银杏叶中银杏内酯检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱明-企业QQ：40061 65163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 银杏叶-萜类内酯分析 银杏叶的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L. 的干燥叶。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。 【功能与主治】活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂。用于淤血阻络，胸痹心痛，中风偏瘫，肺虚咳喘，高脂血症。 【含量测定】 萜类内酯 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-四氢呋喃-水(25：10：65)为流动相，蒸发光散射检测器检测。理论板数按白果内酯峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品和白果内酯对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含0.18mg、0.08 mg、0.10 mg、0.20mg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品中粉约1.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(30~60℃)在70℃水浴上回流提取1小时，弃去石油醚(30~60℃)液，药渣和滤纸筒置于60℃烘箱中挥干溶剂，再加甲醇回流提取6小时，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，超声处理(功率300 W， 频频50 kHz)30分钟， 取出放冷，加甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液5 mL， 置于酸性氧化铝柱上(200~300目， 3 g， 内径1 cm， 用甲醇湿法装柱)，用甲醇25 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣用甲醇5mL分次转移至10mL量瓶中，加水约4.5 mL， 超声处理(功率300W，频率500 kHz)30分钟， 取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法：分别精密吸收吸品溶液10pL、20pL，供试品溶液10~20pL， 注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯A、银杏内酯B、银叶内酯C和白果内酯的含量，即得。 2.银杏叶药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中银杏叶的含量测定以银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯为质量评价依据，其在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为甲醇-四氢水喃-水系统时，流动相的比例对银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相甲醇的比例在25%左右时，其分离度最好，选择甲醇比例在25~30%)匀间均可以获得较好的分离度及分析效果；柱温对银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的保留也有一定影响，在35到45℃时样品分离度较好。经过考察，在流动相比例为甲醇-四氢呋喃-水(25：10：65)，柱温35℃的色谱条件下，能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-4柱亦可得到较好分析效果。 银杏叶 ( 样品来源：本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L. 的干燥叶。产地：北京。 ) ( 对照品：银杏内酯A(上海同田生物技术有限公司，批号：08051011，含量：99%) 银杏内酯B(上海同田生物技术有限公司，批号：08082911，含量：99%) ) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 银杏内酯C(上海同田生物技术有限公司，批号：08102106，含量：99%) 白果内酯(上海海田生物技术有限公司，批号：08082711，含量：99%) 供试品溶液的制备：取本品中粉约1.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(30~60℃)在70℃水浴上回流提小时，弃去石油醚(30~60℃)液，药渣和滤纸筒置于60℃烘箱中挥干溶剂，再加甲醇回流提取6小时，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，超声处理(功率300W， 频率50 kHz)30分钟， 取出放冷，加甲醇至刻度，摇匀，静置精密量取上清液5ml，置于酸性氧化铝柱上(200~300目，3g，内径l cm，用甲醇湿法装柱)，用甲醇25 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣用甲醇5mL分次转移至10mL量瓶中，加水约4.5mL， 超声处理(功率300W， 频率500 kHz)30分钟，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 对照品溶液的制备：取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品和白果内酯对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含0.18mg、0.08 mg、0.10 mg、0.20mg的混合溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6×250 mm， 5 pm) 推荐使用条件范围： 流动相：甲醇-四一呋喃-水(25：10：65) 色谱柱： Intersil ODS-3(4.6×250 mm， 5 um) 柱主温：35℃ 流动相： 甲醇-四氢呋喃-水(25：10：65) 流 速：1.0mL/min 进样量： 10pL 柱：35~45℃流 速：1.0 mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵ELSD-LTII低温蒸发光散射检测器DGU-20A，脱气机CTO-20AC 柱温箱CBM-20A 系统控制器SIL-20AC 自动进样器 对照品 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 银杏内酯C 10.628 749255 46821 9788.807 1.10 银杏内酯A 14.659 1553912 85714 13280.122 1.06 白果内酯 12.601 2267062 132334 12282.413 1.08 银杏内酯B 18.493 371735 16578 15594.114 1.06 白果内酯的标准曲线 Y=1.6082X+17.24 R=1.0000 2 重复性数据如下： 白果内酯 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 12.601 2311848 12.723 1733656 2 12.603 2339017 12.733 1727582 3 12.580 2298165 12.765 1741196 Average 12.595 2316343 12.740 1734145 RSD% 0.083 0.73 0.17 0.39 银杏内酯A的标准曲线 银杏内酯A No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 14.659 1596372 14.621 1236062 2 14.654 1603568 14.645 1227066 3 14.685 1634992 14.675 1250779 Average 14.666 1611644 14.647 1237969 RSD% 0.093 1.04 0.18 0.97 银杏内酯B的标准曲线 银杏内酯B N0. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 18.493 371735 18.689 391739 2 18.484 372969 18.696 387674 3 18.451 378646 18.752 384909 Average 18.476 374450 18.712 388107 RSD% 0.10 0.81 0.19 0.89 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 银杏内酯C的标准曲线 Y=1.5541X+17.141 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6 x 250 mm, 5um)流动相：甲醇- 四氢呋喃-水(25:10:65)柱温：35℃流速：1.0 mL/min进样量：10 ul