尿液中替马西泮检测方案(气相色谱仪)

采用安捷伦 RapidFire三重四极杆/质谱系统超快速分析尿中苯二氮草类化合物 应用简报 作者 前言 11 Audubon RdWakefi eld， MA 01880 法医药物筛查为当今的政府执法人员、公司雇员和病理学家广为采纳。传统意义上，这些药物的筛查通常是先进行免疫学测定，然后使用 GC/MS 或是近期更加盛行的 LC/MS进行进一步确认。样品量的逐步增加以及对高分析通量的需求对这一传统技术提出了严峻挑战。在本应用中，我们对一种超高速的 SPE/MS/MS 系统，即安捷伦 RapidFire高通量质谱仪的性能进行了评估，使用此系统对尿液中 ng/mL 低浓度水平的苯二氮草类化合物进行筛查，每个样品的运行时间不到 15s. Agilent Technologies 实验 RapidFire/MS/MS 系统包括以下模块：Agilent RapidFire 360， Agilent 6460三重四极杆质谱， MassHunter B.04.00版定性分析软件以及 RapidFire 积分软件。 RapidFire 三重四极杆系统参数 按照表1中的参数，以每个样品小于13s的速度进行样品分析，在所有分析中，对5种苯二氮草类药物同时监测定量离子、定性离子和内标离子。 试剂 除a-羟基阿普唑仑、氯硝西泮、替马西泮、奥沙西泮、去甲西泮(1.0mg/mL的甲醇溶液)和替马西泮-D5 (1.0 mg/mL的甲醇溶液)购自 Cerilliant 公司 (RoundRock， 德克萨斯州)外，其他所有溶剂和试剂均购自 Sigma-Aldrich公司(St.Louis，密苏里州)。 样品制备 在空白尿液中分别将上述化合物配制成浓度为25000 ng/mL 的混和标准溶液。采用连续稀释法配制出标准浓度，用含内标物替马西泮-D5的水按1：50 的比例稀释标样。将标准溶液转移到多孔板上，离心，然后进样到 RapidFire/MS 系统进行分析。 数据分析 使用 RapidFire 积分软件进行色谱峰的积分处理。将每个化合物的 AUC用替马西泮-D5内标的 AUC 进行归一化处理。对整个数据按1/X²的权重进行线性回归分析。 参数 01 03 驻留时间 碎裂电压 CE CAV a-羟基阿普唑仑 325.1 297.1 10 135 27 3 氯硝西泮 321.1 275 10 115 15 2 替马西泮 301.1 255.1 10 120 21 3 奥沙西泮 287.1 241.2 10 130 17 4 去甲西半 271 140 10 145 27 4 替马西泮内标 306.1 260.1 10 115 21 3 RF状态2 5000 ms RF状态3 5000 ms RF 状态4 500 ms 三重四极杆参数 干燥气温度 350 °C 干燥气流量 8 L/min 雾化器压力 50 psi 鞘气温度 400°C 鞘气流量 11 L/min 喷嘴电压 300 V 结果和讨论 高浓度化合物的残留。分析过程中未见明显的化合物残留。未发现混标中的任何化合物出现信号抑制现象。 表2.a-羟基阿普唑仑的日内和日间精度和准确度 a-羟基阿普唑仑日内准确度% 日内精度% 日间准确度%E 日间精度% (ng/mL) (n=3) (n=3) (n=3) (n=3) 12.5 102.2 2.7 102.5 1.6 125 88.3 0.5 87.7 0.7 250 94.8 3.4 96.0 3.0 1，250 94.4 1.9 93.0 1.1 2.500 109.1 0.7 112.0 0.4 12，500 105.3 0.6 104.1 0.6 25，000 108.4 1.0 107.7 1.0 图1.尿液中α-羟基阿普唑仑的标准曲线 表3.氯硝西泮的日内和日间精度和准确度 氯硝西半 日内准确度% 日内精度% 日间准确度% 日间精度% (ng/mL) (n=3) (n=3) (n=3) (n=3) 12.5 101.0 1.2 100.2 0.5 125 94.6 3.0 98.5 5.1 250 98.8 1.4 99.6 0.7 1，250 95.3 1.2 92.5 0.4 2，500 108.3 0.9 108.5 0.4 12，500 102.6 1.7 100.4 2.4 25，000 101.2 1.4 100.2 2.1 图2.尿液中氯硝西泮的标准曲线 0.45- 表4.去甲西泮的日内和日间精度和准确度 去甲西半 日内准确度% 日内精度% 间准确度% 日日间精度% (ng/mL) (n=3) (n=3) (n=3) (n=3) 12.5 100.5 1.5 101.2 0.7 125 86.3 3.0 88.8 2.0 250 92.7 2.1 91.0 2.1 1，250 95.8 1.7 92.2 0.9 2，500 110.2 1.1 111.1 0.2 12，500 103.9 1.4 106.1 0.4 25，000 105.3 108.9 0.4 图3.尿液中去甲西泮的标准曲线 表5.奥沙西泮日内和日间精度和准确度 奥沙西半 日内准确度% 日内精度% 日间准确度% 日间精度% (ng/mL) (n=3) (n=3) (n=3) (n=3) 12.5 100.0 3.1 97.3 2.9 125 89.2 3.2 93.1 0.7 250 94.9 4.4 98.3 4.6 1，250 98.0 1.5 96.1 1.3 2，500 111.3 1.5 111.0 2.5 12，500 102.5 1.3 99.9 2.3 25，000 100.0 1.1 97.5 1.9 图4.尿液中奥沙西泮的标准曲线 表6.替马西泮日内和日间精度和准确度 替马西泮 日内准确度% 日内精度% 日间准确度% 日间精度% (ng/mL) (n=3) (n=3) (n=3) (n=3) 12.5 103.4 3.6 105.2 1.9 125 85.5 3.8 87.9 1.3 250 94.7 1.6 98.9 1.3 1，250 94.7 1.6 102.0 0.3 2.500 109.2 0.7 110.0 1.4 12，500 105.7 1.4 105.5 0.8 25，000 106.7 0.8 103.2 0.1 图5.尿液中替马西泮的标准曲线 结论 苯二氮䓬类滥用药物的代谢产物可以通过安捷伦高通量的 RapidFire 质谱系统进行精准测定。每个样品的分析时间不足 15s，为这类化合物的检测提供了一个高通量的分析方法。该 SPE/MS/MS 系统可以为尿液中类似小分子量化合物分析提供快速而高效的检测手段。 www.agilent.com/lifesciences/rapidfire 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2012 中国印刷2012年9月28日 5991-0833CHCN 法医药物筛查为当今的政府执法人员、公司雇员和病理学家广为采纳。传统意义上，这些药物的筛查通常是先进行免疫学测定，然后使用 GC/MS 或是近期更加盛行的 LC/MS进行进一步确认。样品量的逐步增加以及对高分析通量的需求对这一传统技术提出了严峻挑战。在本应用中，我们对一种超高速的 SPE/MS/MS 系统，即安捷伦 RapidFire 高通量质谱仪的性能进行了评估，使用此系统对尿液中 ng/mL 低浓度水平的苯二氮类化合物进行筛查，每个样品的运行时间不到 15 s。