血浆和尿液中氨基酸检测方案(专用色谱柱)

[维护和使用手册]WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [维护和使用手册] 目录 简介 Ⅱ. 保存和稳定性 IIl. 使用Kairos氨基分分析试剂盒 IV. 入门指南 a.处理要求 b.为氨基酸分析设置自动移液平台 c.准备Tecan Freedom EVO 100/4 d.试剂制备 e.校准品、质量控制标准品、内标和 AccQ-Tag复溶说明 f.试剂布局 g.样品分发和条形码 h.执行自动样品制备脚本 V. 推荐的分析方法 a.Kairos氨基酸LC分析方法 b.Kairos氨基酸MS分析方法 VI. 工作流程概述 VIl. 订购信息 l.简介 非常感谢您购买Waters"" Kairos"氨基酸试剂盒，此试剂盒仅供研究使用。本文将介绍Kairos氨基酸试剂盒(仅供研究使用)的常规维护和使用信息，以期协助您精准测定血浆和尿液样品中的氨基酸。本文中的方法已经使用AccQ·Tag"衍生化试剂、ACQUITY""UPLCMI-Class PLUS系统、Xevo"TQ-S micro和ACQUITYQDa"质谱检测器进行了验证，但我们仍建议您根据具体样品优化分析条件并确认分析结果是否准确，尤其是当样品不完全符合工作站及脚本要求时。 为了确保通用性，该试剂盒中所有试剂的量都经过相应扩大，可适应不同自动移液工作站的残留体积要求。 沃特世不提供有关自动化的咨询服务。如果需要根据特定工作站的要求进行任何调整，建议您直接联系移液工作站供应商寻求帮助。如果偏离了脚本或工作站要求，用户应自行确保结果准确度得到确认。 本维护和使用手册针对该方案的实施提供了十分详细的分步操作说明。如需观看该方案的完整培训视频，请访问：waters.com/Kairos。 收货后请核对试剂盒清单，如果包装被打开、损坏，内容物缺失或超出有效期，请勿使用本产品。如需订购替换试剂盒或部件，请联系当地的销售代表。订购时请提供所需产品的产品部件号和批号。 Waters Kairos氨基酸试剂盒通常提供如下配置： 高通量试剂盒提供手动和兼容自动这两种规格。如需了解有关高通量试剂盒的更多信息，请访问： waters.com/Kairos. *即将上市。 Ⅱ.保存和稳定性 试剂盒组件的保存和稳定性条件 表1.高通量试剂盒核心组件 部件号 名称 数量 复溶后的保存条件 初始保存条件 186009048 Kairos氨基酸 7套/包 -10℃~-25℃ 收货后请冷冻保存 校准品套装(500+) 30天内使用** (-10℃~-25℃)。 186009049 Kairos氨基酸 2个低浓度质量控制标准品 -10℃~-25℃ 收货后请冷冻保存 质量控制标准品套装(500+) 2个高浓度质量控制标准品 30天内使用** (-10℃~-25℃)。 186009050 Kairos氨基酸 5套/包 -10℃~-25℃ 收货后请冷冻保存 内标套装(500+) 30天内使用** (-10℃~-25℃)。 186007096 CORTECSUPLC C， 1.6 um， 2.1x150mm色谱柱 1根/包 室温 AccQ·Tag Ultra"3X" 一个套盒中包含 室温 室温下存放。 186004535 衍生化试剂盒 5组 5天内使用 在有效期内使用。 186009103 Kairos氨基酸 复溶试剂 (1)30mL瓶装HCI 室温 N/A (1)50mL瓶装 磺基水杨酸 186006691 甲酸 (2)1mL瓶装 室温 N/A 自动化高通量试剂盒特有组件 186009105 Kairos氨基酸自动化脚本 186009102 Kairos氨基酸样品制备试剂盒 720006447ZH 《Kairos氨基酸试剂盒(自动)维护和使用手册》* 715005730ZH 《Kairos氨基酸试剂盒成分指南》 *可在线获取 **复溶后，校准品和QC标准品中的谷氨酰胺含量会随时间推移降低。如果复溶后冷冻保存，产品标示浓度在最长15天内有效。 