同分异构体中四种同分异构体分离的色谱柱筛选检测方案(液相色谱配件)

Dec 07， 2016LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31，BDA International Business Park，2 Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-5845-1809.FAX 010-6785-6882(注：数据存储路径仪器1/E/GUO/161202ISOMER) 四种同分异构体分离中色谱柱的筛选 使用资生堂多款反相色谱柱对客户提供样品中的四种同分异构体(互为位置异构)进行分离。由于客户最终希望进行制备，因此我们尽可能不使用缓冲盐，并使用挥发性的酸来开发液相条件。 首先，我们尝试在酸性条件下，有机相使用乙腈来进行分析。为了缩短考察时间和节省样品用量，我们均选用了半微柱(2.0mml.D.×150mmL.，5um，)来进行实验。结果如图1所示，虽然在各款反相柱上，四种异构体均未得到完全分离，但是直链烷基型的反相柱和键合了芳香环的 PFP 柱表现出了不同的分离选择性。像 MGII、BB等C18柱，可以实现峰1和峰2的基线分离，却无法实现峰2和峰3的分离。而PFP柱可以实现峰3，4和其他色谱峰的分离，却无法实现峰1，2的分离。 图1不同反相柱对四种异构体的分离选择性 HPLC Conditions 色谱柱：CAPCELL PAK PFP， CAPCELL PAK ADME， CAPCELL PAK C8DD， CAPCELL PAK C18 BB，CAPCELL PAK C18 MGII， S5， 2.0mm I.D.×150mm L. 温： 35°C 柱流流动相：0.1%甲酸/乙腈流检 0.2mL/min PDA 246nm 进样量： 5uL 样品： 客户提供 因此，为了实现四种异构体的共同分离，尝试将 PFP 和 C18 MGII 串联起来进行分析。结果如图2所示，最终实现了四种物质的分离(分离度如色谱峰上标所示)。 图2 C18 MGII 和 PFP (5um， 2.0mml.D.×150mmL.)串联使用时四种异构体分离结果 HPLC Conditions 色谱柱：CAPCELL PAK PFP， CAPCELL PAK C18 MGII， S5， 2.0mm I.D.×150mm L.串联 柱温： 35°C 流动相： 0.1%甲酸/乙腈=30/70 流0.2mL/min 压 检 6.5 MPa(系统压+柱压) PDA 229nm 进样量： 5uL 样 占： 客户提供 进一步，我们将2.0mml.D.×150mmL.柱型更换为分离能力更高的4.6mml.D.x250mmL.的色谱柱进行串联，并且进一步简化流动相条件，将0.1%甲酸更换为纯水，尝试对四种异构体进行直接接分。结果如图3所示，四种化合物彼此之间均得到了基线分离(分离度如色谱峰上标所示)。 图3 C18 MGII 和 PFP (5um， 4.6mml.D.x250mmL.)串联使用时四种异构体分离结果 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK PFP， CAPCELL PAK C18 MGII， S5， 4.6mm I.D.x250mmL.串联 柱温： 35°C 流动相： 70%乙腈 流1.0mL/min压 检 14.3 MPa (系统压+柱压) PDA229nm 进样量： 20 uL 样品： 客户提供 因此，我们建议按照以下步骤对该混合样品进行精制。 (1)使用PFP柱先将1，2混合物和3，4进行分离。 (2)再使用 C18 MGII对 1，2混合物进一步制备，得到1和2的纯品。 或者，在压力容许范围内，将 PFP 和 C18 MGII串联起来，尝试直接进行四种物质的制备。 郭彦丽 资生堂(中国)投资有限公司 先端科学事业推进部技术服务中心 电话：010-58451809 传真：010-67856882 地址：北京经济技术开发区景园北街2号 BDA 国际企业大道31号 邮编：100176