市售地龙药材中汞形态检测方案(ICP-MS)

SSL-CA19-173Excellence in Science Excellence in ScienceICPMS-122 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai HPLC-ICP-MS测定动物药地龙中的形态汞 |CPMS-122 摘要：参考2020版《中国药典》征求意见稿通则《2322汞、砷元素形态及价态测定法》，建立了高效液相 色谱-电感耦合等离子体质谱法 (HPLC-ICP-MS)测定动物药地龙中形态汞含量的方法。样品经过处理后，采用高效液相色谱 LC-20Ai 对不同态态汞进行分离，利用电感耦合等离子体质谱仪 ICPMS-2030 进行定量分析。在0.5~20 ng/mL范围内，线性回归系数为 0.99988~0.99998，仪器检出限为0.11~0.15 ug/L，样品加标回收率为81.7~91.5%，分析结果精密度良好， RSD 值小于5%(n=3)，该方法适用于动物药地龙中形态汞的分析。 关键词： HPLC-ICP-MS 2020版《中国药典》通则2322地龙形态汞 地龙是我国重要的中药材之一，别名为蚯蚓，具有清热定惊、通络、平喘、利尿等功效。地龙对土壤中的重金属元素具有吸附和富集能力。 汞是自然界中常见的有毒致癌性元素之一，汞的生物毒性不仅与其含量有关，更大程度上还与其存在形态有关。不同形态的汞化合物性质不同，毒性差异很大。 常见的汞化合物有无机汞(iHg)、甲基汞(MeHg)、乙基汞(EtHg)等。其中，有机汞的毒性大于无机汞，尤其是甲基汞毒性最大，同时甲基汞和乙基汞均是脂溶性的，容易被生物体所吸收，所造成的生物体危害 尤为突出。 由于汞的毒性、致癌性、迁移性质和生物效应均取决于它的化学形态，并且各汞形态随着所处环境的不同处于动态互变之中，所以测定总汞含量无法准确表示出汞的暴露水平。因此，对汞的各种存在形态分别进行分析测定十分必要。 本文参考2020版《中国药典》征求意见稿通则《2322汞、砷元素形态及价态测定法》，采用岛津高效液相色谱LC-20Ai与电感耦合等离子体质谱仪ICPMS-2030 联用对动物药地龙进行汞形态分析。 1.1对照品 无机汞采用常规元素标液，甲基汞和乙基汞购于国家标准物质中心。 1.2实验检材及试剂 市售地龙药材；胃蛋白酶购于 Sigma-Aldrich；硝酸银、乙酸铵及L-半胱氨酸，购于国药集团，均为优级纯；硝酸购于国药集团，为电子纯；甲醇购于 Sigma-Aldrich， 为色谱纯。 1.3仪器 本实验使用岛津高效液相色谱仪 LC-20Ai 与电感耦合等离子体质谱仪 ICPMS-2030 联用系统。具体配置为LC-20Ai×2输液泵， DGU-20A3在线脱气机， SIL-20AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱，CBM-20A系统控制器，岛津ICPMS-2030电感耦合等离子体质谱仪， LabSolutions ICPMS Version TRM1.12 工作站。 1.4仪器条件 LC-20Ai 色谱分析条件和 ICPMS-2030质谱分析条件见表1和表2。 表1液相色谱LC-20Ai 条件 参数 设定值 色谱柱 shim-pack GIST (C18)5 um， 4.6 mm×150mm 流动相 A相： 0.01mol/L乙酸铵(含0.12%L-半胱氨酸，氨水调pH值至7.5)；B相：甲醇 流速 0.8 mL/min 柱温 40°C 进样量 50 uL 洗针液 水 洗脱程序 等度洗脱(A：B=92：8) 表2 ICP-MS条件 参数 设定值 参数 设定值 高频功率 1.20 kW 等离子体气流速 9.0 L/min 辅助气流速 1.10 L/min 载气流速 0.70 L/min 炬管类型 Mini 炬管 雾化器 同轴 雾化室 旋流 雾化室温度 0℃ 采样深度 5.0 mm 高频频率 27.12MHz 碰撞气体 He 碰撞气流速 5mL/min 池电压 -21 V 能量过滤器电压 7.0V 』标准溶液及供式品溶液制备 2.1对照品贮备溶液的制备 分别取氯化汞、甲基汞、乙基汞对照品适量，精密称定，加8%甲醇制成每 1ml 各含100ng(均以汞计)的混合溶液。 