某些产品可能属于危险品，应当由经过培训、有能力处理此类物质的专业实验室人员使用。产品的安全使用完全由采购方和用户负责。 如需获取本产品的安全数据表(SDS)(包含GHS信息)，请访问： www.waters.com/sds。 氨基酸分析方案 ⅢI.使用Kairos氨基酸分析试剂盒 表2.进行自动样品制备所需的其它材料(试剂盒未提供)清单 LC-MS级水 LC-MS级乙腈 LC-MS级甲醇 0.1M盐酸 0.5M氢氧化钠 单通道手动移液器 加热器 滚轴混合器 推荐使用的LC-MS组件 表3.配备Xevo TQ-S micro的ACQUITY UPLCI-Class PLUS系统 型号/部件号 说明 186007833 Xevo TQ-S micro 186015082 ACQUITY UPLC I-Class PLUS二元溶剂管理器 186015087 ACQUITY UPLC I-Class PLUS样品管理器-FL-I 186015042 ACQUITY UPLCI-Class CH-A 186007096 CORTECS UPLC Cg 1.6 um， 2.1x150mm色谱柱 软件/界面 表4.配备Xevo TQ-S micro的ACQUITY UPLC I-Class PLUS系统 型号/部件号 说明 C30 Lenovo ThinkStation 667005373 MassLynx" 4.1版(SCN 945) 667002671 TargetLynx" 4.1版 表5.配备ACQUITY QDa质谱检测器的ACQUITY UPLC H-Class PLUS系统 型号/部件号 说明 186008513 ACQUITYQDa 186015080 ACQUITY UPLC H-Class PLUS QSM 186015085 ACQUITY UPLC H-Class PLUS FTN-H 186015042 ACQUITY UPLCI-Class CH-A 186007096 CORTECS UPLC C1g 1.6 pm，2.1x150mm色谱柱 软件/界面 表6.配备ACQUITY QDa质谱检测器的ACQUITY UPLC H-Class PLUS系统 型号/部件号 说明 P500 Lenovo ThinkStation 667005438/667005454 MassLynx 4.1版(SCN 947/961) 667002671 TargetLynx 4.1版 重要说明：请务必使用LC-MS级溶剂，以确保分析达到最佳性能。 IV.入门指南 为了在运行分析之前确保LCMS系统准备就绪，请执行以下步骤。平衡色谱柱，对溶剂泵和自动进样器执行灌注和清洗操作(如果适用)，详细信息请参阅下文中的色谱柱平衡方法。确保质谱仪已运行至少30 min， 且所有温度和电压均已达到下文"推荐的MS条件"部分列出的设定值。 准备Tecan仪器，确保自动移液工作站上已安装合适的硬件(相关硬件请参见表7)。此外，请确保自动移液平台上已安装软件和软件选件(如果需要)，且工作台上已安装好管架和实验器具(请参见图1、表8和表9)。由于Tecan° Freedom EVO°100/4是根据本维护和使用手册使用该试剂盒验证了全自动操作的原始平台，因此，本文以该平台为例说明全自动工作站的要求。 如需进行系统维护，或者遇到任何涉及特定工作站的要求、软件或平台专用脚本的问题，建议您遵循制造商的说明。 b.为氨基酸分析设置自动移液工作站 请确保Tecan自动移液工作站上安装了以下硬件。如果使用其它工作站，以下硬件可作为全自动运行此工作流程所需硬件的示例。 表7.硬件要求示例 说明 示例(Tecan系统) 移液臂 LiHa (4个一次性移液吸头)* 抓取臂 RoMa 样品板振荡器 Teleshake或同等产品 加热器 INHECO CPAC或同等产品 *开发脚本时使用的LiHa机械臂使用4个一次性移液吸头；因此可能需要根据不同的移液吸头选件调整脚本。 Tecan软件要求和选件请确保Tecan自动移液平台PC上安装了以下软件(和所需的软件选件)。 