人参中人参皂甙检测方案(液质联用仪)

在线自动脱盐 LC-MS 系统分析人参皂甙 摘要 开发了新型在线自动稀释脱盐 LC-MS 前处理系统，该系统采用了柱切换技术，可以使用普通的液相色谱条件来进行 LC-MS的分析，包括缓冲盐的使用。自动稀释系统可以提高目标化合物的捕集效率，并且可以自动进行脱盐。该系统可以完全由计算机控制，是药物和天然产物中未知样鉴定的有效系统。 关键词 LCMS 线线自动稀释脱盐人参皂甙 HPLC 自动样品前处理系统用于提高分析效率已经有许多报道，特别是 MS 检测器，为了避免污染，经常需要安装一个切换阀来避免污染。 在药物中不纯物分析以及天然产物中未知成分的鉴定分析中，由于磷酸盐具有广泛的 pH 范围以及在低波长吸收低的特点，已经在许多 LC 分析方法中使用。但由于磷酸盐不适宜于 AP]离子源， LC-MS 需要使用挥发性的缓冲液，因此，当使用 MS 取代 UV 检测器时，往往需要优化新的分析条件。鉴于这种情况，我们开发了新的阀切换系统(在线自动稀释脱盐 LC-MS 前处理系统)，该系统可以在线自动进行脱盐，同时自动稀释旁路可以提高目标化合物的捕集效率。这样，使用在线自动稀释脱盐 LC-MS前处理系统，我们就可以直接将 HPLC 的分析条件应用到LC-MS中，对目标化合物进行 MS 分析了。由于 HPLC 磷酸盐分析条件可以直接用于 LC-MS，因此，对于未知物的鉴定来说，该系统是非常有用的系统。本文讨论了提高捕集效率的在线稀释系统，并且进行了人参提取物中未知物的实际分析。 HPLC装置 在线自动稀释脱盐 LC-MS 前处理系统包括脱气机 DGU20A5；泵 LC-20AD (3台)； LC-20AB(1台)；自动进样器 SIL-20C；高压混合器； 柱温箱 CTO-20AC；流路切换阀 FCV-12AH(2个)；紫外检测器 SPD-20AV； LC-MS2010EV. 流程图 流程图如图1所示，先采用 HPLC 对未知样进行分析，对感兴趣的目标峰，，可以通过左阀的切换将其引入后面的系统，经过富集及脱盐后，右阀切换，将捕集柱中的样品引入 MS检测器进行检测。 图 1 系统流路图 分析条件 分离条件 分析柱流速： 1 mL/min 流动相：A20mM磷酸缓冲盐(pH=2.6) B 乙腈 梯度： Time B.Conc 018.0018.0123.00 23.01 28.00 进样体积：10pL 柱： Shim-pack VP-ODS (150 mmL x 4.6 mmid) 柱温：40℃ 检测波长： UV-200 nm 池温：40℃ 样品捕集条件 样品环体积：250uL 引入液：0.1%乙酸水溶液 稀释液：0.1%乙酸水溶液 引入泵流速：0.3 mL/min 稀释泵流速：2.7 mL/min MS检测器 样品洗提流速： 0.2mL/min 样品洗提溶剂：含有0.1%乙酸的乙腈溶液 MS柱： Shim-pack VP-ODS (150 mmL x2.0 mmid) MS 检测器： Electrospray 捕集效率 样品体积对柱效的影响如图2所示。 标样溶液分别由水，甲醇配制。 咖啡因的绝对量均为 100pg.当使用强洗脱的溶剂时(如甲醇)，随着进样体积的增加，柱效显著降低。另外，当使用弱洗脱溶剂时(如水)，随着进样体积的增加，柱效没有明显降低。因此，为了提高捕集效率，选择弱洗脱的纯水作为洗脱溶剂。稀释泵用纯水稀释样品环中捕集的样品，稀释倍率为10，即使样品环中的溶剂为纯甲醇，在样品移动过程中，溶剂纯甲醇将被稀释为10%的甲醇，这样可以提高捕集效率。 图2 进样体积对柱效的影响 脱盐效率 对 LCMS入口管流出的溶液进行了收集并分析了离子的残留量，各离子的残留浓度见表1。使用 50 mM 磷酸盐缓冲液 (pH=2.5) (等于 5000 mg/L 磷酸根离子)为流动相，结果在流出液中检测到了 2.064 mg/L 磷酸根离子，除盐效率为99.95%。 表1.各种离子残留浓度 Ion Peak Area Concentration(mg/mL) F- 未检出 Cl- 77313 0.258 NO2- 未检出 Br- 未检出 NO3- 59784 0.404 PO43- 140927 2.064 SO42- 52801 0.197 人参皂甙分析结果 按照上述分析条件，对人参提取液进行了分析，色谱图见图3，人参皂甙Re、Rg1和Rb1的MS分析结果见图4、图5和图6。 图3 人参提取液色谱图 图4 Re M+AcOT 图5 Rg1 [M+AcO] 图6 Rb1 [M-HT 结论 新的柱切换并具有稀释功能的在线前处理 LCMS系统不仅可以直接使用常规的 HPLC 条件，而且还可以选择最适合于目标化合物离子化的 LCMS 流动相条件。因此，该系统是药物和天然产物中未知样鉴定的有效系统。