复方芦丁片中主要成分检测方案(毛细管电泳仪)

分析化学(FENXI HUAXUE) 研究简报Chinese Journal of Analytical Chemistry第30卷2002年7月第7期815~818 分析化学第 30卷816 复方芦丁片中主要成分的毛细管电泳安培检测 李向军 张裕平 袁倬斌* (中国科技大学研究生院化学部，北京100039) 摘 要 用毛细管电泳安培检测法同时测定了复方芦丁片中芦丁和抗坏血酸的含量，研究了各种实验条件对分离效果的影响，得到了优化的实验条件。以直径为50 pm 的碳纤维微电极为工作电极，电极电位为+0.80V(us.Ag/AgCl)，40 mmol/L 的 Naz B0，-H， BO，(pH值为7.50)为缓冲溶液。在此条件下，芦丁和维生素C在 10 min 内得到了良好的分离。芦丁和维生素C分别在5.0×10-8~5.0×10-4 g/mL、8.0×10-8~5.0×10-4g/mL浓度范围内与电泳峰电流呈现良好的线性关系；检测下限分别为2.0×10-8、5.0×10-8 g/mL。方法应用于实际样品的测定，结果令人满意。 关键词 毛细管电泳，安培检测，芦丁，维生素C 引 言 复方芦丁片属于维生素类药，主要用于高血压病的辅助治疗，其主要成分为芦丁和维生素C。芦丁是维生素P的一种，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性及抗炎、抗病毒等作用；维生素C为人体必需营养成分，临床用于坏血病的预防及治疗，可增加对感染的抵抗力染。芦丁[2.3]和维生素 c[4，5]的测定方法很多，其中液相色谱法I6]应用较多。陈刚等I7以碳圆盘电极为工作电极，用毛细管电泳电化学柱端检测法测定了复方芦丁片中的芦丁和维生素C。本文以碳纤维微电极为工作电极，采用毛细管电泳柱上安培检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维生素C。由于采用了高压电场隔离接口[8]，与文献测定方法相比，柱上安培检测法具有较高灵敏度和信噪比。 2 实验部分 2.1 仪器和试剂 ACS-2000 毛细管电泳仪(中国科学院研究生院应用化学研究所)；ACS-2000 安培检测器(中国科学院研究生院应用化学研究所)；CHI660A 电化学系统(CH Instruments， U.S.A.)；未涂层带高压电场隔离接口弹性融硅毛细管柱(50um ID)，总长42 cm，有效长度40 cm，河北永年光导纤维厂)；PH-HJ90B型便携式酸度计(上海雷磁仪器厂)；电化学测量采用三电极系统，Ag/AgCl(饱和KCl)为参比电极，铂丝为辅助电极，自制碳纤维微电极(直径100pm)。 芦丁(baicalin)对照品(中国药品生物制品检定所)；维生素C(分析纯，北京化工厂)；复方芦丁片(北京市燕京制药厂，批号981104)，其它试剂均为分析纯，试验用水为二次重蒸水。 2.2 标准溶液的制备 准确称取芦丁和维生素C标准品，分别用适量乙醇及水溶解，使浓度为1.0×10-g/mL，以 0.45 pm滤膜过滤后备用。 2.3 样品溶液的制备 准确称取复方芦丁片10片(每片标示值0.1 g)，获得一片药的平均质量，用研钵研成细粉，准确称取相当于5片药片质量的粉末于盛有50 mL 40 mmol/L 硼砂-乙醇(体积1：1)混合溶液的烧杯中，于50℃水浴中预热 15 min 后，超声助溶 2 min，经普通滤纸过滤，定容于 50 mL 容量瓶中，即得复方芦丁片样品溶液，以0.45 pm 滤膜过滤后备用。 ( 2001-08-14收稿；2002-03-29接受 ) ( 本文系国家“九五”科技重点攻关资助项目(No.96-A23-01-06) ) 图1 芦丁与维生素Ｃ的流体动力学伏安图 Fig.1 The hydrodynamic cyclic voltammograms of rutin andvitamin C 熔硅毛细管(fused-silica capillary)：50 pm I. D. ×42 cm；工作电极(working electrode)：碳纤维微电极(carbon fiber micro electrode)；分离电压(separation voltage)： 10 kV；缓冲溶液 ( separationmedium)：40 mmol/L Naz B40(pH=7.50)。1.芦丁(rutin)；2. 维生素 C(vitamin C) 3.2 缓冲溶液 pH值的影响 电泳液的 pH 值对分离效果有着很大的影响。在实验过程中发现，随着缓冲溶液 pH值的增大，芦丁及维生素C的峰电流均增大，但随缓冲溶液 pH 值的增大，它们的迁移时间均有所减小，分离度变差，故选择 pH值为7.50。 3.3 分离电压及缓冲溶液浓度的影响 上述实验条件下于范围内分别考察了分离电压(6~20kV)及缓冲溶液浓度(10~100 mmol/L)的影响，结果发现，各组分的迁移率随分离电压的降低而减小，迁移时间增大，分离度提高但谱带展宽且峰高降低。