表8.工作站要求 说明 部件号 移液软件 Freedom EVOware(2.6 SP2或同等产品，部件号：10615154) 移液脚本 文件转换器 Tecan工作台布局 请确保按图1所示在工作台上安装以下管架和实验器皿。 图1： Kairos氨基酸试剂盒的初始工作台设置。 表9.硬件要求 说明 部件号 16位联排管 16位联排管， 16x1.5 mL Eppendorf管(x7)， 样品管架(部件号：10613035) 管架 2MTP 1 Teleshake (x1) (Tecan)(部件号：30029147) 管架 含2个DiTi和1个废液位置的管架(部件号：10613012) 试剂槽 试剂槽架(x3)试剂槽架 (部件号：10613020) 样品管 微量离心管-(Eppendorf) (1.5 mL/2 mL) 收集板 沃特世96孔板1mL， 沃特世96孔板2mL方孔收集板 c.准备Tecan Freedom EVO 100/4 1. 使用用户名和密码登录EVOware，加载启动界面。 2. 开始运行之前，确保已使用正确的溶液灌注系统。 样品追踪 1. 样品置于16位联排管中，然后被转移到96孔反应板。 2. 如果反应板已被使用了一部分，样品1被转移到分析员在Tecan脚本对话框中选择的第一个孔位置。后续样品从该位置开始依次往后排列。 3. 然后样品被转移到样品板上，孔位置与试剂板上的位置相同。图2所示为运行部件号为715005895的移液预设方案时，样品传输方式的示意图。 图2：样品追踪示意图。 条形码和MassLynx文件转换器的用法 Kairos氨基酸试剂盒的Tecan EVOware脚本可扫描样品条形码。扫描得到的样品信息(例如样品I.D.、序列)可通过Tecan文件转换器软件转换到一个.csv文件中，随后可导入此文件用作MassLynx样品列表。 使用此功能时，请注意尽可能确保条形码呈直线；如果样品管上的条形码位置倾斜，可能导致扫描失败。目前，氨基酸脚本中设置的可接受条形码类型如下： Codabar 2 of 5 Interleaved Code 39 full ASCII Code 128 Code 39 Code 93 确保Tecan文件转换器软件正在运行。 注：如果用户不需要使用条形码标记和样品追踪功能，请在启动脚本前将样品置于未贴条形码的微量离心管中。Tecan在执行脚本中的条形码读取步骤时会发出警报，此时用户必须手动输入样品编号才能继续进行后续步骤。或者，用户可以修改脚本，完全移除条形码读取步骤。 d.试剂制备 试剂盒不提供常用化学品和溶剂。 启动本方案前，需要准备以下溶液。 LC-MS级水=每个样品50uL+5mL死体积 0.1 M HCI=每个需要HCI的样品1mL+5mL(如果有稀释步骤) 本方案建议使用的氨基酸样品量为每个离心管100pL。离心管所需的死体积为50pL。 e.校准品、质量控制标准品、内标和AccQ·Tag复溶说明 复溶试剂套装(部件号：186009103)中提供了交溶校准品、质量控制标准品和内标所需的所有试剂。复溶方案如下所述。 校准品和质量控制标准品的复溶可通过将试剂添加到冻干样品瓶中完成，具体方法如下。 校准品 1. 加入2 mL 0.1 M HCI 2. 旋涡混合10s 3. 将样品瓶置于滚轴混合器上，旋转混合30 min 质量控制标准品 1. 加入2 mL 0.1 M HCI 2. 旋涡混合10s 3. 将样品瓶置于滚轴混合器上，旋转混合30 mi 使用10mL容量瓶进行内标定容。 内标 1. 加入2mL水 2. 旋涡混合10s 3. 将样品瓶置于滚轴混合器上，旋转混合10 min 4. 用10%磺基水杨酸定容至10 mL AccQ-Tag试剂 首先，计算待处理样品量所需的硼酸盐缓冲液和AccQ·Tag试剂量。如果需要处理大量样品，可以混合多瓶试剂。 硼酸盐缓冲液(样品瓶1) AccQ·Tag试剂(样品瓶2A)*1m 向硼酸盐缓冲液(样品瓶1)中加入430pL 1. 