桔梗中桔梗皂苷检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 桔梗分析 桔梗的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为桔梗科植物桔梗Platycodon gradiflorum (Jacq.) A. DC.的干燥根。春、秋二季采挖，洗净，除去须根，趁鲜剥去外皮或不去外皮，干燥。 【功能与主治】宣肺，利咽，祛痰，排脓。用于咳嗽痰多，胸闷不畅，音哑，肺痈吐脓，疮疡脓成不溃。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙剂-水(25：75)为流动相；蒸发光散射检测器理论板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品取末(过二号筛)约2.0g， 精密称定，精密加入50%甲醇50 mL， 称定重量，超声处理(功率250 W， 频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL置水浴上蒸干，残渣加水20 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液50mL洗涤，弃去氨洗液，再用正丁醇饱和的水50mL洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇3mL使溶解，加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于以三氯甲烷-甲醇(9：1)制备的硅胶柱(内径2 cm， 10 g)上，以三氯甲烷-甲醇(9：1)50 mL洗脱，弃去洗脱液，再以三氯甲烷-甲醇-水(60：20：3)100 mL洗脱，弃去洗脱液，继用三氯甲烷-甲醇-水(60：29：6)100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液5 pL、10pL，供试品溶液10~15pL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。 本品按干燥品计算，含桔梗皂苷D(C，，H，，028)不得少于0.10%。 2.桔梗药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中桔梗的含量测定以桔梗皂苷D为质量评价依据之一，桔梗在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为乙腈-水系统时，流动相的比例对桔梗皂苷D的保留时间和与相邻峰的分离度具有显著的影响，乙乙比例在24~26%之间均可以获得满意的分离度，考虑到分析时间长短，优化流动相比例为乙腈-水(26：74)；柱温对桔梗皂苷D的保留时间也有影响，柱温在30~45℃之间均可获得较好的分离度，考虑到分析时间的长短，优化柱温为40℃。经过考察此条件同样适用于在Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um)中对桔梗进行分析。 桔梗 样品来源：本品为桔梗科植物桔梗Platycodon gradiflorum (Jacq.) A. DC.的干燥根。春、秋二季采挖，洗净，除去须趁鲜剥去外皮或不去外皮，干燥。产地：黑龙江 对照品：桔梗皂苷D成都曼斯特生物科技有限公司，批号：A0321，含量：98.0%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)约2.0g， 精密称定，精密加入50%甲醇50 mL， 称定重量，超声处理(功z 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 250W，频率40 kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，置水浴上蒸干，残渣加水20 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液50 mL洗涤，弃去氨洗液，再用正丁醇饱和的水50 mL洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇3mL使溶解，加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于以三氯甲烷-甲醇(9：1)制备的硅胶柱(内径2 cm，10 g)上，以三氯甲烷-甲醇(9：1)50 mL洗脱，弃去洗脱液，再以三氯甲烷-甲醇-水(60：20：3)100 mL洗脱，弃去洗脱液，继用三氯甲烷-甲醇-水(60：29：6)100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。对照品溶液的制备：取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.5mg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6mm × 150 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：乙腈-水(26：74) 色谱柱： Intersil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 柱温：40℃ 流动相：乙腈-水(24~26：76~74) 流充速：1.0mL/min 进样量： 10pL 柱温：30~40℃流速： 1.0mL/min ※该条件同样适用于Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um)仪器配置： LC-20ADXR高压泵 ELSD-LTII低温蒸发光散射检测器 DGU-20A，脱气机 CTO-20AC柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC自动进样器 对照品 实际样品 名称 保留时间(min) 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 桔梗皂苷Ｄ 14.953 1206785 49813 8442 1.01 桔梗皂苷D标准曲线 重复性数据如下： 桔梗皂苷D No。 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面 1 14.953 1226785 14.740 108834 2 14.971 1246154 14.722 1056895 3 14.999 1222127 14.730 1043905 Average 14.974 1231688 14.731 1063049 RSD% 0.15 1.03 0.06 2.15 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3 (4.6 mm x 150 mm,5um）流动相：乙腈-水(26:74)柱温：40℃流速: 1.0 mL/min进样量：10 ul