我们建议按照以下步骤对该混合样品进行精制。
(1) 使用PFP柱先将1,2混合物和3,4进行分离。
(2) 再使用C18 MGII对1,2混合物进一步制备,得到1和2的纯品。
或者,在压力容许范围内,将PFP和C18 MGII串联起来,尝试直接进行四种物质的制备。
Dec 07, 2016LC Application Lab, Shiseido ChinaNo.31,BDA International Business Park,2 Jing Yuan Street, BeijingEconomic Technological Development Zone,Beijing, China 100176Phone 010-5845-1809.FAX 010-6785-6882(注:数据存储路径仪器1/E/GUO/161202ISOMER) 四种同分异构体分离中色谱柱的筛选 使用资生堂多款反相色谱柱对客户提供样品中的四种同分异构体(互为位置异构)进行分离。由于客户最终希望进行制备,因此我们尽可能不使用缓冲盐,并使用挥发性的酸来开发液相条件。 首先,我们尝试在酸性条件下,有机相使用乙腈来进行分析。为了缩短考察时间和节省样品用量,我们均选用了半微柱(2.0mml.D.×150mmL.,5um,)来进行实验。结果如图1所示,虽然在各款反相柱上,四种异构体均未得到完全分离,但是直链烷基型的反相柱和键合了芳香环的 PFP 柱表现出了不同的分离选择性。像 MGII、BB等C18柱,可以实现峰1和峰2的基线分离,却无法实现峰2和峰3的分离。而PFP柱可以实现峰3,4和其他色谱峰的分离,却无法实现峰1,2的分离。 图1不同反相柱对四种异构体的分离选择性 HPLC Conditions 色谱柱:CAPCELL PAK PFP, CAPCELL PAK ADME, CAPCELL PAK C8DD, CAPCELL PAK C18 BB,CAPCELL PAK C18 MGII, S5, 2.0mm I.D.×150mm L. 温: 35°C 柱流流动相:0.1%甲酸/乙腈流检 0.2mL/min PDA 246nm 进样量: 5uL 样品: 客户提供 因此,为了实现四种异构体的共同分离,尝试将 PFP 和 C18 MGII 串联起来进行分析。结果如图2所示,最终实现了四种物质的分离(分离度如色谱峰上标所示)。 图2 C18 MGII 和 PFP (5um, 2.0mml.D.×150mmL.)串联使用时四种异构体分离结果 HPLC Conditions 色谱柱:CAPCELL PAK PFP, CAPCELL PAK C18 MGII, S5, 2.0mm I.D.×150mm L.串联 柱温: 35°C 流动相: 0.1%甲酸/乙腈=30/70 流0.2mL/min 压 检 6.5 MPa(系统压+柱压) PDA 229nm 进样量: 5uL 样 占: 客户提供 进一步,我们将2.0mml.D.×150mmL.柱型更换为分离能力更高的4.6mml.D.x250mmL.的色谱柱进行串联,并且进一步简化流动相条件,将0.1%甲酸更换为纯水,尝试对四种异构体进行直接接分。结果如图3所示,四种化合物彼此之间均得到了基线分离(分离度如色谱峰上标所示)。 图3 C18 MGII 和 PFP (5um, 4.6mml.D.x250mmL.)串联使用时四种异构体分离结果 HPLC Conditions 色谱柱: CAPCELL PAK PFP, CAPCELL PAK C18 MGII, S5, 4.6mm I.D.x250mmL.串联 柱温: 35°C 流动相: 70%乙腈 流1.0mL/min压 检 14.3 MPa (系统压+柱压) PDA229nm 进样量: 20 uL 样品: 客户提供 因此,我们建议按照以下步骤对该混合样品进行精制。 (1)使用PFP柱先将1,2混合物和3,4进行分离。 (2)再使用 C18 MGII对 1,2混合物进一步制备,得到1和2的纯品。 或者,在压力容许范围内,将 PFP 和 C18 MGII串联起来,尝试直接进行四种物质的制备。 郭彦丽 资生堂(中国)投资有限公司 先端科学事业推进部技术服务中心 电话:010-58451809 传真:010-67856882 地址:北京经济技术开发区景园北街2号 BDA 国际企业大道31号 邮编:100176
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三耀精细化工品销售(北京)有限公司为您提供《同分异构体中四种同分异构体分离的色谱柱筛选检测方案(液相色谱配件)》,该方案主要用于原料药中限度检查检测,参考标准--,《同分异构体中四种同分异构体分离的色谱柱筛选检测方案(液相色谱配件)》用到的仪器有