鱼虾中盐基氮检测方案(定氮仪)

应用文章 2006 蒸馏仪K-355 测定鱼虾中的总挥发盐基氮(TVBN) 1.摘要 该应用文章描写了鱼虾中的TVB-N测量方法。总挥发性盐基(TVB)测量新鲜度的旧化学方法之一。在1930's首先描述TVB。在该应用文章中，鱼样品或其鱼肉萃取物被碱化，然后自由盐基被蒸馏出来。挥发性盐基用酸滴定，酸的量用于计算蒸馏出的总基含量。该总基包括氨、三甲胺和二甲胺，每个分子中都含有有原子。TVB通常用mgN/100g组织样品表示。活鱼中的氨含量可忽略不计(氨对鱼类具有很大的毒性)，但是由于细菌或酶对氨基酸的影响，氨会在鱼死后快速生成。 2.法规 该方法符合95/149/EC。 BUCHI 3.方法总结 用0.6N的高氯酸制备无蛋白的鱼肉萃取物。取整个萃取物，用NaOH碱化。蒸馏出挥发性基氮，被硼酸吸收。基氮的浓度用标准酸滴定。 4.保存样品 立即测定样品，或者快速冷令粉碎样品(如在封闭的容器/塑料袋内)在-25℃或更低温度下存储。 5.仪器 -蒸馏仪 K-355-移液管(10，50，100ml)-梅特勒 DL22 F&B-折叠滤纸，直径150mm，快速过滤， Schleicher & Schuell， 595 1/2-梅特勒电极 DG 115-SC-容量瓶(100/250/500/1000 mL)-均质仪B-400，带 PVDF密封膜-固液漏斗-烧杯 300ml 6.化学试剂 -高氯酸溶液(6g/100ml)， Fluka 08612 -氢氧化钠溶液(20g/100ml)， Fluka 55973 -硼酸溶液(3g/100ml)， Fluka 55293 -有机硅防泡剂， Fluka 43607 -酚酞溶液， Fluka 43607 -盐酸0.1mol/l， Riedel-de-Haen 35335 -氯化铵， Fluka 09700 -Tashiro 指示剂， Fluka 36083(用于手动滴定) 根据EC 规定(95/149/EC)， 需要购买商业用的测定鱼里TVBN的配套试剂Fluka66662. 该配套试剂包括该方法所需要使用的试剂。有做10次TVB测量所用到的所有试剂。7种试剂的适用性已经过彻底的测试。高氯酸、氢氧化钠和硼酸溶液的浓度和特性是特地为该方法制定，大大减少了时间。 6.1 溶液配制 稀释的0.01mol/l 的 HCI溶液：用水10+90稀释0.1mol/l 的 HCI. 7.过程 重要安全提示! 高氯酸是非常强腐蚀性的溶液，因此在使用时需要特别注意，需要采取防护措施。均质仪 B-400用 PVDF 作为密封材料。 BUCHI 7.1样品制备 取至少100g的鱼样品(最好是整条鱼)，彻底均质化。在冷冻鱼如鱼块上切 2cm厚度的100-200g样品，将其放入防水塑料中解冻，如将塑料袋浸入20℃不超过25℃的温水浴中缓慢搅拌大约15minn 较大的鱼皮和角骨应在均质前去除，称取10.0g均质后的鱼肉样品到均质瓶中，加入90.0ml高氯酸，高速搅拌2min， 然后用滤纸过滤。 最后获得的萃取物可在2℃~6℃下至少保存7天。 7.2蒸馏设置 仪器 K-355 样品量 50ml 接收液体积 100ml 蒸汽力度 90% 蒸馏体积 约100ml 蒸馏时间 4-5min 冷凝液量 130~150ml 接收液 硼酸溶液 7.3蒸汽蒸馏 1.预热 K-355仪器 5min 2.在蒸馏管中加入50ml萃取物。为防止碱化不充分，可加入几滴酚酞。再加入几滴有机硅消泡剂 3.将蒸馏管放到仪器上 4.在蒸馏管中加入6.5mlNaOH 5.导出管末端浸入 100ml硼酸溶液中，在硼酸溶液中加入3到5滴指示剂 6.开始蒸留 蒸汽力度90%，蒸馏时间4-5min，蒸馏体积约为100ml。根据样品类型和仪器之间的微小差异蒸馏体积有少许变化。在接收液中的挥发碱可用标准 HCI溶液滴定得出。终点 pH 值为5.0±0.1。 在每批样品中至少测定一个空白，以确定是否收到污染。 8.滴定参数 滴定仪 DL 22 F&B 电极 DG 115-SC 终点 pH5.0 方法 改进的梅特勒方法10： 终点由 pH 4.6 改为 pH 5.0 滴定液 0.01 mol/I HCL 计算 消耗体积(mL) 9.