腌肉中亚硝酸盐含量检测方案(离子色谱仪)

采用 TSKgel 离子色谱柱参考国标 GB 5009.33-2010 快速分析腌肉中硝酸盐和亚硝酸盐 摘要：参照GB/T5009.33-2010《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》中第一法离子色谱法，建立凝胶抑制电导检测-离子色谱法快速测定腌肉中硝酸盐和亚硝酸盐的方法。以7.0mmol/L NaHCO3+2.0 mmol/LNazCO3为流动相等度洗脱，采用东曹公司 TSKgel SuperIC-AZ色谱柱进行分离。方法在 0.01-2.00mg/L 浓度范围内线性良好，检出限(S/N=3)为0.01 mg/L，测试结果均符合标准要求。 关键词： 离子色谱，硝酸盐，亚硝酸盐，电导检测 硝酸盐和亚硝酸盐作为肉类加工的添加剂，可防止肉毒杆菌等微生物的破坏，然而，亚硝酸盐会在食品或消化系统中形成亚硝胺类致癌物。尽管硝酸盐比较稳定，但是在微生物的作用下会转化为亚硝酸盐，因此，硝酸盐和亚硝酸盐的含量都必须进行监测，以保证肉产品的质量。常用的检测食品中硝酸盐和亚硝酸盐的方法费时，且涉及到使用蛋白沉淀或固相萃取等一系列的样品处理步骤。在此，我们提供一种只需对肉及肉制品进行简单的提取，然后直接进行色谱分析测定肉及肉制中硝酸盐、亚硝酸盐含量的方法。 实验部分 1.1 仪器与试剂 IC-2010 离子色谱仪(TOSOH， 日本)，配有内置自动进样器，双通道在线脱气，内置柱温箱，凝胶抑制器；超纯水(ELGA，电阻率为18.2 MQ.cm)， 0.22 um 水系滤膜(TOSOH)。无水碳酸钠(优级纯，上海虹光化工)、碳酸氢钠(优级纯，上海虹光化工)。固相萃取小柱：ODS型、SP型、Ag柱、0.22 pm 水性滤膜针头滤器 (TOSOH，[，日本)。 1.2样品前处理方法： 准确取腌制肉0.5g(精确至0.01g)于25 mL容量瓶中，加入20 mL超纯水，超声波中提取 30 min (每5分钟振摇一次)，保持固相完全分散，于75℃水浴中放置5 min， 取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经过滤纸后，取部分溶液于10000转/分钟离心 15 min，取上清液备用。将上述备用清液过 ODS 型小柱弃去前3mL， 再过 Ag柱，弃去前3 mL，收集液过 0.22 um 水系滤头后再收集，进行色谱分析。 1.3色谱条件： 色谱柱： TSKgel Super IC-Anion HZ (4.6 mm I.D. ×15cm) TSKguardcolumn SuperIC-AZ(4.6 mm I.D. x1cm) 淋洗液：7.0 mmol/LNaHCO3+2.0 mmol/L Na2CO3 柱温： 40℃流速：0.8mL/min 进样量：30 uL 2 结果与讨论 2.1标准品分析结果及标准曲线 移取适量的 NO 和 NO标准溶液，加水稀释，配制浓度分别为 NO2 2 mg/L 和 NO 10mg/L 的混合溶液，通过 IC-2010 自动进样器的自动稀释后进样，稀释倍数分别为2，5，10，20，50、100得到标准溶液色谱图(图1)，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(图2)，计算线性回归方程。 [uS] 图1亚硝酸根和硝酸根离子混合标准溶液电导检测色谱图 CM 检测的线性回归方程如下： 图2亚硝酸根和硝酸根离子校正曲线 2.2结果表述 X=(c-c0) *V*f*1000/m*1000 式中： X—―试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量 (mg/kg) c—―测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度(mg/L) c0——试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度(mg/L) V——试样溶液体积(mL) f——试样溶液稀释倍数 m—一试样取样量 2.3样品分析结果及回收率 分别平行称取样品0.5g两次，分离结果见图3。测试结果见表1， NO2、NO； 加标回收率见表2，结果分别为：82.9%和92.6%。 表1平行样测试结果 NO2 (mg/kg) NOs (mg/kg) 样品一 6.01 38.09 样品二 6.46 36.78 平均值 6.24 37.44 表2样品加标回收率 本底值mg/kg 加标测试值 mg/L 换算值 mg/kg 加标值 mg/kg 回收率% NO2 6.24 0.29 14.59 10.07 82.9 NO： 37.44 1.67 84.05 50.33 92.6 图3样品色谱图 2.4检出限 在上述色谱条件下，按 S/N=3计算NO和NO3最小检出限浓度分别为 0.01 mg/L和0.01mg/L。 3.结论 采用上述方法可以满足国标 GB 5009.33-2010 对肉中的亚硝酸盐和硝酸盐测定要求。 参照GB/T5009.33-2010《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》中第一法离子色谱法，建立凝胶抑制电导检测-离子色谱法快速测定腌肉中硝酸盐和亚硝酸盐的方法。以7.0 mmol/L NaHCO3 + 2.0 mmol/L Na2CO3为流动相等度洗脱，采用东曹公司TSKgel SuperIC-AZ色谱柱进行分离。方法在0.01-2.00mg/L浓度范围内线性良好，检出限（S/N=3）为0.01 mg/L，测试结果均符合标准要求。