2.2标准曲线溶液的制备 精密吸取对照品贮备液适量，加8%甲醇分别制成每1mL各含0.5ng、1ng、5ng、10 ng、20 ng(均以汞计)系列浓度的溶液。 2.3供试品溶液的制备 精密称取供试品粉末(过三号筛)0.3g，加0.1mol/L硝酸银溶液300uL，精密加入硝酸人工胃液适量10mL，置于约40℃水浴中加热约22小时，取出，摇匀，室温放置2小时，取上清液，用一次性双层滤膜(10um+3um)滤过，取续滤液，即得。同法制备空白溶液和样品加标溶液 3.1色谱分离图 对空白进行考察排除系统干扰，并且考察混合标准溶液中无机汞、甲基汞和乙基汞的分离度，以确保实际样品分析过程中不存在假阳性检出，图1所示为标准溶液(5ug/L)色谱分离图(单位kcps)。 图1三种形态汞色谱图 1.无机汞(iHg)、2.甲基汞(MeHg)、3.乙基汞 (EtHg) 3.2标准曲线 根据色谱及质谱分析条件，依次测定各标准点，以汞浓度对峰面积做线性回归曲线，标准曲线如图2至图4所示，在0.5~20 ug/L范围内，线性相关系数r为 0.99988~0.99998。 EtHg 图2 EtHg标准曲线 图3 MeHg标准曲线 图4iHg标准曲线 3.3检出限 对浓度为 1 ug/L的混和溶液考察无机汞、甲基汞、乙基汞的信噪比，以三倍信噪比(3S/N)峰高对应浓度作为检出限，三种形态汞检出限结果见表3，仪器检出限为 0.11~0.15 ug/L， 方法检出限为3.65~4.98 ug/kg. 表3三种形态汞检出限 名称 仪器检出限(ug/L) 方法去出限(ug/kg) 无机汞 (iHg) 0.11 3.65 甲基汞(MeHg) 0.12 4.10 乙基汞(EtHg) 0.15 4.98 3.4准确度考察 取市售地龙药材，按照前处理方法处理后进 HPLC-ICP-MS分析，并对地龙样品进行1ug/L 加标回收试验，样品及加标样品谱图见图5，测定结果及加标回收率见表4。如结果所示，地龙药品中汞主要以无机汞形式存在，甲机汞和乙基汞未检出，3种形态汞的加标回收率为81.7~91.5%。 (x10) 图5地龙中3种形态汞及加标谱图 表4地龙样品测定结果及加标回收率 名称 样品测定 加标回收 测定值 样品结果 加标量 测定值 RSD/% 回收率 (pg/L) (ug/kg) (ug/L) (pg/L) (n=3) (%) 无机汞(iHg) 0.40 13.2 1.0 1.26 4.08 86.0 甲基汞 (MeHg) N.D N.D 1.0 0.91 4.67 91.5 乙基汞 (EtHg) N.D N.D 1.0 0.82 0.25 81.7 ND：未检出 ■结论 参考2020版《中国药典》征求意见稿通则《2322汞、砷元素形态及价态测定法》，使用岛津高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法 (HPLC-ICP-MS)测定了地龙药材种3种形态汞的含量，地龙药材中汞主要以少量的无机汞形式存在，甲机汞和乙基汞未检出；方法准确度高，3种形态汞的加标回收率为 81.7~91.5%；仪器精密度良好，分析结果 RSD 值小于5%(n=3)。该方法具有分离度好，灵敏度高等优点，适用于地龙动物药中形态汞的测定。 Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 参考2020版《中国药典》征求意见稿通则《2322 汞、砷元素形态及价态测定法》，使用岛津高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法（HPLC-ICP-MS）测定了地龙药材种3种形态汞的含量，地龙药材中汞主要以少量的无机汞形式存在，甲机汞和乙基汞未检出；方法准确度高，3种形态汞的加标回收率为81.7~91.5%；仪器精密度良好，分析结果RSD值小于5%（n=3）。该方法具有分离度好，灵敏度高等优点，适用于地龙动物药中形态汞的测定。