食品中维生素 A、四种维生素 E 异构体及微量维生素 D检测方案(液相色谱仪)

采用中心切割法快速分析食品中的维生素A、四种维生素E异构体及微量维生素D 作者 前言 周洁、李浪、杨新磊、 余彦海、肖尧 安捷伦科技(中国)有限公司 有关维生素A、D、E的新国家标准”方法从2017年6月23日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质，用于检测其中所含的维生素A(V)、维生素D(V，)和四种维生素E(V：)异构体的含量。其中，V，由于本身含量低、基质干扰严重，该国家标准方法采用液质联用或半制备正相净化的方式对其进行分离检测。但液质联用方法复杂，维护成本相对较高；而正相净化方法易受流动相等条件影响，从而造成结果不准确。 本方法参照现有的文献方法2.3，基于二维液相色谱技术，成功建立了食品中Ⅴ、四种V异构体及微量V，的中心切割快速分析方法。此方法第一维对Ⅴ和四种V进行分析，并对V，进行初步净化；第二维对V，进行进一步分离，整个分析过程只需一次进样即可完成样品中Ⅴ、四种V儿及微量Ⅴ，的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可避免正相体系不稳定而导致的V，含量检测不准确现象的发生。并且所得结果准确、重现性好，可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。 V、V、V分析 该实验方法采用中心切割的二维液相方法3对食品中V、\V，及 VE 进行分析，该分析过程包含三个阶段：第一阶段为进样/检测V，此时阀的位置为1-2；第二阶段为净化/捕获V，此时阀的位置为1-6；第三阶段为第一维继续检测四种V，第二维检测V，此时阀的位置为1-2，见图1。(具体信息请参阅安捷伦应用简报5991-5194CHCN) 第一维泵/自动进样器 第二维色谱柱 第一维检测器 2 第二维泵 第一阶段：进样、检测V 第二阶段：净化/捕获V， 第三阶段：第一维继续检测V：第二维检测V， 图1.中心切割法同时分析VA、V与四种V的阀切换示意图 第一维 第二维 仪器配置 Agilent 1260 Infinity ll四元泵，部件号 G7111B Agilent 1260 Infinityll自动进样器，部件号 G7129A Agilent 1260 Infinity ⅡI柱温箱，部件号 G7116A， 内置2位-6通阀 Agilent 1260 Infinity ll紫外检测器，部件号G7114B Agilent 1260 Infinity ll二元泵，部件号G7112B Agilent 1260 Infinity lI二极管阵列检测器，部件号7117C， 配 60 mm 超高灵敏度流通池 流动相 A： H，O； B： MeOH A： ACN；B： MeOH 时间 (min) 梯度 时间 (min) 0.0 B(%)80 9.0 10.0 100100 11.0 80 15.0 80 B(%) 0.0 0 4.5 0 4.6 30 9.0 30 9.1 0 流速 1 mL/min 0.3 mL/min 分析柱 Agilent Poroshell 120 PFP， 4.6×100 mm， 2.7 pm Agilent Zorbax Eclipse PAH， 2.1 ×100 mm， 3.5 pm 捕获柱 Agilent Poroshell 120 EC C18，4.6×5 mm， 4 pm 进样量 10pL 柱温 35°℃ 检测波长 0-4 min： 325nm (4nm， 参比波长关闭) 4-15 min： 294 nm (4nm，参比波长关闭)， 20 Hz 264nm (4nm， 参比波长360 nm， 100 nm)，20 Hz 阀位置 0-5.3 min：位置1-2(第一阶段)5.3-5.5 min： 位置1-6(第二阶段) 5.5-15 min：位置1-2(第三阶段) 图2.标准品及样品色谱图(标样V浓度为1 pg/mL， VE 浓度为 10 pg/mL， V浓度为0.1 pg/mL) 由该色谱图表明，一维色谱柱可获得VA、四种 VE 异构体以及杂质的良好分离，第二维可获得2种VD与杂质的良好分离，同时V检测灵敏度良好。 在实际样品中，V和V含量较高，V，含量较低且测定时存在物质干扰，因此本文主要针对V、V，和V进行线性考察，并对V，进行定量限考察。本方法中，Ⅴ与4种V为一组混合标准样品，2种V，为一组混合标准样品。V在 0.1-10 pg/mL 内线性相关系数为 0.9999， V，在0.05-1 pg/mL 内线性相关系数为 0.9997， V在1-100 pg/mL 内线性相关系数为 0.9996。实验测得V，在浓度为0.025 pg/mL时，信噪比 S/N=49， 按S/N=3计算得到V检测限为1.5 ng/mL， 当取样量为10g时，换算为奶粉羊品中Vp3的含量为 0.15 pg/100 g，按S/N=10计算，V，定量限为 5 ng/mL， 当取样量为10g时，换算为奶粉样品中Vp3 的含量为 0.5 pg/100 g。该方法不仅可满足国家标准”中液相方法50.0 ug/L最低标曲浓度点的检测要求，还能满足质谱方法中 10.0 pg/L 最低标曲浓度点的检测要求。 利用二维液相色谱的技术不仅避免了V，正相净化的繁琐步骤，提高了结果的准确性，同时可实现新的食品国标”中四种V异构体的良好分离。因此，该方法是快速分析食品基质中脂溶性维生素的有效手段。 ( 1 . ( GB 5009.82-2016.食品中维生素A 、 D、E的测定. ) ( 2. . L Lang Li， Xing Zhanlei. Online SPE method on determinationof vitamin A， D ， E in milk powder simultaneously [R].2nd D alian International Symposium and Exhibition onChromatography and Related Techniques. 2011： 444 ) ( 3. 杨新磊，余彦海，李浪，肖尧.中心切割法快速分析婴幼儿配方奶粉中的维生素A、维生素E及微量维生素 D.5991-5194CHCN ) 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( C安捷伦科技(中国)有限公司，2018 ) 有关维生素 A、D、E 的新国家标准方法从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质，用于检测其中所含的维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 和四种维生素 E (VE) 异构体的含量。其中，VD 由于本身含量低、基质干扰严重，该国家标准方法采用液质联用或半制备正相净化的方式对其进行分离检测。但液质联用方法复杂，维护成本相对较高；而正相净化方法易受流动相等条件影响，从而造成结果不准确。本方法参照现有的文献方法，基于二维液相色谱技术，成功建立了食品中 VA、四种 VE 异构体及微量 VD 的中心切割快速分析方法。此方法第一维对 VA 和四种 VE 进行分析，并对 VD 进行初步净化；第二维对 VD 进行进一步分离，整个分析过程只需一次进样即可完成样品中 VA、四种 VE 及微量 VD 的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可避免正相体系不稳定而导致的 VD 含量检测不准确现象的发生。并且所得结果准确、重现性好，可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。