胆碱及其代谢物中分离检测方案(液相色谱仪)

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检测样品: 原料药
检测项目: 其他
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发布时间: 2018-08-16
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安捷伦科技(中国)有限公司

钻石23年

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使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 和 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 色谱柱分析胆碱及其代谢物。与 Poroshell 120 HILIC-OH5 相比,Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱可提供更好的峰形和略高的灵敏度,但是保留性能较弱。本文使用 Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。结果发现,在流动相中添加 10 mmol/L 乙酸铵可以获得最佳峰形。

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应用简报 Agilent代谢组学Trusted Answers 使用亲水相互作用色谱 (HILIC) 与LC/MS/MS分析胆碱代谢物 Rongjie Fu安捷伦科技(上海)有限公司 Yue Song 使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 和 Agilent InfinityLab Poroshell120 HILIC-OH5色谱柱分析胆碱及其代谢物。与 Poroshell 120 HILIC-OH5 相比,Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱可提供更好的峰形和略高的灵敏度,但是保留性能较弱。本文使用 Poroshell 120 HILIC-Z色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。结果发现,在流动相中添加10 mmol/L 乙酸铵可以获得最佳峰形。 胆碱及其代谢物甜菜碱、乙酰胆碱和甘油磷酰胆碱属于小分子强极性季胺化合物,无法在反相色谱柱上保留。新开发的HILIC 化学键合相采用表面多孔颗粒填料技术,是保留这类化合物的理想选择。在本应用简报中,使用 InfinityLabPoroshell 120 HILIC-OH5 和 AgilentInfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 化学键合相色谱柱对胆碱及其代谢物进行分离。使用 Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。 Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统用于低浓度样品的检测。 图1.胆碱及其代谢物 试剂与化学品 所有试剂均为 HPLC级或更高等级。HPLC 级乙乙购自J.T. Baker (CenterValley, PA, USA)。水经由 ELGA PURELABChorus 系统 (High Wycombe,UK) 纯化。甲酸、乙酸、乙酸铵和氢氧化铵购自北京百灵威科技有限公司。胆碱、甜菜碱、、乙酰胆碱和甘油磷酰胆碱购自 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)。标准溶液用 90:10 乙腈:水溶液配制而成,浓度为 0.5 nmol/L。 ( 仪器与材料 ) ( 色谱柱入口: Agi l ent InfinityLabQuick Connect 快速连接液相色谱接 头(部件号5067-5965) ) ( 色谱柱出口: Agi l ent InfinityLabQuick Turn 液相色谱接头 : ( (部件号 5067-5966) ) ( Agilent Captiva 经济型过滤器, PTFE膜, 直 径13 mm, 孔 径0.2 pm (部 件号5190-5265) ) ( 安捷伦样品瓶,螺口盖,棕色,带书 写签,经认证,2mL(部件号5182- 0716) ) ( 安捷伦固定螺口盖,蓝色,带PTFE/ 红色硅胶隔垫(部件号5190-7024)Agilent InfinityLab 溶剂瓶,棕色,1000mL(部件号9301-6526) ) ( Agilent InfinityLab Stay Safe 溶剂瓶安 全盖, GL45 , 3口, 小 1个放空阀(部件号5043-1219) ) ( Eppendorf 移液器和连续分液器 ) ( 超声仪(VWR, Radnor,PA, USA) ) ( 仪器 ) ( Agilent 1290 Infinity lI 高速泵 (G7120A) ) ( Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B) ) ( Agilent 1290 I nfinity II MCT (G7116B) ) ( Agilent 6460三重四极杆液质联用系统(G6460A) ) ( · Agilent MassHunter LC/MS 数据采集 软件,版本 B.08.00 ) 软件 ( Agilent MassHunter 定性分析软 件 ,版本 B.07.00 ) HPLC 条件 色谱柱 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z, 