向试剂粉末(样品瓶2A)中加入1.5mL试剂0.5M的NaOH水溶液 稀释液(样品瓶2B)2. 旋涡混合10s 2. 旋涡混合10s3.在55℃下加热样品瓶10 min 复溶后，所有化合物校准品的浓度范围为5uM~1000 uM，胱氨酸校准品的浓度范围为2.5uM~500 pM。丙氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的浓度范围较高，为5uM~4000 uM。 复溶后的质量控制标准品 最终浓度如下 高浓度质量控制标准品-700 pM 低浓度质量控制标准品-50 uM 内标的最终浓度将为100uM， 胱氨酸内标的最终浓度为 50pM AccQ·Tag试剂具有吸湿性， 因此，溶液应保存在室温下 的干燥器中。 请勿将其保存在冷藏柜/ f.试剂布局 确保所有试剂都已按上述说明完成配制，以备后续操作使用。确保将所有试剂置于正确的试剂槽中(如图3所示)，并且试剂量足以处理待分析的样品量(表10)。 图3.96样品分析的溶剂/试剂工作台布局。 表10.试剂和溶剂体积指南 试剂/溶剂 样品 样品 实验器皿 数量-48 数量-96 内标 2.6mL 5mL 4x1.5 mL Eppendorf管 水 7.6mL 10 mL 100mL槽 硼酸盐缓冲液 3.56mL 6.92 mL 4x1.5mL或4x2mL Eppendorf管 AccQ·Tag 1.16 mL 2.12mL 4x1.5mL 注：制备大量样品时(如96个样品)，使用2 mL Eppendorf管才能盛放足够体积的硼酸盐缓冲液。 g.样品分发和条形码 如果使用条形码追踪样品序列： 1.仔细检查，确保所有待分析样品上都贴有条形码，并确认MassLynx Tecan文件转换器软件正在运行。 2. 小心地将待测样品移取至每个Eppendorf管的底部，每个管中至少加入100uL。 3. 将样品管放到样品架中，使条形码可透过右侧的狭缝看见。图4所示为样品管架露出条形码的位置。 图4：样品架露出条形码的位置。 h.执行自动样品制备脚本 安装 1.安装CD中的脚本。执行下一步操作前，请确保已按前文的教程正确设置工作台，否则可能会导致冲突。 2.安装CD中的导入工作列表文件。此工作列表将用于高浓度样品的稀释步骤，在运行脚本前确保“目标位置”列中已正确输入要稀释的孔位置，并保存到csv文件中。 注：请务必确保脚本中的导入工作列表功能已更新导入文件的保存位置。 3.如需追踪条形码，请安装文件转换器，并按照随附的安装说明完成设置。脚本中随附的Amino.csv文件模板可用作文件转换器模板。如需追踪条形码，请在运行脚本前确保将文件转换器设置为执行监测。 执行Tecan脚本 1.在EVOware启动界面中选择run an existing script(运行现有脚本)，然后在脚本选择界面中单击当前的氨基酸脚本。 2.确保已选中Run full script(运行完整脚本)复选框，然后单击绿色的RUN(运行)按钮。 3.月脚本运行期间将弹出一些提示消息。首先弹出的提示消息是要求用户完成系统检查，如图5所示。请确保工作台已按照图1所示设置，各样品板的定位均正确无误。在运行过程中，样品板将被转移到Teleshake位置，然后再被转移到最终位置，因此必须将该位置留空。完成提示消息要求的操作后，单击OK(确定)按钮继续后面的操作。 图5.首先弹出的用户提示。 4.接下来，脚本将弹出三个用户输入窗口，如图6所示。用户必须输入本次运行的文件名[例如161220_0001_Amino(如果使用了Masslynx Tecan文件转换器，请务必在文件名末尾加上模板名称"Amino"，以确保所有数据都能顺利导出)]、要制备的样品数量(例如48或96)以及从哪个孔开始运行。输入相关信息后，在每个提示窗口中单击OK(确定)。 图6.用户输入提示。 5.接下来弹出的输入提示将要求用户从工作台上取下2mL试剂板进行离心。取下试剂板后请单击OK(确定)，让脚本继续执行添加硼酸盐缓冲液的步骤。 图7.提醒用户进行离心操作的用户提示。 6.