计算 TVB TVB-N可用以下公式计算，浓度以 mg/100g 表示。 符号 示意 单位 TVB-N 总挥发基氮 mg/100g Vs 0.01 mol/IHCI 样品消耗体积 mL Vb 0.01 mol/lHCI空白消耗体积 mL m 样品质量 9 10验正 10.1标准溶液回收率测量 用氯化铵做标准物进行回收率测量。 测量三种不同浓度的溶液 溶液l浓度：107.60 mgN/100 g 溶液Ⅱ浓度：42.82 mg N/100 g 溶液Ⅲ浓度：21.41mg N/100 g 结果 样品 溶液I回收率 溶液列I回收率 溶液Ⅲ回收率 (%) (%) (%) 1 99.26 100.37 98.50 2 100.36 99.95 100.56 3 99.73 99.58 98.80 4 100.08 99.63 100.75 5 100.25 99.49 99.44 平均值 99.93 99.80 99.61 rsd(%) 0.44 0.36 1.01 10.2鱼肉 (Zander-Green-pike)中添加标准物后的回收率测量 鱼肉可在当地商店购买获得。在冰箱4-6℃下储存。如6.1样准备鱼肉萃取物，加标进行分析。 鱼肉萃取物又度：.13.11mg N/100g 溶液l浓度：107.60mg N/100g 溶液Ⅱ浓度：42.82mg N/100 g 溶液Ⅲ浓度：21.41 mg N/100g 结果 样品 溶液l回收率 溶液II回收率 溶液I回收率 (%) (%) (%) 1 99.41 100.18 101.33 2 99.72 99.77 99.62 3 99.71 100.0 99.05 4 99.98 99.72 99.33 5 99.63 101.50 100.76 平均值 99.69 100.23 100.02 Rsd (%) 0.20 0.73 0.98 10.3虾中添加标准物后的回收率测量 虾可在当地商店购买获得。在冰箱4-6℃下储存。虾在含有E211(苯甲酸钠)、E202(山梨酸钾)和E330(柠檬酸)中液体中保存。如6.1样准虫虾肉萃取物，加标进行分析。 虾肉萃取物浓度：.5.73mg N/100g 溶液|浓度：107.60 mg N/100 g 溶液Ⅱ浓度：42.82 mg N/100 g 溶液Ⅲ浓度：21.41 mg N/100 g 样品 溶液l回收率 溶液II回收率 溶液Ⅲ回收率 (%) (%) (%) 1 99.30 99.17 99.05 2 99.84 99.35 99.65 3 99.25 99.39 100.94 4 99.61 99.03 99.16 5 99.30 99.30 99.70 平均值 99.46 99.25 99.7 rsd (%) 0.26 0.15 0.75 10.4存储鱼中的 TVB-N含量 10.5备注 在头8-10天的存储后 TVB-N的浓度基本保持不变。过了存储期后， TVB-N值开始随着时间快速增加。根据 Connell J.J， 在TVB-N 超过 30mg/100g 鱼样品时可认为鱼肉已经变质。 11参考 ( 1 . EC guideline (95/149/EC) ) 2. Connell，J.J. Control and Fish Quality， Fishing News (Books) Ltd. Farnham，Survey， UK，(1975) Quality in your hands Application Note Version A，/ 该应用文章描写了鱼虾中的TVB-N测量方法。总挥发性盐基（TVB）测量新鲜度的旧化学方法之一。在1930’s首先描述TVB。在该应用文章中，鱼样品或其鱼肉萃取物被碱化，然后自由盐基被蒸馏出来。挥发性盐基用酸滴定，酸的量用于计算蒸馏出的总基含量。该总基包括氨、三甲胺和二甲胺，每个分子中都含有氮原子。TVB通常用mgN/100g组织样品表示。活鱼中的氨含量可忽略不计（氨对鱼类具有很大的毒性），但是由于细菌或酶对氨基酸的影响，氨会在鱼死后快速生成。该方法符合95/149/EC。