菊花中3,5-二咖啡酰基奎宁酸检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱明-企业QQ：40061 65163 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 菊花分析 菊花的高效液相色谱 药典收载情况 来源】本品为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat. 的干燥头状花序。 功能与主治】散风清热，平肝明目，清热解毒。用于风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花，疮疡肿毒。 、含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A；0.1%磷酸为流动相B，按下表宁的规定进行梯度洗脱；检测波长为348 nm， 理论塔板数按3，5-二咖啡酰基奎宁酸峰计算应不低于8000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~11 10→18 90→82 11~30 18→20 82→80 30~40 20 80 对照品溶液夜制备：取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3.5-二咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色试剂气中，分别加70%甲醇制成每1 mL含绿原酸35 ug，木犀草苷25 ug，3，5-二咖啡酰基奎宁酸80 pg的混合溶液，即得(10℃以下保存)。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过一号筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL， 密塞，超声处理(功率300W，频率45 kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 则定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5pL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含绿原酸(CHg0，)不得少于0.20%，含木犀草苷(C，Hzo)不得少于0.080%， 含3，5-二咖啡酰基奎宁酸(C2sH240)不得少于0.70%。 2.菊花药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中菊花的含量测定以绿原酸、木犀草苷、3，5-二咖啡酰基奎宁酸为质量评价依据，其在nertsil ODS-3(4.6×250mm， 5pm)中的色谱特点为：在流动相组成为乙腈-0.1%磷酸系统时，流动相的比例寸绿原酸、木犀草苷、3，5-二咖啡酰基奎宁酸及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相乙腈的例在18%(0~5min)、10%→18%(5.01~11 min)、20%(11~30 min)、21%(30~40min)时，其分离度最好，菊色谱图中杂质峰较少且与绿原酸、木犀草苷、3，5-二咖啡酰基奎宁酸相比含量很低，可以获得较好的分析效果；柱温寸绿原酸、木犀草苷、3，5-二咖啡酰基奎宁酸的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相比例乙腈--0.1%磷酸溶液18%：82%(0~5 min)→18%：90%→82%：10%(5.01~11 min)、20%：80%(11~30 min)21%：79%(30~40 min)，主温35℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 菊花 样品来源：本品为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat. 的干燥头状花序。产地：浙江。 对照品：绿原酸(成都曼思特生物科技有限公司，批号：A0022，含量：98%)， 木犀草苷(上海同田生物技术有限公司，批号：10020321，含量：98%)，3，5-二咖啡酰基奎宁酸(成都曼思特生物科技有限公司，批号：A0025，含量：91%)。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过一号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL， 密塞，超声处理(功率300W，频率45 kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3，5-二咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色试剂瓶中，分别加70%甲醇制成每1mL含绿原酸35 pg， 木犀草苷25 ug， 3，5-二咖啡酰基奎宁酸80ug的混合溶液，即得(10℃以下保存)。 色谱柱： lnertsil ODS-3(4.6×250 mm， 5um) 柱温：35℃ 检测波长：348 nm 流 速：1.0mL/min 进样量：10pL(测绿原酸、3，5-二咖啡酰基奎宁酸)，5uL(测木犀草苷) 流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~5 10 90 5~11 10→18 90→82 11~30 20 80 30~40 21 79 仪器配置： LC-20ADXR 高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 CTO-20AC 柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 对照品 对照品 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 绿原酸 6.302 502976 46342 8028 1.24 木犀草苷 24.744 269755 11145 24675 1.18 3，5-二咖啡酰基奎宁酸 33.829 3054890 102856 31855 1.18 绿原酸标准曲线 重复性数据如下： 绿原酸 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 6.302 509429 6.302 660509 2 6.300 513976 6.332 658854 3 6.319 512400 6.335 660924 Average 6.307 511935 6.323 660096 RSD% 0.17 0.46 0.29 0.17 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 3，5-二咖啡酰基奎宁酸标准曲线 3，5-二咖啡酰基奎宁酸 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 33.829 3059723 33.325 1867353 2 33.899 3061088 33.594 1866076 3 33.814 3060172 33.564 1866963 Average 33.847 3060328 33.494 1866797 RSD% 0.14 0.03 0.45 0.04 浓度 mg/mL 木犀草苷标准曲线 木犀草苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 24.768 501465 24.352 705890 2 24.693 497940 24.727 702724 3 24.626 495480 24.709 705504 Average 24.696 498295 24.596 704706 RSD% 0.29 0.61 0.86 0.25 浓度 mg/mL *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6 x 250mm, 5um)柱温：35℃检测波长：348 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul (测绿原酸、3,5-二咖啡酰基奎宁酸)，5ul (测木犀草苷）流动相：乙腈-0.1％磷酸溶液 梯度洗脱