下一条弹出消息将要求用户将试剂板放回工作台上的初始位置。 单击OK(确定)后将弹出第二条提示消息，要求用户向工作台添加配制好的AccQ·tag试剂。 图8.用户提示。 7.样品板准备好进行分析后，将弹出最后一条提示消息。 图9.最后一条提示消息。 最后步骤 完成Tecan本本后，将密封好的96孔板从Tecan工作台上取下，转移到UPLC系统中进行分析。 未使用的组分和废液可能会被归类为"危险废弃物"进行管理。如需确定适用的废弃物处置方法，请咨询当地监管部门。 平衡CORTECS UPLC C， 1.6 pm， 2.1x150 mm色谱柱 首次使用色谱柱之前，先用100%乙腈冲洗色谱柱，冲洗时，泵流速设置为0.1 mL/min， 5 min内升到0.25 mL/min。确保色谱柱出口连接至合适的废液容器。当流动相可以自由流出时，停止流速并将色谱柱出口连接至检测器。将流速升至0.25 mL/min， 运行20min(约10倍柱体积)。每次进样之前，在初始梯度条件下用10倍柱体积的流动相平衡色谱柱。将柱温设置为55℃，将流速缓慢升至0.5 mL/min，运行12 min。进样前，请确保背压已稳定。 Tecan自动化脚本使用ANSI96孔1mL样品板分析最终样品。用户可以在MassLynx Inlet MethodEditor(液相方法编辑器)中配置UPLC自动进器器样品盘布局。 a. Kairos氨基酸LC分析方法 色谱柱： CORTECS UPLC C.， 1.6 pm， 2.1x150 mm(部件号：186007096) 柱温： 55℃ 流动相A： 0.1%甲酸水溶液(建议使用LC-MS级水) 流动相B： 0.1%甲酸的乙腈溶液(建议使用LC-MS级乙腈) 流速： 0.5mL/min 进样体积： 2uL步骤2得到的衍生化样品 梯度： 梯度时间表 时间(min) 流速 流动相 流动相 曲线 (mL/min) A(%) B(%) 0.0 0.5 99% 1% 一 1.0 0.5 99% 1% 6 2.0 0.5 87% 13% 6 5.5 0.5 85% 15% 6 6.5 0.5 5% 95% 6 7.5 0.5 5% 95% 6 7.6 0.5 99% 1% 6 9.0 0.5 99% 1% 6 密封清洗液： 80%水：20%甲醇 弱洗针液/ 0.1%甲酸水溶液 灌注清洗溶液： 强洗针液/ 0.1%甲酸的乙腈溶液 清洗溶液： Please note： The columnmight take some time toreach 55℃. In addition， theentire equilibration step maytake longer. 保留时间大致范围 丙氨酸 同分异构化合物的洗脱顺序 化合物 母离子质量数(m/z) 第一洗脱物 第二洗脱物 第三洗脱物 亮氨酸 302.2 异亮氨酸 别异亮氨酸 亮氨酸甲基 组氨酸 340.2 3-甲基组氨酸 1-甲基组氨酸 氨基丁酸 274.2 y-氨基丁酸 β-氨基丁酸 a-氨基丁酸 肌氨酸/丙氨酸 260.2 肌氨酸 β-丙氨酸 丙氨酸 推荐的氨基酸MRM通道 化合物* 通道** 碰撞能量 扫描窗口*** 肌肽(5) 397.20>171.10 25 1.70-2.70 鹅肌肽(5) 411.20>171.10 20 1.90-3.00 犬尿氨酸(4) 379.20>171.10 25 4.30-5.80 色氨酸(20) 375.20>171.10 20 5.50-6.50 精氨基琥珀酸(5) 461.20>171.10 30 2.00-2.60 用作内标的化合物 1 甘氨酸1C，，15N 249.20>171.10 20 1.70-2.70 2 赖氨酸C，15N， 248.10>171.10 15 2.40-3.40 3 组氨酸3C15N， 335.20>171.10 20 1.70-2.30 4 天冬酰胺C15N， 309.20>171.10 20 1.50-2.50 5 精氨酸13C。