随着分离电压增高，基线噪音也增大，分离度变差。随缓冲溶液浓度的增加，迁移时间增大，但分离电流增大会导致毛细管发热，降低分离度。故实验过程中选用 10 kV 作为分离电压，40 mmol/L 的 References ( 2 Yang Yunfa(杨运发). Chinese J. Anal . Chem . (分析化学)，1996，24(11)：1277~1280 ) ( 3 Nie Feng(聂 峰)， L i Liqing(李丽青)， Feng Manliang(封满良)， Lii Jiuru(吕九如). Analytica l Laboratory(分析试验室)， 1999， 18(1)：54~56 ) ( Editorial Committee o f the Ministry o f Health of P. R. China(中华人民共和国卫生部药典委员会). Pharma c opeia of P. R. China Part 2(中华人民共和国药典(第二部)). Beijing(北京)：People’s Health P ress(人民卫生出版社)， 1990：644 ) ( Li Guanbin(李关宾)， Fan Chunsheng(范春生)， Xing Cunzhang(邢存章). 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The Doctor Papers ofthe Graduate School of USTC(中国科学技术大学研究院博士学位论文). ) NazB0，-H， BO， (pH值为7.50)为缓冲溶液。在此条件下，芦丁和维生素C 在 10 min 内得到了良好的分离。 3.4 工作曲线及检测限 在上述实验条件下，对一系列芦丁和维生素C 的标准混合样品进行分析测定，测定其峰电流-浓度的关系，所得芦丁和维生素C的回归方程、线性范围、相关系数及检测限如表1所示。 表1芦丁和维生素C的回归方程及检测限 Table 1TThe regression equations and the detection limits of rutin and vitamin C 化合物 回归方程 相关系数 线性范围 检测限 Regression equation Linear range Detection limits* Compounds Y= a + bX* Correlation coefficient (1×10-'g/mL) (1×10- g/mL 芦丁 Rutin Y=1.99+79.1X 0.9963 8.0×10-5~0.5 5.0×10- 维生素 C Vitamin C Y=10.9+89.5X 0.9924 5.0×10-5~0.5 2.0×10~' *Y和X分别表示峰电流(nA)及被测物浓度(1×10-3g/mL)(the Y and X are the peak current and concentration of the analytes)；**检测限按信噪比为3计算(the detection limits are estimated on the basis of a signal to noise ratio of3) 3.5)米精密度试验 浓度为1×10-4 g/mL 的芦丁和维生素C对照溶液各平行进样6次，测得芦丁峰高的 RSD 为 1.1%，迁移时间的 RSD 为 1.8%；维生素C峰高的 RSD 为2.2%，迁移时间的 RSD 为1.4%。 3.6 样品测定及回收率 精密吸取6份样品溶液，每份1.0 mL，以缓冲溶液定容于 10 mL 容量瓶中，依上述实验条件分别测定芦丁和维生素C的含量(图3为样品溶液的毛细管电泳图)；精密吸取6份样品溶液，每份1.0 mL，分别加入芦丁和维生素C对照品各2×10-g/mL，以缓冲溶液定容于 10 mL 容量瓶中后，依上述实验条件进行加标回收实验。所测结果列于表2。 图3实际样品的毛细管电泳图 Fig.33The electrophorograms of sample solution 缓冲溶液(buffer solution) ：40 mmol/L Naz B20(pH=7.50)；采样电压(injection voltage)：15 kV；采样时间(injection time)：5 s；分离电压(separation voltage)：10 kV；检测电位(working potential)：+0.8V。a.维生素 C (vitamin C)；b.芦丁(rutin)。 