银耳中米酵菌酸检测方案

银耳中米酵菌酸的提取与检测 背景 米酵菌酸 (Bongkrekic acid， BA) 是由椰毒假单胞菌属酵米面亚种产生的一种可以引起食物中毒的毒素。摄入该毒素污染的食物可引起人或动物中毒，轻者恶心呕吐、腹痛腹胀，重者出现肝脑肾实质性器官损害症状，甚至可致死亡。米酵菌酸主要存在于发发玉米面制品、变质鲜银耳及其其变质淀粉类制品中，这些基质本身比较复杂，测定会有干扰。我们通过结构式可以看出米酵菌酸含有三个羧基，可以参考国标GB5009.189--2016提供了银耳及其制品中米酵菌酸的提取与测定方法，也就是强阴离子交换固相萃取法进行前处理，有效去除基质干扰。纳谱分析的这款 SelectCore MAX 固相萃取柱，完全适用于国标规定的净化方法，具有高效快速回收率好等优点。 适用范围 该方法依照食品安全国家标准-食品中米酵菌酸的测定 (GB5009.189-2016)，适用于银耳及其制品、酵米面及其制品等食品中米酵菌酸的测定。 实验步骤 1、试剂准备 甲醇-氨水溶液：量取80mL甲醇，加入1.0mL氨水，加水定容到100 mL， 混匀备用。 2%甲酸-甲醇溶液：吸取2.0 mL 甲酸于100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度。 2、样品制备 依照 GB5009.189—2016中固相萃取法制备样品，干试样经粉碎过0 0.425 mm 筛后，称取20g(精确至0.01g)置于锥形瓶中，加入100 mL甲醇-氨水溶液。混匀，室温下避光浸泡1h后置于超声波振荡器中超声提取约30min， 过滤。取滤液 50 mL 置80℃水浴中浓缩至约3mL，待净化。 3、净化 SPE柱活化： SelectCore MAX 60mg/3mL 固相萃取柱，依次加入5.0 mL 甲醇和5.0 mL水活化，保持柱体湿润； 上样：加入步骤2中制备好的滤液； 淋洗：待待液完全流出后，依次使用 5.0 mL 水和 5.0mL 甲醇淋洗，弃去全部淋洗液，抽干小柱； 洗脱：用6.0mL2%甲酸-甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液； 洗脱液于40℃±0.5℃条件下氮吹至干，加入 0.5 mL甲醇，涡旋溶解，混匀，经微孔有机滤膜过滤后 用于液相色谱分析。 4、液相色谱仪器条件 色谱柱： ChromCore C18 5 um， 4.6x250 mm 检测波长：267nm 柱温：30°C 进样体积：：.10uL 流速：：1.0mL/min 流动相：A相：乙酸水溶液 (pH2.5)； B相：甲醇 洗脱时间：0~18min： 75%B 实验谱图及加标回收率数据 实验谱图 图1米酵菌酸标准品色谱图(0.1ug/mL) 检测器A267nm 八 hwmw 图2 银耳样品色谱图 图3 银耳样品加标色谱图(加标量：0.005ug/g) 加标回收率数据 加标量 加标回收率 0.005 ug/g 97.81% 由以上实验谱图可以看出，银耳样品经过 SelectCore MAX 固相萃取柱净化后，选择 ChromCore C18 进行HPLC分析，基线平稳，加标实验谱图目标物无杂质干扰，加标回收率符合测定要求。 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏洲)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 由以上实验谱图可以看出，银耳样品经过SelectCore MAX固相萃取柱净化后，选择ChromCore C18进行HPLC分析，基线平稳，加标实验谱图目标物无杂质干扰，加标回收率符合测定要求。