蔬菜水果中维生素K1检测方案(液相色谱柱)

蔬菜水果中维生素K1的检测（GB 5009.158-2016） 维生素K1是在天然绿色植物中广泛存在的一种脂溶性维生素，是肝脏合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必须的物质。缺乏维生素K1会引起出血性疾病。因此要多吃蔬菜水果哦！ 下面看看月旭科技对食品中的维生素K1的检测过程及结果。 适用范围及原理 水果、蔬菜等低脂性植物样品,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素 K1,经维生素K1前处理小柱净化,去除叶绿素等干扰物质。用 C18 液相色谱柱将维生素K1 与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。（本实验选用菠菜和苹果） 参考标准：《GB 5009.158-2016 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》 溶液的配置 维生素K1标准贮备溶液(1mg/mL):精确称取 50mg(精确至0.1mg)维生素K1标准品于50mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。将溶液转移至棕色玻璃容器中。在-20℃下避光保存,保存期2个月。 维生素K1标准中间液(100μg/mL):准确吸取标准贮备溶液10.00m于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存期2个月。 维生素K1标准使用液(1.00μg/mL):准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。 正己烷-乙酸乙酯混合液( 90+10 ):量取 90mL正己烷,加入 10mL 乙酸乙酯,混匀 流动相:量取甲醇 900mL ,四氢呋喃 100mL ,冰乙酸 0.3mL ,混匀后,加入氯化锌 1.5g ,无水乙 酸钠 0.5g ,超声溶解后,用 0.22 μ m 有机系滤膜过滤。 提取步骤 精确称取5g经均质匀浆的样品于50mL离心管中，加入5mL异丙醇，旋涡1min，超声5min，再加入10mL正己烷，旋涡震荡提取3min，6000r/min离心5min，移取上清液至25mL棕色容量瓶中，向下层溶液中加入10mL正己烷，重复提取1次，合并上清液于上述容量瓶中，正己烷定容至刻度。用移液管准确移取上清液5mL至15mL离心管中，氮气轻吹至干，加入1mL正己烷溶解，待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom®维生素K1前处理小柱，规格：2g/6mL。 活化：5mL正己烷，弃去 上样：待净化液全部上样，弃去 淋洗：5mL正己烷淋洗，弃去 洗脱：15mL正己烷-乙酸乙酯混合液洗脱，收集于50mL离心管中，抽干 氮吹至近干,用甲醇定容至5mL，并过0.22 µm滤膜，上HPLC检测。 色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18 4.6×250mm,5μm Ultimate® Zn 4.6×50mm 流动相：甲醇 900mL ,四氢呋喃 100mL ,冰乙酸 0.3mL ,混匀后,加入氯化锌 1.5g ,无水乙 酸钠 0.5g 流速：1.0mL/min 柱温：30℃ 进样量：10μL 检测波长：激发波长为243nm，发射波长为430nm 7、色谱图或者加标回收率结果 图1.维生素K1对照10ng/mL 图2.苹果样+标0.05μg/g 图3.苹果原样 图4.菠菜样+标1μg/g 图5.菠菜原样 表1：加标回收率 名称 基质 原样峰面积 对照品峰面积 样加标峰面积 加标水平μg/g 回收率% RSD% N=3 维生素K1 苹果 119239 163812 （10ng/mL） 253349 0.05μg/g 82 3.86 251519 81 261381 87 菠菜 4540233 2657936 （200ng/mL） 6764112 1μg/g 84 3.50 6887698 88 6919257 90 相关产品信息 声明:除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 Tel:400-810-6969 邮编：321000 E-mail:lingyuyu@welchmat.com 维生素K1是在天然绿色植物中广泛存在的一种脂溶性维生素，是肝脏合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必须的物质。缺乏维生素K1会引起出血性疾病。因此要多吃蔬菜水果哦！下面看看月旭科技对食品中的维生素K1的检测过程及结果。适用范围及原理水果、蔬菜等低脂性植物样品，用异丙醇和正己烷提取其中的维生素K1，经维生素K1前处理小柱净化，去除叶绿素等干扰物质。用C18液相色谱柱将维生素K1与其他杂质分离，锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。（本实验选用菠菜和苹果）参考标准：《GB 5009.158-2016 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》溶液的配置维生素K1标准贮备溶液(1mg/mL)：精确称取50mg(精确至0.1mg)维生素K1标准品于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。将溶液转移至棕色玻璃容器中。在-20℃下避光保存，保存期2个月。维生素K1标准中间液(100µg/mL)：准确吸取标准贮备溶液10.00m于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中，在-20℃下避光保存，保存期2个月。维生素K1标准使用液(1.00µg/mL)：准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。正己烷-乙酸乙酯混合液(90+10)：量取90mL正己烷，加入10mL乙酸乙酯，混匀。流动相：量取甲醇900mL，四氢呋喃100mL，冰乙酸0.3mL，混匀后,加入氯化锌1.5g，无水乙酸钠0.5g ，超声溶解后，用0.22µm有机系滤膜过滤。提取步骤精确称取5g经均质匀浆的样品于50mL离心管中，加入5mL异丙醇，旋涡1min，超声5min，再加入10mL正己烷，旋涡震荡提取3min，6000r/min离心5min，移取上清液至25mL棕色容量瓶中，向下层溶液中加入10mL正己烷，重复提取1次，合并上清液于上述容量瓶中，正己烷定容至刻度。用移液管准确移取上清液5mL至15mL离心管中，氮气轻吹至干，加入1mL正己烷溶解，待净化。SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® 维生素K1前处理小柱规格：2g/6mL活化：5mL正己烷，弃去上样：待净化液全部上样，弃去淋洗：5mL正己烷淋洗，弃去洗脱：15mL正己烷-乙酸乙酯混合液洗脱，收集于50mL离心管中，抽干氮吹至近干，用甲醇定容至5mL，并过0.22µm滤膜，上HPLC检测。色谱条件色谱柱：月旭Ultimate® XB C18  4.6×250mm，5µmUltimate® Zn  4.6×50mm流动相：甲醇900mL，四氢呋喃100mL，冰乙酸0.3mL，混匀后，加入氯化锌1.5g ，无水乙酸钠 0.5g流速：1.0mL/min柱温：30℃进样量：10µL检测波长：激发波长为243nm，发射波长为430nm色谱图或者加标回收率结果图1 维生素K1对照10ng/mL图2 苹果样+标0.05µg/g图3 苹果原样图3 苹果原样图5 菠菜原样表1 加标回收率相关产品信息