核酸中双链DNA检测方案(紫外分光光度)

LAAN-A-UV-C004 Newshttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2015年2月400-650-0439 使用 TrayCell 进行微量核酸定量 Micro-Volume DNA Quantitation Using TrayCell 前言 Introduction 对核酸和蛋白质纯度进行测定或定量时，通常使用紫外可见分光光度计。但多数情况下这些样品体积小，所以需要使用能够测定微量样品的样品池。按照以往的方法，一般使用 25uL的超微量暗池进行测定。本次我们使用 Hellma 公司生产的超微量样品池TrayCell(样品体积为3~5uL)，进行了核酸的微量测定。本文将向您介绍详细的分析示例。 I Hellma 公司制 TrayCellHellma TrayCell TrayCell 的标准规格是光程长为1.0mm， 最少样品体积为3~5uL。如图1所示，只需将样品滴落到池前端，盖好盖子，再放到分光光度计的样品室内即可简单地进行测定。 图1TrayCell的外观和采样操作 Photograph of TrayCell and Sample Pipetting 图2 UV-1800外观图UV-1800 使用TrayCell 进行核酸测定 DNA Analyses Using TrayCell 按照表1所示的分析条件，使用 TrayCell对核酸分析中常用的双链 DNA 中的一种 Lambda-DNA 进行了分析。表2为测定10次后260 nm处的吸光度值及标准偏差值；图3为不同浓度的核酸光谱图；图4为校准曲线。 根据图表可知，重复测定10次吸光度值为1.0的浓度的样品时，得到的标准偏差为 0.014629； RSD 值为1.34%；标准曲线式为Y=0.00201x+0.00827， 由此可知，使用 TrayCell 能够进行高精度测定。 表1分析条件 Analytical Conditions 使用装置 ：岛津紫外可见分光光度计 UV-1800 波长范围 ： 220~350nm 扫描速度 ：中速 采样间距 ：1.0nm 测定模式 ：吸光度 狭缝宽度 ：：1nm(固定) 表 2 260nm 处的吸光度值及标准偏差值 Absorbance Values and Standard Deviations of Nucleic AcidsMeasured Ten Times at 260 nm 260 nm 处的吸光度值 1 1.074 2 1.092 3 1.072 4 1.065 5 1.086 6 1.092 7 1.087 8 1.101 9 1.104 10 1.110 平均 1.088 标准偏差 0.014629 RSD 值 1.34% 图4核酸的校准曲线 Calibration Curve of Nucleic Acids ■总结 Conclusions 综上所述，使用岛津紫外可见分光光度计UV-1800和TrayCell，即使测定超微量样品，也能够准确地完成高精度定量。 图3不同浓度的核酸光谱 Spectra of DNA at Different ConcentrationsRed： 25 ng/uL，Aqua： 50 ng/uL， Brown：100 ng/uLBlue： 250 ng/uL， Greenish yellow：500 ng/uL Pink color： 1000 ng/uL 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 对核酸和蛋白质纯度进行 测定时，通常使用紫外可见分光光度计。由于样品体积小，所以需要使用微量样品池。本文介绍使用超微量样品池TrayCell，体积3-5uL，相比以前一般使用的25uL样品池，能够准确完成高精度定量。10次重复测定吸光度为1.0的样品得到SD为0.014629，RSD为1.34%。标准曲线线性回归系数大于0.999