15N， 355.20>171.10 20 1.90-2.60 6 丝氨酸1C，，15N 280.20>171.10 20 1.70-2.70 7 天冬氨酸1C，15N 309.20>171.10 20 1.80-2.80 8 谷氨酸13C，，15N 324.20>171.10 20 1.70-2.70 9 苏氨酸1C，15N 295.20>171.10 20 1.80-3.00 10 丙氨酸I3C，，15N 264.20>171.10 20 2.00-3.00 11 月氨酸13C，，15N， 292.20>171.10 20 2.00-3.50 12 胱氨酸1C，，15N， 295.10>171.10 15 2.70-3.10 13 缬氨酸13C，，15N 294.20>171.10 20 3.00-4.00 14 异亮氨酸13C，15N 309.20>171.10 20 4.50-5.50 15 亮氨酸13C。15N 309.20>171.10 20 4.70-5.70 16 谷氨酰胺1C，，15N， 324.20>171.10 20 2.00-2.60 17 蛋氨酸13C，15N 326.20>171.10 20 2.50-4.00 18 苯丙氨酸1C，，15N 346.20>171.10 20 5.00-6.50 19 酪氨酸3C，15N 362.20>171.10 20 2.50-4.00 20色氨酸13C，15N 388.20>171.10 20 5.50-6.50 *括号中的数字代表建议使用的内标。 **进行三重四极杆分析时需要使用的子离子m/z。进行单四极杆分析时请使用母离子。 ***列出的扫描窗口仅作参考之用。分析时应执行初始进样以确保系统适应性。由于存在系统差异，可能需要调整扫描窗口。 以下分析物只能进行半定量分析： -羟脯氨酸 -胱硫醚 -精氨基琥珀酸 100- %- 0 Asparagine 2.Serine 3. Glycine4. B-Alanine5. Sacrosine6. Alanine7. Proline8. Lysine9. Tyrosine10.Valine11.Iso-Leucine12.Allo Iso-Leucine13.Leucine 14.Phenylalanine15. Tryptophan 代表性色谱图，由图可见主要氨基酸之间实现了分离。 表11.MS条件(Xevo TQ-S micro) 校准： 单位质量分辨率 模式： ESI Positive 锥孔电压 30V 毛细管电压 2.0 kV 离子源温度 150°C 脱溶剂气温度 500°C 锥孔气流速 20L/Hr 脱溶剂气流速 1000L/Hr 表12.MS条件(ACQUITY QDa) 校准： ESI+ 锥孔电压 10 V 毛细管电压 0.8 kV 离子源温度 120°C 脱溶剂气温度 600°C 以上条件在Xevo TQ-S micro和ACQUITY QDa质谱检测器上进行了验证。如果使用其它质谱仪，应对信号强度进行优化，最大限度提升性能。 数据处理 在MassLynx样品列表中输入每个校准品和QC标准品的浓度(每个批次的产品都具有特定的浓度)。浓度值可在COA报告(Certificate of Analysis)上找到， 请访问waters.com/COA。为待测分析物含量添加标准品浓度列，可根据需要添加多列(Conc A-Conc T)。有关输入标准品浓度和自定义样品列表布局的更多信息，请参阅MassLynx帮助功能。(在帮助功能中搜索sample list(样品列表)。)分析浓度大于1000pM的样品时，请使用校准品7。 用户可以在TargetLynx中创建包含标记(突出显示分析失败结果)的自定义报告模板。请参阅TargetLynx帮助功能了解有关自定义报告的更多信息。(在TargetLynx中搜索report layout/flags(报告布局/标记)。) MassLynx最多可显示20个浓度列。如果需要更多化合物结果，则需要再次处理数据，然后使用这些分析物的标准品浓度更新样品列表。 