黄芪中黄芪甲苷检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 黄芪分析 黄芪的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus ( Fisch.) Bge. var mongholicus (Bge.) Hsiao 或膜荚黄芪Astragalus membranaceuss (Fisch.) Bge.的干燥根。 【功能与主治】补气升阳，固表止汗，利水消肿，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌。用于气虚乏力，食少便溏，中气下限，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚虚黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，久溃不敛。 【含量测定】 黄芪甲苷 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32：68)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.05mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品中粉约4g，精密称定，置具索氏提取器中，加甲醇40 mL， 冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内经为1.5 cm， 柱高为12 cm)，以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，续用70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液10 uL、供试品溶液各20uL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。 本品按干燥品计算，含黄芪甲苷(CHg014)不得少于0.040% 毛蕊异黄酮葡萄糖苷 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 0.2%甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱。检测波长为260 nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相 B(%) 0~20 20→40 80→60 20~30 40 60 对照品溶液的制备：取毛取异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50pg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品本末(过二号筛)约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL， 回收溶剂至干，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 2.黄芪药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中黄芪的含量测定以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷为质量评价依据，其在Inertsil ODS-3中的色修特点为：在流动相组成为乙腈-水系统时，流动相的比例对黄芪甲苷及相邻色谱峰的分离没有显著的影响，因此选择乙腈比例在32~35%之间均可以获得较好的分析效果；柱温对黄芪甲苷的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相比例为乙腈-水溶液(35：65)，柱温40℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5um)柱亦可得到良好分析效果。 在流动相组成为乙腈-0.2%甲酸系统时，流动相的比例对毛蕊异黄酮葡萄糖苷及相邻色谱峰的分离有显著的影响，流动相乙腈的比例在20%一40%(0~20 min)、40%(20~30 min)时，其分离度最好，黄芪色谱图中杂质峰较少且与毛蕊异黄酮葡萄糖苷相比含量很低，可以获得较好的及分析效果；柱温对毛蕊异黄酮葡萄糖苷的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相比例为乙腈-0.2%甲酸溶液20%→40%：80%→60%(0~20 min)、40%：60%(20~30 min)，柱温35℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5um)柱亦能得到较满意的分析效果。 黄芪 样品来源：本品为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. Var. mongholicus (Bge.) Hsiao 的干燥根。产地：内蒙古。 对照品：黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所，批号：110781-200512，含量：98%) 供试品溶液的制备：黄芪甲苷取本品中粉约4g，精密称定，置具索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和包正丁醇振醇提取4次，每次40 mL， 弃去氨液，正丁醇液蒸蒸，残渣加水5 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内经为1.5 cm， 柱高为12 cm)，以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，续用70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.05mg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6×150 mm， 5 pm) 流动相：乙腈-水(35：65) 柱 温：40℃ 检测波长：254nm 流 速： 1.0 mL/min 进样量： 10uL 仪器配置： LC-20ADXR 高压泵 ELSD-LTⅡ低温蒸发光散射检测器 DGU-20A，脱气机 CTO-20AC柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC自动进样器 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 黄芪 样品来源：本品为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge. var.mongholicus(Bge.)Hsiao 的干燥艮。 产地：内蒙古。 对照品：毛蕊异黄酮葡萄糖苷(成都曼思特生物科技有限公司，批号：A0515，含量：98%) 供试品溶液的制备：毛蕊异黄酮葡萄糖苷取本品粉末(过二号筛)约ig，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL， 回收溶剂至干，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50pg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6×150 mm， 5 um) 柱温： 35℃ 检测波长：260nm 流 速： 1.0mL/min 进样量：10pL 流动相：乙乙-0.2%甲酸溶液 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~20 20→40 80→60 20~30 40 60 仪器配置： LC-20ADXR 高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 DGU-20A 脱气机 CTO-20AC 柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 黄芪甲苷 11.726 520524 28775 9254 1.02 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 毛蕊异黄酮葡萄糖苷 6.337 2013943 192814 9077 1.13 黄芪甲苷标准曲线 重复性数据如下： 黄芪甲苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 11.698 499631 11.726 529885 2 11.713 493198 11.710 550002 3 11.726 486332 11.709 550858 Average 11.712 493053 11.715 543582 RSD% 0.10 1.11 0.07 1.79 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线 毛蕊异黄酮葡萄糖苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 6.337 2013943 6.356 2229690 2 6.343 2010363 6.359 2221462 3 6.351 2070228 6.335 2232701 Average 6.344 2031511 6.350 2227951 RSD% 0.11 1.66 0.21 0.27 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3 (4.6 x 150 mm, 5um)流动相：乙腈-水(35:65)柱温：40 ℃检测波长：254 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul