莫能菌素中主要成分含量检测方案(液相色谱仪)

莫能菌素的柱后衍生 HPLC分析方法 摘要 建立了莫能菌素的柱后衍生 HPLC 分析方法，该方法快速而且重复性好，连续6针进样莫能菌素A的峰面积相对标准偏差不超过1%。 关键词 HPLC 柱后衍生莫能菌素(monensin) 莫能菌素是聚醚类抗生素，对鸡毒害、柔嫩、堆型、波氏、巨型、变位艾美耳球虫均有高效，是较理想的广谱抗球虫药，已广泛用于世界各地，在畜牧业上还可促进肉牛生长。莫能菌素钠盐为淡黄色粗粉，性质稳定，易溶于氯仿、甲醇、乙醇，但不溶于水。在酸性介质中不稳定，但碱性介质中很稳定。在过去，饲料中抗生素定量方法基本上采用微生物学定量法，需在37℃左右下培养细菌，大约2天后才能得到结果。目前，对于莫能菌素的分析，通常采用高效液相色谱香草醛柱后衍生进行分析，方法快速、简便。 仪器配置 LC-20AT(流动相输液泵)， LC-10Ai(柱后衍生试剂输液泵)， SIL-20AC(自动进样器)，CTO-10ASvp(柱温箱)， SPD-20A(紫外可见检测器)，CRB-6A(化学反应箱)， CBM-20A(系统控制器)， LCSolution(色谱工作站)，反应盘管(0.5mmI.D.×7M L.Teflon 管)。 分析条件 流动相：甲醇：纯水：醋酸=920：80：1 衍生剂：甲醇：硫酸：香草醛=950mL：20mL：30g 流速：流动相和衍生剂均为 0.7mL/min 进样体积：200pL 色谱柱： Waters SunFire C18 5um 4.6×250mm 柱温：25℃ 反应箱温度：95℃ 检测波长：520nm 检测池温度：40℃ 衍生反应原理 在酸性条件下使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。 标样制备 称取莫能菌素约 0.25g，加入稀释剂(甲醇：水=90：10)50mL，摇匀并机械振荡一小时后，静置过滤，称取 1mL至100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。莫能菌素的浓度为 49.62ug/mL。结果如下： 图1 莫能菌素色谱图 表11莫能菌素峰表 # Name RT Area Area% 1 Monensin-B 11.095 894012 4.5217 2 Monensin-A 13.740 18710936 94.6348 3 Monensin-D 16.576 94816 0.4796 4 Monensin-C 17.360 71972 0.3640 重现性实验 将上述样品连续进样6次，分别计算保留时间和峰面积的重复性。结果见图2和表2。 图2重复性实验色谱图 表2重复性实验结果 编号 保留时间 峰高 峰面积 1 13.740 777，855 18，680，793 2 13.720 785，813 18，859，372 3 13.691 789，923 18，864，896 4 13.678 788，040 18，896，706 5 13.673 787，502 18，874，316 6 13.673 791，007 18，887，977 RSD% 0.20 0.60 0.43 结论 建立了莫能菌素的检测方法，实验证明该方法有良好的重复性，连续6针峰面积相对标准偏差为0.43%， 满足1%以下的要求。