甲氧氯普胺中杂质检测方案(液相色谱仪)

应用简报 Agilent小分子药物 Trusted Answers 启用 ISET 的 Agilent 1260 Infinity lIPrime 液相色谱仪 模拟 Waters Alliance 液相色谱仪对甲氧氯普胺及其杂质进行分析 作者 摘要 Melanie Metzlaff 安捷伦科技公司 仪器间方法转移对很多行业来说都是一个至关重要的问题，受监管的制药行业中更是如此。安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 有利于在常规液相色谱系统与安捷伦UHPLC 系统之间实现分析方法的无缝转移。本应用简报展示了使用 ISET 将分析方法从 Waters Alliance 2695 液相色谱仪直接转移到1260 Infinity II Prime 液相色谱仪的过程。采用上述两种系统对甲氧氯普胺及其杂质进行分析。对不同实验中的保留时间与分离度进行评估与比较。 从常规 HPLC 系统到 1260 Infinity II Prime液相色谱仪等 UHPLC 系统的分析方法转移，对很多实验室都是重要而且通常很关键的问题，对处于严格监管环境下的实验室更是如此。改变成熟的分析方法需要进行费时又昂贵的重新验证。1260 InfinityⅡ Prime 液相色谱仪能够通过 ISET 对Waters Alliance 2695 液相色谱仪等传统液相色谱系统进行模拟。 多数液相色谱方法中都使用线性溶剂强度梯度。然而， Alliance 2695 液相色谱仪能够提供不同的梯度曲线，例如凹形和凸形的梯度曲线。启用了 ISET 的1260Infinity lI Prime 液相色谱仪可以模拟这些梯度曲线。 ( 本应用简报介绍了对一种止吐药物甲氧氯普胺及其七种不同杂质的分析。使用 Waters Alliance 2695 液相色谱仪以及凹线梯度对药物混合物进行分离。再用 ISET 将分析方法进 一 步转移到1260Infinity II Prime 液相色谱仪。对两系统得 到的保留时间与分离度进行评估和比较。 ) ( 仪器 ) ( 采用以下仪器对甲氧氯普胺及其杂质进行 分析： ) ( 配备双波长吸收检测器 VWD 2487 的Waters Alliance 2695 高效液相色谱系统 ) ( Agilent 1260 Inf i nity II Prime 液相色谱仪： ) ( Agilent 1260 Infinity ll全能泵 (G7104C) ) ( Agilent 1260 Infinity ⅡI样品瓶进样器(G7129C)，配备集成式样品冷却 (选件#100)以及集成式柱温箱 (6 pL加热器；选件#066) ) ( Agilen t 1260 Infinity ll二极管阵列测器 WR(G7115A)，配备一个标准10 mm 流通池(G1315-60022) ) ( 软件 ) ( Agilent Open L ab CDS 2.2 (M8413A)， 使用OpenLab CDS 2.2 控制 Waters Alliance2695液相色谱仪，安 装 Waters DP 2017R2。 ) 实验中使用下列化合物： ( 盐酸甲氧氯普胺 ) ( 杂质B： 4-乙酰氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯 ) ( 杂质C：4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸杂质 D： 4-乙酰氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯 ) ( 杂质F：4-氨基-5-氯-N-[2-(二乙氨基) 乙基]-2-羟基苯甲酰胺 ) ( 杂质G： N'-(4-氨基-5-氯-2-甲氧苯甲酰 基)-N，N-二乙基-1，2-乙二胺-N-氧化物 ) ( 杂质H：4-乙酰氨基-2-羟基苯甲酸 ) ( · 杂质9：4-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯 每种化合物用100%乙醇溶解至2 mg/mL的浓度， 再 进一步用水稀释至20 ng/uL 的最终浓度。 ) 化学品 ( 所有试剂均为液相色谱级。新制超纯水产 自配置0.22pm 膜式终端过滤器 (Millipak)的 Milli-Q Integral 水纯化 系 统。乙腈购自 Merck (Darmstadt， Germany ) ，甲酸(FA) 购自 VWR (Darmstadt， Germany)。甲氧氯普胺购自 Sigm a -Aldrich (Taufkirchen， Germany)，甲氧氯普胺杂质购自 LGC Standards (Teddington， United Kingdom)。 ) 采用常规分析方法在 Waters Alliance2695液相色谱仪上，应用凹线梯度以及填充 5 um 填料的4.6×150 mm 色谱柱对甲氧氯普胺及其杂质进行分析。图1显示了10次连续运行的叠加色谱图，并将相应的保留时间与分离度列于表中。 表1.甲氧氯普胺及其杂质分析的色谱参数 参数 值 色谱柱 Agilent ZORBAX StableBond C18， 4.6×150 mm，5 pm (部件号883975-902) 溶剂 A)0.1%甲酸水溶液B)0.1%甲酸乙腈溶液 梯度 0 min -8% B 14 min -66%B； 曲线814.1 min-8%B；曲线6 停止时间 18 min 流速 2 mL/min 进样 进样量： 10pL， 进样针清洗3s (60%乙青水溶液) 样品温度 8°C 温 25°℃ DAD 270/4nm，参比波长关闭，5Hz 编号 化合物 RT (min) RSD RT (%) 分离度 1 杂质F 7.50 0.12 一 2 杂质H 8.05 0.12 2.58 3 甲氧氯普胺 8.57 0.07 2.84 4 杂质9 8.93 0.07 2.16 5 杂质G 9.24 0.05 2.08 6 杂质C 10.57 0.04 9.93 7 杂质D 10.78 0.03 1.75 8 杂质B 12.57 0.01 16.46 图1.甲氧氯普胺及其杂质的分析。在 Waters Alliance 2695 液相色谱系统上采集连续10次运行的叠加色谱图。色谱图中的绿色曲线表示溶剂比B 将分离甲氧氯普胺及其杂质的分析方法进一步转移到启用了 ISET 的 1260 Infinity lIPrime 液相色谱仪。图2显示了得到的叠加色谱图以及相应的保留时间和分离度。 通过在1260 Infinity II Prime 液相色谱仪上启用 ISET， 凹线和凸线梯度曲线均可实现。OpenLab CDS 和 ChemStation中，11个不同的梯度图所用的编号与Waters 的编号相同。