2.1 ×100 mm,2.7 pm (部件号685775-924)InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5, 2.1×100mm,2.7 pm (部件号685775-601) 流动相A 酸或缓冲液的水溶液(如图2所示) 流动相B 乙腈 梯度 0至5 min, A 由10%升至50%; 5至6min,A由50%升至60%; 6至8min,A 保持60%; 停止:8 min 流速 0.30mL/min 柱温 30°C 进样量 1pL 质谱条件 离子模式 ESI/喷射流ESI, 正离子模式 干燥气温度 250℃ 干燥气流速 5 L/min 雾化器压力 45 psi 鞘气温度 250°C 鞘气流速 11 L/min 毛细管电压(+) 3500V 喷嘴电压(+) OV MRM条件 AEMV, 500V 如图2所示,考察了不同的流动相添加剂。随着流动相 pH值增加,乙酰胆碱和胆碱在 Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱上的保留能力增强,但是响应信号稍有降低。 当使用中性或碱性流动相时,它们的保留能力保持不变。然而,在中性 pH值流动相条件下,乙酰胆碱和甜菜碱的信号强度均比碱性条件下高。因此在流动相中添加10 mmol/L 乙酸铵能够为四种化合物提供最好的分离。 在相同中性 pH 值流动相的条件下,对 比了两种 HILIC 色谱柱的分离效果。Poroshell 120 HILIC-OH5 色谱柱的分析结果显示所有化合物的保留性能均有所增强,出峰顺序发生改变,甜菜碱的灵敏度提高。然而, Poroshell 120 HILIC-Z色谱柱能够为关键分析物乙酰胆碱和胆碱提供更好的峰形。 总体来说,在中性 pH 值条件下使用添加乙酸铵的流动相以及 InfinityLab Poroshell120 HILIC-Z 色谱柱可以实现胆碱及其代谢物的最佳分离。对另一种不同的 HILIC化学键合相(即 InfinityLab Poroshell 120HILIC-OH5)也同样进行了分离性能的评估。甜菜碱的灵敏度在 HILIC-OH5 色谱柱上得到了提高,然而乙酰胆碱和胆碱的峰形和灵敏度在 HILIC-Z 色谱柱上更出色。 图3.使用10 mmol/L 乙酸铵水溶液作为流动相A时, InfinityLab Poroshell 120 HILIC-0H5 与 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱的结果对比 查找当地的安捷伦客户中心: www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线:800-820-3278,400-820-3278(手机用户) 联系我们: LSCA-China_800@agilent.com 在线询价: www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更,恕不另行通知。 摘要使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 和 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 色谱柱分析胆碱及其代谢物。与 Poroshell 120 HILIC-OH5 相比,Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱可提供更好的峰形和略高的灵敏度,但是保留性能较弱。本文使用 Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。结果发现,在流动相中添加 10 mmol/L 乙酸铵可以获得最佳峰形。前言胆碱及其代谢物甜菜碱、乙酰胆碱和甘油磷酰胆碱属于小分子强极性季胺化合物,无法在反相色谱柱上保留。新开发的 HILIC 化学键合相采用表面多孔颗粒填料技术,是保留这类化合物的理想选择。在本应用简报中,使用 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 和 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 化学键合相色谱柱对胆碱及其代谢物进行分离。使用 Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统用于低浓度样品的检测。 结论总体来说,在中性 pH 值条件下使用添加乙酸铵的流动相以及 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱可以实现胆碱及其代谢物的最佳分离。对另一种不同的 HILIC 化学键合相(即 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5)也同样进行了分离性能的评估。甜菜碱的灵敏度在 HILIC-OH5 色谱柱上得到了提高,然而乙酰胆碱和胆碱的峰形和灵敏度在 HILIC-Z 色谱柱上更出色。
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安捷伦科技(中国)有限公司为您提供《胆碱及其代谢物中分离检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于原料药中其他检测,参考标准--,《胆碱及其代谢物中分离检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统、Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统、Agilent 1290 Infinity II Multisampler、OpenLAB 软件