmol/L 乙酸铵-水溶液  B：5 mmol/L 乙酸铵-甲醇溶液B% 20% (0 min) -> 20% (1 min) -> 95% (2 min) -> 95% (8 min) -> 20% (8.1 min) -> 20% (10 min)流速：0.4 mL/min温度：30 °C检测：AB SCEIX QTRAP 5500；ESI；Positive；喷雾电压5500 V，离子源温度500 ℃，浓度：标准溶液：20 ng/mL；加标样品溶液：10 ng/mL（溶剂甲醇）进样量：2 µL加标样品处理：称取1.0g化妆水置于10mL具塞比色管中，加入100µL 1µg/mL标准溶液，加入8mL甲醇，涡旋30s后超声20min，用甲醇定容至10mL。混匀，取少量溶液10000 r/min高速离心5min，过0.22μm有机相滤膜，待测。 综上所述，按照《技术规范》中分析方法，使用CAPCELL PAK系列色谱柱CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d.×100 mm和C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱，均可以得到对海克替啶的良好分析结果。在C18 MGIII S5; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱上，调整梯度后可以缩短整体分析时间。