胡芦巴中胡芦巴碱检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 胡芦巴分析 胡芦巴的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L. 的干燥成熟种子。夏季果实成熟时采割植株，晒干，打下种子，除去杂质。 【功能与主治】温肾，祛寒，止痛。用于肾脏虚冷，小腹冷痛，小肠疝气，寒湿脚气。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以剂醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸20：80：0.1)为流动相；检测波长为265 nm。理论板数按胡芦巴碱峰计算应不低于4000。 对照品溶液的制备：精密称取胡芦巴碱对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含60pg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g， 精密称定，精密加入50%甲醇50 mL， 密塞，称定重量，放置1小时，超声处理(功率300W，频率50kHz)45分钟，放冷，密塞，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供与品溶液各10uL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 2.胡芦巴药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中胡芦巴的含量测定以胡芦巴碱为质量评价依据，胡芦巴碱在InertsiODS-3色谱柱中的色谱特点为：检测波长在265 nm时胡芦巴碱吸收最强，色谱图较好；在流动相组成为甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸系统时，流动相的比例对胡芦巴碱及相邻色谱峰的分离影响不大，甲醇的比例越低，胡芦巴碱的保留时间稍短，流动相甲醇的比例为0时，其分离度最好.采用上述色谱柱，优化流动相比例为甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸(0：100：0.1)；柱温对胡芦巴碱的保留时间的影响较小，温度越高，保留时间稍微缩短，样品在25到45度均有较好的分析效果。考虑到样品的稳定性及分析效果，本次采用35度条件对使君子样品进行分析测定。 胡芦巴 样品来源：本品为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L. 的干燥成熟种子。产地：安徽。 对照品：胡芦巴碱(中国药品生物制品检定所，批号：110883-200502，含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，放置1小时，超声处理(功率300W，频率50kHz)45分钟，放冷，密塞，再定定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：精密称取胡芦巴碱对照品适量，加50%加醇制成每1mL含60 pg的溶液，即得。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 色语柱： Inertsil-ODS-3(4.6×250 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸(0：100：0.1) 色谱柱： Inertsil-ODS-3(4.6×250 mm， 5 um) 柱温：35℃ 流动相：甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸(0：100：0.1) 检测波长：265 nm 柱温：25~45℃ 流 速：11..0 mL/min 检 测 波 长 ： 2 6 5 n m 进样量： 10pL 流 速：1.0mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 CTO-20AC柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 胡芦巴碱 3.643 301271 208003 6680 1.32 葫芦巴碱标准曲线 重复性数据如下： 胡芦巴碱 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 3.643 1301271 3.581 1193005 2 3.647 1341784 3.575 1188674 3 3.645 1348065 3.582 1207918 Average 3.645 1330373 3.579 1196532 RSD% 0.06 1.91 0.11 0.85 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil  ODS-3(4.6 x 250 mm, 5um) 流动相：甲醇：0.05%十二烷基磺酸钠溶液- 冰醋酸(0:100:0.1)柱温：35℃检测波长：265 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul