大麻花朵及其相关产品中大麻素检测方案(液相色谱仪)

应用简报 Agilent食品检测Trusted Answers 采用 Agilent 1220 Infinity ll 液相色谱系统进行大麻素效价测定 作者 摘要 Christy Storm，Michael Zumwalt 和 Anthony Macherone 安捷伦提供了一种可靠的解决方案，能够对大麻花朵及其相关产品中常见的目标大麻素进行快速、稳定、准确和精密的定量分析。 安捷伦科技有限公司 定量分析大麻中的大麻素，以确保质量、安全性和合规性 购买或租用最佳分析设备 借助安捷伦专用方法实现快速的方法实施 咨询服务为您的员工提供帮助和培训 Agilent 1220 Infinity ll液相色谱系统可为大麻以及来源于植物材料的产品(如食品)中11种最常见的目标大麻素提供可靠且稳定的分析和定量。该方法确定了分析柱、流动相改性剂和所有的系统参数，可在10分钟内分离目标大麻素。该方法已在两个独立的1220 Infinity lI 液相色谱系统上完成了测试和验证。表5-7分别给出了日内和日间准确度、精度和线性。 表1.目标化合物 次大麻二酚 (CBDV) 四氢次大麻酚 (THCV) (-)-反式-△9-四氢大麻酚 (THC) 大麻二酚 (CBD) 大麻萜酚(CBG) △9-四氢大麻酚酸 (THCA-A) 大麻二酚酸 (CBDA) 大麻酚 (CBN) 大麻萜酚酸 (CBGA) 大麻环不酚(CBC) (-)-A8-THC 表2.硬件和消耗品 硬件和软件 部件号 Agilent 1220 Infinity II液相色谱梯度系统 VL 包括带有集成式脱气单元的梯度泵(最大压力为400 bar)、 自动进样器、柱温箱和带有标准流通池的可变波长检测器。 G4290C Agilent OpenLAB CDS VL 工作站 M8417AA 消耗品 部件号 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，3.0×50 mm， 2.7 pm 699975-302 0.45 pm 再生纤维素(RC) 针头过滤器 5190-5107 甲酸 G2453-85060 LC/MS级水，4L 5190-6897 LC/MS级甲醇，1L 5190-6896 陶瓷均质子，50mL管，100/包 5982-9313 流动相配制 0.1%(v/v)甲酸水相：向一个1L的A级容量瓶中加入约500 mL 高纯度 HPLC 级水 (5190-6897)。加入1.0 mL 甲酸 (G2452-85060)。轻轻摇晃混合并定容至1L。充分混合后转移至 HPLC 流动相瓶中 0.05%(v/v) 甲酸有机相：向一个1L的A级容量瓶中加入约500mL高纯度 HPLC 级甲醇 (5190-6896)。加入0.5 mL甲酸 (G2452-85060)。轻轻摇晃混合并定容至1L。充分混合后转移至 HPLC 流动相瓶中 表3.液相色谱条件 参数 值 色谱柱 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 3.0×50 mm， 2.7 pm 流动相 A) 0.1%(V/V)甲酸水相 B) 0.05% (V/V)甲酸有机相 流速 1.0 mL/min 停止时间 9.5 min 后运行 1.5 min 柱温 50℃恒温 进样量 5.0pL 自动进样器温度 室温 峰宽 >0.0063 min (0.13秒响应时间)(80 Hz) 可变波长检测器 230 nm 表4.液相色谱流动相梯度 时间(min) %B 0 60 1.0 60 7.0 77 8.2 95 样品前处理 1.称取200 mg 花朵/叶子并切碎，置于50 mL 离心管中。使用陶瓷均质子和市售研磨机对其进行均质化处理 2. 加入20mL甲醇。涡旋/振荡10分钟 3. 移取1mL至新样品瓶。在 5000 rpm 的转速下离心5分钟 4. 将 50 pL上清液转移至新样品瓶。加入950 pL甲醇。短暂混合 5. 使用4mm， 0.45 um 再生纤维素 (RC)针头过滤器器(部件号5190-5107)进行过滤 出于以下原因，未采用 QuEChERS 方法进行效价测定： 必须向大麻花朵中加入水：加入水后，悬浮液将在2-4分钟内变为强碱性。这会将 THCA 转化为 THC，并可能生成其他分解产物，例如将 CBDA 转化为 CBD QuEChERS 盐的加入会引起放热反应：在有水存在的情况下，这也将导致THCA 脱羧生成 THC 校准曲线 由单独的市售认证参比标准品配制标准校准物，每种标样在有机溶剂中的浓度为1.0 mg/mL。将每种参比标样等体积混合，然后使用高纯度甲醇稀释至 50.0 pg/mL。 然后进行连续稀释，配制浓度为50.0、10.0、5.0、1.0和0.5 ug/mL的5点校准标样。以浓度为横坐标，响应为纵坐标构建外部标准化校准曲线，并将其用于准确度、精度和线性的测定。 代表性色谱图(50 pg/mL进样) THC、THCA、CBD、CBDA、CBN 和 CBG 按RT 排序 X1 CBD， 5.818 min [Formula：y=14.3814x-0.5817 r：0.99996 CBD， 5.818 min [Formula：y=14.3814x-0.5817Residual standard deviation：248389r：0.99996 Origin：ignoreR：0.99992 Weighting method：None 7576.565.554.5 43.532.5 21.5 0.60.50.403 CBN， 7.331 min Formula：y=31.0122x-2.49499Residual standard deviation：553037 r-0.99996 Origin：Ignore R：0.99992 Weighting method： None 准确度 表 5.两个独立 Agilent 1220 液相色谱系统的日内和日间准确度 仪器1 准确度 化合物(按RT排序) 日内 化合物 浓度(pg/mL) 第1天 第2天 第3天 平均值 CBN 0.5 103.9 106.9 107.7 106.2 1.0 100.0 100.9 102.4 101.1 5.0 99.6 97.4 96.1 97.7 10.0 95.6 93.2 92.0 93.6 50.0 100.9 101.5 101.9 101.4 9-THC 0.5 107.4 111.5 109.3 109.4 1.0 99.6 97.1 101.1 99.3 5.0 97.7 96.9 95.9 96.8 10.0 93.9 92.9 91.7 92.8 50.0 101.4 101.7 102.0 101.7 8-THC 0.5 107.9 107.2 108.0 107.7 1.0 99.5 101.1 102.5 101.0 5.0 97.5 97.2 95.8 96.9 10.0 93.6 93.0 91.8 92.8 50.0 101.4 101.6 101.9 101.6 CBC 0.5 64.8 107.2 107.8 93.3 1.0 95.7 100.2 101.5 99.1 5.0 123.8 97.6 96.4 105.9 10.0 122.1 93.6 92.5 102.7 50.0 93.7 101.5 101.7 99.0 THC-A 0.5 78.6 106.6 107.4 97.5 1.0 96.8 100.0 101.0 99.3 5.0 115.5 98.0 96.9 103.5 10.0 112.9 94.1 93.0 100.0 50.0 96.2 101.3 101.6 99.7 准确度 仪器2 化合物(按RT排序) 日内 化合物 浓度(pg/mL) 第1天 第2天 第3天 平均值 CBN 0.5 104.5 105.5 107.1 105.7 1.0 96.8 96.6 92.7 95.4 5.0 97.0 94.3 84.2 91.9 10.0 101.8 103.6 117.9 107.8 9-THC 50.0 99.9 99.9 98.1 99.3 0.5 104.2 105.7 107.8 105.9 1.0 96.9 96.4 92.8 95.4 5.0 97.2 94.4 84.0 91.8 10.0 101.8 103.7 117.3 107.6 50.0 99.9 99.8 98.2 99.3 8-THC 0.5 104.1 105.5 108.1 105.9 1.0 97.0 96.2 92.0 95.1 5.0 97.0 94.6 84.2 91.9 10.0 101.9 103.8 117.5 107.7 50.0 99.9 99.8 98.2 99.3 CBC 0.5 102.2 103.4 105.7 103.8 1.0 96.8 96.3 92.2 95.1 5.0 98.3 95.7 85.3 93.1 10.0 103.1 105.1 119.0 109.1 THC-A 50.0 99.6 99.4 97.8 98.9 0.5 102.2 103.8 106.2 104.1 1.0 96.7 96.1 91.9 94.9 5.0 98.4 95.8 85.7 93.3 10.0 103.2 104.8 118.4 108.8 50.0 99.6 99.5 97.9 99.0 表 6.两个独立 Agilent 1220 HPLC 系统的日内和日间精度 仪器1精度(%RSD)-5 pg/mL 化合物 日间 日内 CBDV 3.39 0.59 0.47 3.44 THCV 0.13 0.56 0.59 3.71 CBD 0.30 0.36 0.15 3.80 CBG 0.39 0.24 0.19 4.00 CBDA 0.23 0.66 0.59 3.25 CBGA 0.19 0.28 0.62 3.39 CBN 0.27 0.36 0.31 3.80 9-THC 1.30 1.08 0.69 1.59 8-THC 1.31 0.88 0.48 1.82 CBC 0.32 0.19 0.13 3.06 THC-A 0.12 0.15 0.30 3.07 仪器2精度(%RSD)-5 pg/mL 化合物 日间 日内 CBDV 1.25 0.80 0.55 6.62 THCV 0.33 0.65 0.30 5.81 CBD 0.08 0.34 0.56 6.67 CBG 0.32 0.28 0.32 6.80 CBDA 0.34 0.51 0.16 6.06 CBGA 0.23 0.43 0.32 6.38 CBN 0.22 0.13 0.13 6.69 9-THC 0.33 0.68 0.43 6.91 8-THC 0.65 0.47 0.13 5.64 CBC 0.20 0.20 0.05 4.75 THC-A 0.19 0.22 0.14 6.26 表7.忽略原点且不进行加权 仪器1线性(R) 化合物 第1天 第2天 第3天 平均值 CBDV 0.9997 0.9995 0.9995 0.9996 THCV 0.9997 0.9995 0.9995 0.9996 CBD 0.9997 0.9995 0.9995 0.9996 CBG 0.9997 0.9995 0.9995 0.9996 CBDA 0.9998 0.9995 0.9995 0.9996 CBGA 0.9997 0.9995 0.9995 0.9996 CBN 0.9997 0.9995 0.9996 0.9996 9-THC 0.9997 0.9991 0.9995 0.9994 8-THC 0.9997 0.9971 0.9984 0.9984 CBC 0.9998 0.9996 0.9996 0.9997 THC-A 0.9998 0.9996 0.9996 0.9997 仪器2线性(R) 化合物 第1天 第2天 第3天 平均值 CBDV 0.9999 0.9998 0.9977 0.9991 THCV 0.9999 0.9998 0.9975 0.9991 CBD 0.9999 0.9998 0.9977 0.9991 CBG 0.9999 0.9998 0.9977 0.9991 CBDA 0.9999 0.9999 0.9977 0.9992 CBGA 0.9999 0.9999 0.9978 0.9992 CBN 0.9999 0.9998 0.9975 0.9991 9-THC 0.9999 0.9999 0.9978 0.9992 8-THC 0.9999 0.9998 0.9975 0.9991 CBC 0.9999 0.9998 0.9972 0.9990 THC-A 0.9999 0.9998 0.9974 0.9990 附录：样品报告示例 Name RT [min]RF Area Amount [ug/mL] [ug/mL] CBDV 3.36 16.762 155.076 9.252 9.252 THCV 5.28 15.188 140.236 9.234 9.234 CBD 5.46 16.167 149.623 9.255 9.255 CBG 5.61 14.960 138.518 9.259 9.259 CBDA 5.91 30.625 282.626 9.229 9.229 CBGA 6.59 30.972 286.065 9.236 9.236 CBN 6.95 35.386 327.881 9.266 9.266 9-THC 7.60 15.223 150.199 9.866 9.866 8-THC 7.80 14.998 154.177 10.280 10.280 CBC 8.22 36.808 346.170 9.405 9.405 THC-A 8.59 27.174 252.937 9.308 9.308 Total PotencyTotal CBD[ug/mL] [ug/mL]18.03 17.35 安捷伦产品和解决方案旨在帮助实验室进行大麻质量控制和安全检测(在国家/地区法律允许的情况下使用)。 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ( ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2018 ) Agilent 1220 Infinity II 液相色谱系统可为大麻以及来源于植物材料的产品（如食品）中 11 种最常见的目标大麻素提供可靠且稳定的分析和定量。该方法确定了分析柱、流动相改性剂和所有的系统参数，可在 10 分钟内分离目标大麻素。该方法已在两个独立的 1220 Infinity II 液相色谱系统上完成了测试和验证。