乌药中乌药醚内酯检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 乌药分析 乌药的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为樟科植物乌药Lindera aggregata ( Sims) Kosterm. 的干燥块根。全年均可采挖，除去细根，洗净，趁鲜切片，晒干，或直接晒干。 【功能与主治】顺气止痛，温肾散寒。用于胸腹胀痛，气逆喘急，膀胱虚冷，遗尿尿频，疝气，痛经。 【含量测定】 乌药醚内酯 色谱条件与系统适用性试验： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(56：44)为流动相；检测波长为235 nm。理论板数按乌药醚内酯峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备： 精密称取乌药醚内酯对照品10 mg， 置100 mg量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL， 置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每]mL中含乌药醚内酯40 pg)。 供试品溶液的制备： 取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚50 mL， 提取4小时，提取液挥干，残渣用甲醇分次溶解，转移至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 去甲异波尔定 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以含0.5%甲酸和0.1%三乙胺溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280 nm。理论板数按去甲异波尔定峰计算应不低于10000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~13 10→22 90→78 13~22 22 78 对照品溶液的制备：取去甲异波尔定对照品适量，精密称定，加甲醇-盐酸0.5→100的混合溶液(2：1)制成每1mL中含去甲异波尔定0.2 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约0.5 g， 精密称定，置圆底烧瓶中，精密加甲醇--盐酸0.5→100的混合液(2：1)25mL，密塞，称定重量，加热回流并保持微沸1小时，放冷，再称定重量，用甲醇--盐酸0.5→100的混合液(2：1)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.乌药药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中乌药的含量测定以乌药醚内酯和去甲异波尔定为质量评价依据。 乌药醚内酯在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：检测波长在235 nm时乌药醚内酯吸收较强，色谱图较好；在流动相组成为乙腈-水时，流动相的乙腈比例对乌药醚内酯及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相乙动的比例45到56时，其分离度较好，采用上述色谱柱，优化流动相乙腈-水(51：49)，柱温对乌药醚内酯的保留时间也有一定影响，温度越高，保留时间越短，样品在25到45度均有较好的分析效果，考虑到样品的稳定性及分析效果，本次采用35度条件对乌药样品进行分析测定。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 去甲异波尔定在Inertsil ODS-4中的色谱特点为：检测波长在280 nm时去甲异波尔定吸收较强，色谱图较好；在流动相组成为乙腈-0.5%甲酸和0.1%三乙胺溶液系统时，流动相的比例对去甲异波尔定及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相乙腈的比例在0-25分钟变化为10%-20%，25-35分钟乙腈比例在20%时，其分离度最好，采用上述色谱柱，优化流动相； 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~25 10→20 90→80 25~35 20 80 柱温对去甲异波尔定的保留时间也有一定影响，温度越高，保留时间越短，样品在25到45度均有较好的分析效果，考虑到样品的稳定性及分析效果，本次采用25度条件对乌药样样进行分析测定。 乌药 样品来源：本品为樟科植物乌药Lindera aggregata (Sims ) Kosterm.的干燥块根。产地：浙江 对照品：乌药醚内酯(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：A0465，含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品粗粉约lg， 精密称定，置索氏提取器中，加乙醚50 mL，提取4小时，提取液挥干，残渣用甲醇分次溶解，转移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：精密称取乌药醚内酯对照品10 mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL， 置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1mL中含乌药醚内酯40ug)。 色谱柱： Inertsil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：乙腈-水(51：49) 色谱柱： Inertsil-ODS-3(4.6×250 mm， 5 pm) 柱温：35℃ 流动相：乙腈-水(45-56：55-44) 检测波长：235nm 柱 温：25~45℃ 流 速：1.0 mL/min 检测波长：235 nm 进样量：10uL 流 速：：1.0 mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 CTO-20AC 柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 对照品：去甲异波尔定(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：A0538含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g， 精密称定，置圆底烧瓶中，精密加甲醇--盐酸0.5→100的混合液(2：1)25 mL， 密塞，称定重量，加热回流并保持微沸1小时，放冷，再称定重量，用甲醇--盐酸0.5→100的混合液(2：1)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取去甲异波尔定对照品适量，精密量定，加甲醇-盐酸0.5→100的混合溶液(2：1)制成每1mL中含去甲异波尔定0.2 mg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-4(4.6×250mm， 5 um) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 流动相： 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~25 10→20 90→80 25~35 20 80 柱温：25℃ 检测波长：280nm 流速：1.0mL/min 进样量：10pL 仪器配置： C-20ADXR高压泵 FD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 -.D-20AC柱温箱 .3M-20A系统控制器 -20AC自动进样器 对照品 对照品 实际样品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 乌药醚内酯 11.851 1228965 62565 8248 1.08 去甲异波尔定 21.818 2234093 105428 24571 1.26 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 乌药醚内酯的标准曲线 重复性数据下： 乌药醚内酯 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 11.851 1228965 11.854 1588369 2 11.837 1237654 11.830 1627462 3 11.840 1210484 11.825 1655592 Average 11.843 1225701 11.836 1623808 RSD% 0.06 1.13 0.13 2.00 去甲异波尔定的标准曲线 去甲异波尔定 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 21.529 3103797 22.022 2221081 2 21.515 3100543 21.818 2234093 3 21.524 3122078 21.781 2240396 Average 21.523 3108806 21.874 2231857 RSD% 0.04 0.38 0.60 0.45 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 乌药醚内酯色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6x 150mm, 5um)流动相：乙腈-水(51:49)柱温：35°C检测波长：235 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul 去甲异波尔定色谱柱：Inertsil ODS-4(4.6 x 250 mm, 5um)柱温：25°C检测波长：280 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul