蔬菜中维生素K1检测方案(液相色谱仪)

蔬菜中维生素K1的测定——HHPLC法 www.hg17.com 蔬菜中维生素K1 的测定——HPLC法 食品类 蔬菜中维生素K1的测定——HPLC法 说明 维生素K是一种脂溶性维生素，在自然界中主要以叶绿醌(Phylloquinone，VK1)形式存在。近几十年来，食物中VK1的分析测定日益受到国内外研究人员的关注，检测方法也得到了发展。其中HPLC法以灵敏、精密度高、以及分离效果好、样品处理简单、分析速度快等优点而受到广泛应用。蔬菜中VK1含量丰富，但也同时存在各种干扰物质，测定中必须去除这些杂质。如何避免VK1破坏并去除干扰是分离的关键。一般常用的样品处理方法有皂化法，色谱法等。VK1遇碱易分解，皂化处理容易破坏样品中的VK1，使测定结果降低，色谱法对样品中VK1的分离效果较好，但是色谱条件有一定难度，准确度也受到一定影响。本实验选用失活的磷酸盐处理过的氧化铝做色谱柱，对样品进行净化处理，然后再进行HPLC分析，取得较好的分离效果。 分析条件 仪器：P5000高压恒流泵， UV5000 紫外检测器， N2000工作站 色谱柱：Vertex AQ-C18 5um 4.6×250mm 流动相：甲醇：正己烷(98：2) 流速：1.5mL/min 检测波长：248nm 进样量：20uL 样品提取：称取已打成匀浆的新鲜样品2~10g，或已磨醉过筛的脱水样品0.2~4g(VK1含量不低于2 ng)，加到具塞锥形瓶中，加入25~50ml丙酮，盖上塞子，振摇3~5min，静置1min。将上部澄清液倒入已装有50~100ml 0.14mol/LNazSO4溶液的分液漏斗中，残留物再用丙酮重复提取2~3次。然后继续用石油醚提取3~4次，每次用量约25ml，至残渣呈无色，将提取液并入同一分液漏斗中，振摇1min，静置分层。弃水相，有机相用蒸馏水洗涤4~5遍，至水相澄清。弃水相，将有机相经无水 www.hg17.com Na2SO4脱水后转至旋转蒸发瓶中，于60℃水浴中减压蒸馏至约2ml时取下，立即用氮气吹干，用石油醚定容至2.0 ml，待净化。 1.3.2装柱：将失活的磷酸盐处理好的氧化铝湿法填充色谱柱，至柱高为20cm，其上端再加2cm无水NazSO4。打开活塞，调整流速为每秒1滴。 1.3.3净化：取1.0ml样品提取液加至色谱柱上，当样品液流至与NazSO4平齐时，加2ml石油醚冲洗柱壁，流下。加20ml石油醚洗脱色谱柱，弃除流出液。然后，改用30ml洗脱剂(石油醚：乙醚97：3)洗脱。用旋转蒸发瓶收集流出液，于旋转蒸发器浓缩近干，用氮气吹干后，用正己烷定容至1.0ml。移入小塑料离心管中，离心 5min(5000r/min)，上清净化液供HPLC分析。 谱图 对照品 样品 结果及讨论 用上海禾工 STI5000 液相色谱仪测定蔬菜中维生素K1，方便，准确，快速。 址：上海市中山北路绿洲广场B楼(