甘油磷脂中PG/PE/PI/PS/PC检测方案(液相色谱仪)

LAAN-A-LC-C019 Applicationn：NNo.L472Newshttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2015年2月 ApplicationNews 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography 使用 Nexera-e 和 Co-Sense for Impurities 提高磷脂质的分析效率 No.L472 Improved Analytical Workflow for Phospholipids by Nexera-e and Co-Sense for Impurities 全二维液相色谱仪 Nexera-e 可最大限度的利用两个独立的分离系统进行全二维分离； Co-Sense 系统可对特定组分进行浓缩和高分离。通过联用 Nexera-e 和 Co-Sense 系统，对目标样品中所有组分的类型进行比较，即可高度分离目标洗脱组分。 使用该方法对复杂基质样品进行直观分析的同时，还可对测定结果进行详细分析，由此简化了操作，提高了分析效率。本文向您介绍磷脂质的分析应用示例。 ·使用 Nexera-e 进行甘油磷脂的全二维分离Comprehensive Separation of Glycerophospholipids by Nexera-e 甘油磷脂(GPLs)是由甘油构成的磷脂，是构成生物体细胞膜的重要成分。在代谢物组学领域，发挥着重要作用。甘油磷脂根据与磷酸基酯键键合的亲水部分的类型，分为以下组群： Phosphatidylglycerol (PG)， Phosphatidylethanolamine (PE)Phosphatidylinositol (PI)， Phosphatidylserine (PS)， 各组群中的甘油键合有烷基侧链。使用Nexera-e系统，可在第一维通过正相模式分离含不同极性取代基的磷脂质，然后在第二维通过反相模式分离不同链长的磷脂质。图1为常规LC-MS/MS分析磷脂质的示例。表1为分析条件。由此可知，虽然在MRM 模式下可得到各组分的色谱图，但是却难以得到样品的整体信息，并且，可能因为目标组分以外的峰重叠而导致峰变形，或峰强度不足，以及因离子抑制导致定量准确度降低。图2为对甘油磷脂(各500ug/L) 的 MS/MS 测定结果进行全二维分离得到的等高线图。由图可直观分析整体分离的信息，并确认磷脂质的存在状态。其中， PE 和 PC因链长产生高分离，由此得到较高灵敏度，但是其他磷脂质的分析结果并不理想。对于分离度和灵敏度较低的PG和PS， 使用 Co-Sense for Impurities 和中心切割功能，以清除杂杂和提高灵敏度。Nexera-e的分析条件请参考应用报告L462。 图111磷脂质的反相一维分离 图2 MRM正离子模式下的磷脂质二维分离图 1D Reversed Phase Separation of Phospholipids 2D Plot of All Positive MRM Transitions of Phospholipids 使用 Co-Sense for Impurities 进行甘油磷脂中PG 和PS的高分离 Fine Separation of PG and PS Fractions in Glycerophospholipids by Co-Sense for Impurities 通常，使用质谱仪对复杂基质中的微量组分进行分析时，虽然 Nexera-e 可以得到全分离结果，但是对于各个组分，由于将不同分离模式进行组合，因此稀释了样品，由此可能导致灵敏度下降或峰变形。因为 Co-Sense for Impurities 可将第一维分离中得到的目标峰附近的组分群浓缩后，再通过其他模式将其进行分离，从而清除杂质，或者通过捕集阱进行有效浓缩，所以与 Nexera-e联用，是一种极为有效的分析方法。 表 2为 Co-Sense for Impurities 的分析条件。由表可知，与第一维和第二维使用的流动相和色谱柱类型等条件，以及Nexera-e的测定结果基本相同。除了8种目标PG 类和6种PS类(浓度10ug/L)外，制备了8种PG、8种PC、8种PE、4种PI、5种PA(磷脂酸)、4种TG(甘油三酯)和5种DG(甘油二酯)的混合液作为基质，还制备了浓缩100倍的 PG 和PS。图3为将PG(16：0-18：1)和 PS(18：1-18：1)仅进行一维分离的结果与使用 Co-Sense for Impurities 得到的各MRM 转换色谱图的比较结果。由图可知，通过浓缩提高了PG样品的灵敏度，通过中心切割功能减少了 PS样品中的杂质。 综上所述， 联用 Nexera-e 和 Co-Sense for Impurities，可简单迅速地进行分析。 表2分析条件(Co-Sense for Impurities) 图3 MRM负离子模式下PG (16：0-18：1)和PS(18：1-18：1)的反相分离与 Co-Sense 二维分离的比较 Comparison of 1D Reversed Phase and 2D Co-Sense MRM Separations of PG(16：0-18：1) and PS (18：1-18：1) 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( 免责声明： ) *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 甘油磷脂是构成生物细胞膜的重要成分，在代谢组学领用发挥重要作用。可以分为以下组群：PG/PE/PI/PS/PC。常规LCMSMS分析磷脂，虽然在MRM模式下可得到各个组分的色谱图，但难以得到样品整体信息，并有峰强度不足，及定量准确度低等问题。使用Nexera-e进行全二维分离可得到整体分离信息，并确认磷脂的存在状态。使用Co-Sense和中心切割功能，可清除杂质并提高灵敏度。