血清中氨基酸检测方案(专用色谱柱)

[应用纪要1WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [应用纪要] 用于人血清中氨基酸的MetaboQuan-R：一种适用于代谢组学研究的快速、靶向UPLC-MS/MS方法 Billy Joe Molloy 应用优势 可在4 min内通过单次运行同时分析29种氨基酸 高通量分析意味着可以对更多的样品组进行快速分析 快速分离同分异构体 利用通用型LC-MS配置实现从一种化合物到另一种化合物的多功能切换 沃特世解决方案 AccQ-Tag包 CORTECSUPLC色谱柱 ACQUITYUPLCI-Class系统 XevoTQ-S micro MassLynx软件 TargetLynx"软件 Quanpedia软件MetaboQuan-R" 关键词 靶向、氨基酸、UPLC、串联四极杆、XevoTQ-Smicro、多重反应监测(MRM)、生物标志物、人血清、代谢组学 简介 氨基酸是蛋白质的组成部分，也是人类生化系统中极为重要的分子。这些化合物分析通常使用衍生化方法，再进行流路进样分析，即串联质谱(FIA-MS/MS)。但这种方法不能区分同分异构体，以至于从此类分析中获取的信息有限。在这里，我们将为您介绍一种高通量UPLC-MS/MS研究方法，用于半定量分析人血清样品中的衍生化氨基酸。本应用纪要也是MetaboQuan-R方法包的一部分。 图1.人血清中主要氨基酸异构体的分离结果。 人血清样品制备 使用Waters""AccQTag包制备人血清样品。使用磺基水杨酸对样品进行破碎处理，然后按照下列步骤进行衍生化： 第1步 向1.5 mL eppendorf管中加入50pL样品 第2步 加入50 pL10%基基水杨酸 第3步 涡旋混合5s 第4步 加入50pL水 第5步 涡旋混合5s 第6步 在10000 rpm (5℃)下离心10 min 第7步 向最大回收样品瓶中加入70pL硼酸盐缓冲液(取自AccQTag包) 第8步 转移10pL上清液到最大回收样品瓶中 第9步 涡旋混合5s 第10步 加入20 pLAccQTag试剂(取自AccQTag包) 第11步 每份样品的试剂添加完毕后，涡旋混合5s，然后让样品在室温下静置1 min 第12步 在55℃下加热10 min 第13步 石在最大回收样品瓶中，用80：20的水：乙腈进行1：10稀释(90pL稀释液加10pL样品) 第14步 进样2pL LC条件 采用配有CORTECS T3 2.7 um (2.1×30mm)分析柱的ACQUITYUPLCI-Class系统(固定定量环)进行UPLC分离。以1.3 mL/min的流速进样2pL。流动相A为含0.01%甲酸的水溶液，流动相B为50%异丙醇(溶于含0.01%甲酸的乙腈中)。2.4分钟内将流动相B由1%梯度增加到8%进行分离处理，，再用98%流动相B清洗色谱柱0.9分钟。接下来重新平衡色谱柱，使其恢复初始条件。分析柱温度维持60℃。 MS条件 使用Xevo TQ-S micro质谱仪进行多重反应监测(MRM)分析。所有实验均在正离子电喷雾电离(ESI+)模式下进行。离子源温度和毛细管电压保持不变，分别设置为150℃和2.0kV。锥孔气流速为50L/h，脱溶剂气温度为650℃。 信息学软件 利用MassLynx中的Quanpedia功能将方法信息导入LC-MS系统。这款可拓展展可搜索的数据库不仅可以生成LC和MS方法，还能生成在TargetLynx中用于化合物定量分析的处理方法。 实验结果 使用文中所述LC-MC平台和提取方案分离并检测出29种氨基酸，如表1所示。图1展示了使用上文详述的UPLC方法实现主要同分异构体分离的示例色谱图。 表1.衍生化氨基酸的MS/MS条件和保留时间列表。 已针对衍生化氨基酸开发快速UPLC-MS/MS方法用于研究分析，该方法经证实适用于在生理相关水平下分析人血清中的分析物。物利用通用型LC-MS平台，可应用于多种化合物类别(包括代谢组学、脂质组学和蛋白质组学)，这意味着它可以应用于靶向多组学工作流程中的部分分析。 扫一扫，关注沃特世微信 仅供研究使用。不适用于诊断。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、 The Science of What’s Possible、ACQUITY、UPLC、MassLynx、TargetLynx、MetaboQuan-R、Quanpedia和Xevo是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 成戈：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)820 2676www.waters.com 用于人血清中氨基酸的MetaboQuan-R：：种适用于代谢组学研究的快速、靶向UPLC-MS/MS方法 用于人血清中氨基酸的MetaboQuan-R：：-种适用于代谢组学研究的快速、靶向UPLC-MS/MS方法 应用优势 1）可在4 min内通过单次运行同时分析29种氨基酸2）高通量分析意味着可以对更多的样品组进行快速分析3）快速分离同分异构体 4）利用通用型LC-MS配置实现从一种化合物到另一种化合物的多功能切换简介 氨基酸是蛋白质的组成部分，也是人类生化系统中极为重要的分子。这些化合物分析通常使用衍生化方法，再进行流路进样分析，即串联质谱(FIA-MS/ MS)。但这种方法不能区分同分异构体，以至于从此类分析中获取的信息有限。在这里，我们将为您介绍一种高通量UPLC-MS/MS研究方法，用于半定量分析人血清样品中的衍生化氨基酸。本应用纪要也是MetaboQuan-R方法包的一部分。