丁公藤中东莨菪内酯检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 丁公藤分析 丁公藤的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为旋花科植物丁公藤Erycibe obtusifolia Benth. 或光叶丁公藤Erycibe schmidtii Craib 的干燥藤茎。全年均可采收，切段或片，晒干。 【功能与主治】祛风除湿，消肿止痛。用于风寒湿痹，半身不遂，跌扑肿痛。 【含量测定】照高效液相色谱法(附录VID)测定。 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(32：68：0.16)为流动相；检测波长为298 nm。理论板数按东莨菪内酯峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备：取东莨菪内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含40ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL， 称定重量，加热回流6小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL，置烧瓶中，浓缩至约1 mL， 加3 mol/L盐酸溶液10 mL， 水浴中加热水解2小时，立即冷却，移入分液漏斗中，用水10 mL分次洗涤容器，并入分液漏斗中，加氯化钠2g，用三氯甲烷强力振摇提取5次， 每次15 mL， 合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2g，搅拌，滤过，容器用少量三氯甲烷洗涤，滤过，滤液合并，70℃以下浓缩至近干，立即加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供与品溶液各10pL， 主入液相色谱仪，测定，即得。 2.丁公藤药材高效液相色谱方法的建立 (色谱行为描述】 《中国药典》中丁公藤的含量测定以东莨菪内酯为质量评价依据，其在lnertsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为甲醇-水-冰醋酸系统时，流动相的比例对东莨菪内酯及相邻色谱峰的分离离有显著的影响，流动相甲醇的比例在27%左右时，其分离度最好，丁公藤色谱图中杂质峰较少且与东莨菪内酯相比含量很低，因此选择甲醇比例在23~35%(v/v)之间均可以获得较好的分离度及分析效果；柱温对东莨菪内酯的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相比例为甲醇-水-冰醋酸(32：68：0.16)，柱温40℃的色谱条件下，使用Inertsil ODS-4(4.6×150 mm，5 um )柱亦可得到良好分析效果。 丁公藤 样品来源：本品为旋花科植物丁公藤Erycibe obtusifolia Benth. 的干燥藤茎。产地：四川 对照品：东莨菪内酯(中国药品生物制品检定所，批号：110768-200504，供含量测定用 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL， 称定重量，加热回流6小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，置烧瓶中，浓缩至约1 mL，加3 mol/L盐酸溶液10 mL， 水浴中加热水解2小时，立即冷却，移入分液漏斗中，用水10mL分次洗涤容器，并入分液漏斗中，加氯化钠2 g， 用三氯甲烷强力力摇提取5次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2g，搅拌，滤过，容器用少量三氯甲烷洗涤，滤过，滤液合并，70℃以下浓缩至近干，立即加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中， 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 并稀释至刻度，摇匀，即得。 对照品溶液的制备：取东莨菪内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含40pg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6×150 mm， 5 pm) 推荐使用条件范围： 流动相：甲醇-水-冰醋酸(27：73：0.16) 色谱柱： Intersil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 柱温：40℃ 流动相：1：甲醇-水-冰醋酸(23~35：77~65：0.1~0.5) 检测波长：298 nm 柱 温： 35~45℃ 流 速：1.0 mL/min 检测波长：298 nm 进样量：10uL 流 速：1.0 mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A 二极管阵列紫外可见光检测器 CTO-20AC柱温箱 DGU-20A；脱气机 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC自动进样器 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 东莨菪内酯 14.382 4842186 173788 6461 1.28 东莨菪内酯标准曲线 重复性数据如下： 东莨菪内酯 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 14.382 4842186 14.368 9219287 2 14.372 4839044 14.362 9275230 3 14.378 4844969 14.368 9233796 Average 14.377 4842066 14.366 9242771 RSD% 0.03 0.06 0.03 0.32 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3 (4.6 x 150 mm, 5um)流动相：甲醇-水-冰醋酸(27:73:0.16)柱温：40℃检测波长：298 nm流速：1.0 mL/min进样量：lOul