在这些实验中，使用了曲线8(凹线)和曲线6(线性)。 采用 ISET 将分析方法转移至 1260 InfinityI Prime 液相色谱仪时，能够获得与Alliance 2695 液相色谱仪生成的色谱图高度相似的结果。图3显示了分别在1260 Infinity II Prime 液相色谱仪和Alliance 2695 液相色谱仪采集的色谱图对比。 图2.甲氧氯普胺及其杂质的分析。在1260 Infinity II Prime 液相色谱仪上采集连续10次运行的叠加色谱图。色谱图中的绿色曲线表示溶剂比B 图3.在启用了 ISET 的1260 Infinity ll Prime 液相色谱仪上分析甲氧氯普胺及其杂质采集的叠加色谱图，以及在 Waters Alliance 2695液相色谱仪上分析甲氧氯普胺及其杂质采集的色谱图 两种系统上保留时间表现出优异的一致性，最大偏差约为0.9%，远低于<±5%的规定保留时间偏差。此外，还测量了分离度偏差。除杂质H外，使用1260Infinity II Prime 液相色谱仪运行时多数峰的分离度都更优异。表2显示了保留时间和分离度偏差的详细信息。 ISET 支持将传统方法由常规 HPLC 无缝转移到 1260 Infinity lI Prime 液相色谱仪。通过启用 ISET 可以模拟 Waters Alliance液相色谱仪，即使运行凹线和凸线梯度也能实现。 ( 本应用简报将甲氧氯普胺及其杂质分析方 法从 Waters Alliance 2695 液相色谱仪转 移至12 6 0 In f inity II Prime 液相色谱仪。 保留时间和分离度都呈现了优异的相关 性。此外，多数峰的分离度均有所增加。本应用简报清晰表现出 ISET 的简便易用性。无需改动仪器或改变分析方法即可在1260 Infinity II Prime 液相色谱仪上实现 对甲氧氯普胺及其杂质的分析。 ) 表 2. Waters Alliance 2695 液相色谱仪与 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪的保留时间与分离度比较 化合物 RT 偏差 (min) RT偏差(%) 分离度偏差 分离度偏差(%) 杂质F -0.02 -0.27 一 杂质H -0.07 -0.90 -0.20 -8.28 甲氧氯普胺 0.02 0.23 0.73 20.48 杂质9 0.02 0.22 0.13 5.58 杂质G 0.02 0.23 0.12 5.25 杂质C -0.01 -0.09 0.58 5.51 杂质D 0.05 0.46 0.71 28.76 杂质B 0.06 0.48 2.47 13.06 ( 参考文献 ) ( 1. Gratzfeld-Huesgen， A. A gilent 1 290 ) ( Infinity Binary LC System with ISET - ) ( Emulation of t he Waters Alliance ) 2695 LC system analyzingβ一 blockers (启用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统一模拟 Waters Alliance 2695 液相色谱系统 分析β-阻滞剂)，安捷伦科技公司 应用简报，出版号5991-1603EN， 2014 2. Agilent InfinityLab LC with ISET (启 用ISET的Agilent Infinity 液相色谱 仪)，安捷伦科技公司用户手册， 部件号 G7120-90310，2017 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 右线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com ( 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ) 摘要仪器间方法转移对很多行业来说都是一个至关重要的问题，受监管的制药行业中更是如此。安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 有利于在常规液相色谱系统与安捷伦 UHPLC 系统之间实现分析方法的无缝转移。本应用简报展示了使用 ISET 将分析方法从 Waters Alliance 2695 液相色谱仪直接转移到 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪的过程。采用上述两种系统对甲氧氯普胺及其杂质进行分析。对不同实验中的保留时间与分离度进行评估与比较。前言从常规 HPLC 系统到 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪等 UHPLC 系统的分析方法转移，对很多实验室都是重要而且通常很关键的问题，对处于严格监管环境下的实验室更是如此。改变成熟的分析方法需要进行费时又昂贵的重新验证。1260 Infinity II Prime 液相色谱仪能够通过 ISET 对 Waters Alliance 2695 液相色谱仪等传统液相色谱系统进行模拟。多数液相色谱方法中都使用线性溶剂强度梯度。然而，Alliance 2695 液相色谱仪能够提供不同的梯度曲线，例如凹形和凸形的梯度曲线。启用了 ISET 的 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪可以模拟这些梯度曲线。本应用简报介绍了对一种止吐药物甲氧氯普胺及其七种不同杂质的分析。使用 Waters Alliance 2695 液相色谱仪以及凹线梯度对药物混合物进行分离。再用 ISET 将分析方法进一步转移到 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪。对两系统得到的保留时间与分离度进行评估和比较。结论ISET 支持将传统方法由常规 HPLC 无缝转移到 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪。通过启用 ISET 可以模拟 Waters Alliance 液相色谱仪，即使运行凹线和凸线梯度也能实现。本应用简报将甲氧氯普胺及其杂质分析方法从 Waters Alliance 2695 液相色谱仪转移至 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪。保留时间和分离度都呈现了优异的相关性。此外，多数峰的分离度均有所增加。本应用简报清晰表现出 ISET 的简便易用性。无需改动仪器或改变分析方法即可在1260 Infinity II Prime 液相色谱仪上实现对甲氧氯普胺及其杂质的分析。