故障排除信息 衍生化 AccQ·Tag衍生化试剂只需几毫秒就能与伯胺和仲胺基团迅速反应。过量试剂会以较慢的速度与水反应，在几十秒内发生水解。 必须有足够的过量试剂才能保证反应完全。 如果试剂发生严重降解，可能会导致结果不一致。由于被水水染(保存不当)而导致试剂老化和水解是最常见的降解原因。试剂在极端的高或低pH条件下可能发生严重降解。如果怀疑AccQ-Tag试剂发生了降解，请使用新配制的AccQ·Tag重新分析。 有时，尿液样品中的氨含量可能较高。氨可使衍生化试剂饱和，进而使得用于氨基酸衍生化的过量摩尔数减少。如果怀疑尿液中过高的氨含量导致了问题，请在衍生化之前稀释样品。 第1步：蛋白沉淀 1. 向试剂板中加入50 uL校准品、QC标准品或样品 内标中的磺基水杨酸可使样品中的蛋白质沉淀。 2. 向试剂板中加入50uL内标 3. 用振荡器混合试剂剂20s 4. 向试剂板中加入50pL水 5. 用振荡器混合试剂剂20s 6. 如有必要，用1mL 0.1M HCI稀高浓度样品 7. 以3600g的转速将试剂板离心15min 经过衍生化处理的样品盛放在密封的样品瓶中，可在室温下稳定存放1周，方便分析人员在需要时重新检测样品。 如果系统灵敏度较高，则需要稀释浓度超过500 uM的校准品、QC标准品和样品，避免出现与检测器相关的线性问题。 第2步：氨基酸衍生化 1. 执行离心步骤时，向样品板中加入70uL硼酸盐缓冲液 2. 向样品板中加入10 pL步骤7得到的上清液 3. 向样品板中加入20 pLAccQ·Tag试剂 4. 用振荡器混合样品板20s 5. 样品在55℃下加热10 min， 然后冷却3 min 加热器温度较高，操作时请务必小心 6. 用振荡器混合样品板20s，然后取走进行分析。 未使用的组分和废液可能会被归类为“危险废弃物”进行管理。如需确定适用的废弃物处置方法，请咨询当地监管部门。 的pH值不正确，酸度过高。 确保使用的是正确的硼酸盐 缓冲液(加NaOH)，并在加入 AccQ·Tag前充分混合样品。 该试剂只与未质子化的胺反应， 因此必须保证pH值在8到10 之间。如果pH值过低，将 无法保证所有的胺都处于 未质子化状态；pH过高则 可能破坏试剂。 涡旋混合非常重要，因为该 操作可确保试剂抢在与水反应 之前与氨基酸反应。试剂与 氨基酸反应的速率比水快， 因此充分混合至关重要。 所以，请勿在自动进样器中 进行衍生化处理。 VII.订购信息 Product description Components Part number Kairos氨基酸校准品套装(500+)、Kairos氨基酸质量控制标准品套装(500+)、 Kairos氨基酸 Kairos氨基酸内标套装(500+)、CORTECS UPLC Cg 1.6 pm， 2.1x150 mm 176004377 500+(自动) 色谱柱、3xAccQ·Tag Ultra"3X"衍生化试剂盒、Kairos氨基酸复溶试剂、 3x甲酸、Kairos"氨基酸试剂盒自动化脚本Kairos氨基酸样品制备试剂盒、 首次订购 Kairos氨基酸试剂盒成分指南 Kairos氨基酸校准品套装(500+)、Kairos氨基酸质量控制标准品套装(500+)、 Kairos氨基酸 Kairos氨基酸内标套装(500+)、3xAccQ·Tag Ultra"3X"衍生化试剂盒、 176004378 500+(自动) Kairos氨基酸复溶试剂、3x甲酸、Kairos氨基酸试剂盒自动化脚本、 再次订购 Kairos氨基酸样品制备试剂盒、Kairos氨基酸试剂盒成分指南 Kairos氨基酸校准品套装(500+)、Kairos氨基酸质量控制标准品套装(500+)、 Kairos氨基酸 Kairos氨基酸内标套装(500+)、CORTECS UPLC C18， 1.6 pm，2.1x150 mm 176004379 500+(自动) 色谱柱、3xAccQ-Tag Ultra"3X"衍生化试剂盒、Kairos氨基酸复溶试剂、 首次订购 3x甲酸、10xTruView