表2样品测定结果及回收率 Table 2The detection results of sample and the ratio of recoveries 样 品 Sample 标示值 测定值 相对标准偏差 RSD (%) 回收率 Recovery (%) Label value Found (1x10-3g/片(tablet) (n=6， 1×10-3g/片(tablet) 芦丁 Rutin 20 19.8 1.5 99 维生素 C Vitamin C 50 50.0 1.7 103 ( Herbal Drugs Information Central of State Drugs Administration(国家医药管理局中草药情报中心站). The Handbook of PlantEffective Ingredient(植物药有效成分手册(第一版)). Beijing(北京)：People’s Health Press(人民卫生出版社)，1986 ) ( Beijing(北京)， 1 999 ) 9Yuan Zhuobin(袁倬斌)， Zhang Shusheng(张书胜)， Zou Hong(邹 洪). Analytical Instruments News Letter(分析测试仪器通讯)，1997， 7(4)：229~330 Separation and Determination of Rutin and Vitamin C inCompound Rutin Tablets by Capillary Electrophoresiswith Amperometric Detection Li Xiangjun， Zhang Yuping， Yuan Zhuobin’ (Department of Chemistry， Graduate School， University of Sciences and Technology of China，Chinese Academy of Sciences， Beijing 100039) Abstract A simultaneous determination of rutin and vitamin C in pharmaceutical preparations by high performancecapillary electrophoresis (CE) with amperometric detection was reported. The effects of potential of electrode，concentration and pH of the running buffer and sepaaration voltage on the CE determination were investigated anddiscussed. Rutin and vitamin C could be well separated in a 40 mmol/L NazB0，-H， BO， buffer (pH=7.50) within10 min. A 50 m carbon fiber microelectrode was used as the working electrode positioned carefully opposite theoutlet of the capillary. An excellent linearity between peak curent and concentration of analytes was obtained in theconcentration range of 5.0×10-8 ~5.0×10-4 g/mL rutin， 8.0×10-8~5.0×10-4 g/mL vitamin C. Thedetection limit was 2.0×10-8g/mL、5.0×10-3 g/mL respectively. It has been successfully used in analysis of theactually pharmaceutical sample， the assay result was satisfactory. Keywords Capillary electrophoresis， amperometric detection， rutin， vitamin C (Received 14 August 2001； accepted 29 March 2002) ......................................... 中国化学会分析化学委员会关于申请“分析化学基础研究梁树权奖金”的通知 中国化学会分析化学委员会将开始受理第四届“中国化学会基础研究梁树权奖金”的申请。受理申请的日期为2002年9月1日至12月20日c 申请材料包括申请表、单位推荐书、成果技术资料(论文目录——包括题目、发表时间及刊物，5~10篇有代表性的论文全文及对所取得成就的综述1000~2000字)，国内外的反应和引用情况(最好附SCI 检索)，获奖成果及成果推广应用情况，社会或经济效益，以及有关的证明材料。全部申请材料均需打印，一式五份寄长春市人民大街159号中国科学院长春应用化学研究所陈杭亭收(邮编130022)。材料不退回，请自留底稿。 申请表的格式及“中国化学会分析化学基础研究梁树权奖金条例”请参见《分析化学》1993年第21卷第2期 ( 中国化学会分析化学委员会 ) 2002年6月