LCMS样品瓶、Kairos氨基剂试剂盒成分指南 Kairos氨基酸 Kairos氨基酸校准品套装(500+)、Kairos氨基酸质量控制标准品套装(500+)、 Kairos氨基酸内标套装(500+)、3xAccQ-Tag Ultra"3X"衍生式试剂盒、 176004380 500+(手动) 再次订购 Kairos氨基酸复溶试剂、3x甲酸、10xTruView LCMS样品瓶、 Kairos氨基酸试剂盒成分指南 本产品仅供研究使用，不适用于诊断 仅供研究使用试剂盒质保： 沃特世科技公司(经营业务所用名称为“沃特世公司”，下称“沃特世”)保证，遵循本文所述方案使用本试剂盒(下称“试剂盒”)时，试剂盒符合标签中的规格，且在实质上达到标签中所述的性能规格。本试剂盒仅设计用于研究用途，不适用于任何临床诊断目的。本试剂盒仅限具有相应资质的人员使用。本有限质保受以下条件限制。 例外 上述有限质保不适用于由以下原因导致的材料规格偏差：(a)将试剂盒用于本用户手册中规定的用途之外的其它用途，包括但不限于将试剂盒或其中的任何组件用于任何临床诊断用途； (b)在未经沃特世明示授权的情况下将本试剂盒用于调查用途；(c)任何第三方组件的错误或缺陷；(d)改造试剂盒组件；(e)客户任何有意或无意的行为或疏忽；(f)滥用或误用试剂盒；(g)试剂盒产品可能使用的任何信息系统或仪器出现的任何故障；(h)未按照本文档中的说明保存、处理或维护试剂盒。 唯一补救措施 如果试剂盒性能未能达到上述有限质保所述的标准，沃特世的唯一一任，亦即客户的唯一补救措施是完全遵从沃特世的判定，由沃特世决定为客户更换试剂盒或试剂盒部分组件，或者决定退还客户购买试剂盒或试剂盒部分组件所支付的费用。 此处规定的有限质保具有唯一性，可代替所有其它明示或暗示的陈述、质保或保证，包括但不限于：任何有关适销性的默示担保、有关试剂盒用于任何特定用途的适用性(包括用于临床诊断程序或用于经过或未经过其它经医学确认的诊断产品或程序确认认断结果的调查用途)的默示担保，或者有关非侵权的默示担保，以及交易或执行过程中产生的任何质保。客户明确承认，由于试剂盒本身及其制造工艺的复杂性，沃特世公司不保证也无法保证试剂盒在使用程中不出错或没有缺陷。 不论何种情形，沃特世及其供应商都不对任何间接、偶然、特殊、典型、惩罚性或连带损害(包括但不限于因商业信息丢失而引起的损失，或者由于使用或无能力使用本试剂盒所导致的任何经济损失)承担任何责任，即使沃特世已被告知产生此类损失的可能性。如果沃特世的免责声明无效，则在任何情况下，沃特世的责任赔偿金都不会超过用户购买与损害相关的试剂盒的费用，双方均同意此为针对该试剂盒相关风险的合理有限有任条款。 Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 沃特世公司。Waters、The Science of What’s Possible、Kairos、ACQUITY、UPLC、QDa、MassLynx、TargetLynx、CORTEX、TruView、AccQ-Tag和Xevo是沃特世公司的商标。试剂：爱尔兰制造。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-6156 2666 广州：020-28296555 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400) 820 2676 Waters"Kairos"氨基酸试剂盒 I.简介 II.保存和稳定性 III.使用Kairos氨基酸分析试剂盒IV. 入门指南 a.处理要求 b.为氨基酸分析设置自动移液平台 c.准备Tecan Freedom EVO 100/4 d.试剂制备 e.校准品、质量控制标准品、内标和AccQ?Tag复溶说明 f.试剂布局 g.样品分发和条形码 h.执行自动样品制备脚本V. 推荐的分析方法  a.Kairos氨基酸LC分析方法 b.Kairos氨基酸MS分析方法VI. 工作流程概述 VII. 订购信息