熟肉制品中亚硝胺类化合物检测方案(毛细管柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163熟肉制品中亚硝胺QuEChERS结合GC-MS/MS快速高灵敏度分析方法 N-亚硝胺物质是国际上公认的一类强致癌物，其一般结构为R2(R1)N-N=O，在食品、饮水、消费品以及受污染的空气中广泛存在。食品中N-亚硝胺主要在食品加工和贮藏过程中形成，常见于腌制、烟熏、焙烤等制品中。 目前国家在法规“GB2762-2012食品中污染物限量”中仅对N-二甲基亚硝胺限量做出了规定，最低限量为3.0 ug/kg。 法规推荐的分析方法GB/T 5009.26存在样品前处理复杂、耗时长、仪器方法成本高等问题，实际可操作性不强。事实上，食品中除了NDMA还可能含有NDEA，NPYR等其他N-亚硝胺污染物，本文针对下表中的9种N-亚硝胺，建立了使用QuEChERS的快速样品前处理方法，，以及使用GC/MS/MS-EI的高灵敏仪器分析方法。 (1) N-Nitroso-dimethylamine (NDMA) (2)N-Nitroso-methyl-ethylamine (NMEA) (3) N-Nitroso-diethylamine (NDEA) (4) N-Nitroso-dipropylamine (NDPA) oN (5) N-Nitrosomorpholine (NMOR) (6) N-Nitrosopiperidine (NPIP) (9) (7) N-Nitrosopyrrolidine (NPYR) (8N)-Nitroso-dibutylamine (NDBA) (9) N-Nitroso-diphenylamine (NDPHA) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 目标分析物 ID 中文名称 英文名称 CAS 简写 1 N-二甲基亚硝胺 N-Nitrosodimethylamine 62-75-9 NDMA 2 N-二乙基亚硝胺 N-Nitrosodiethylamine 55-18-5 NDEA 3 N-二丙基亚硝胺 N-Nitrosodi-n-propylamine 621-64-7 NDPA 4 N-亚硝基吡咯烷 N-Nitrosopyrollidine 930-55-2 NPYR 5 N-亚硝基哌定 N-Nitrosopiperidine 100-75-4 NPIP 6 N-二丁基亚硝胺 N-Nitrosodi-n-butylamine 924-16-3 NDBA 7 N-甲基乙基亚硝胺 N-Nitrosomethylethylamine 10595-95-6 NMEA 8 N-二苯基亚硝胺 N-Nitrosodiphenylamine 86-30-6 NDPhA 9 N-亚硝基吗啉 N-Nitrosomorpholine 59-89-2 NMorPh IS N-二甲基亚硝胺-d6 N-Nitrosodimethylamine-d6 17829-05-9 NDMA-d6 IS N-二丙基亚硝胺-d14 N-Nitrosodi-n-propylamine-d14 93951-96-3 NDPA-d14 GC条件 色谱仪： Agilent 6890 色谱柱： DB-WAXETR 30m-0.25mm-0.25um(260/280°C) p/n 122-7332进样体积：：5uL 衬管： 不分流超惰衬管(p/n 5190-2293) MMI进样口温度：程序升温，60℃(0.05 min)→ 600 ℃/min→250℃(冷不分流进样，空气泵*冷却，如无空气泵可自然冷却) 隔垫吹扫：60 mL/min @1.2 min 载气节省：20 mL/min @ 5min 柱温： 50℃(1 min)→ 10°C/min→ 110℃→ 15℃/min→ 200℃→40℃/min→250℃(3.75 min) 共18min 柱流速： 1.2 mL/min 后运行流速：3mL/min 后运行温度：：：250°C 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 MS条件 仪器：安捷伦7000 QQQ 溶剂延迟： 6min 离子源：El源，温度250℃(可升至280℃) 四极杆温度：：150°C 增益gain： 10 质量分辨率： unit Name RT-WAX 定量离子对 CE 定性离子对1 CE 定性离子对2 CE 内标 T1 NDMA 7.53 74.0->44.1 5 74.0->42.1 18 IS1 T2 NMEA 8.01 88.0->71.0 18 88.0->42.1 2 IS1 T3 NDEA 8.33 102.0->85.1 2 102.0->56.0 18 102.0->44.1 10 IS1 T4 NDPA 9.69 130.0->113.1 2 130.0->58.0 6 130.0->43.1 8 IS2 T5 NDBA 11.34 116.0->99.1 2 158.0->141.1 6 158.0->99.1 6 IS2 T6 NPIP 11.55 114.0->84.1 6 114.0->97.1 6 114.0->55.0 25 IS2 T7 NPYR 11.8 100.0->55.1 6 100.0->70.0 5 100.0->43.1 8 IS2 T8 NMorPh 12.19 116.0->86.1 2 116.0->56.0 15 86.0->56.0 6 IS2 T9 NDPhA 16.43 169.0->168.1 18 169.0->167.1 30 167.0->139.0 30 IS2 IS1 NDMA-d6 7.52 80.0->50.1 5 80.0->46.1 18 IS2 NDPA-d14 9.62 144.1->126.1 2 144.1->50.1 8 化合物分离与谱图结果 图2.20ppb标样，9个N-亚硝胺的具有良好的峰形和分离效果 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 图39种亚硝胺在标曲最低浓度点0.5 ng/mL的MRM提取离子图 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 图4.9种亚硝胺标准曲线，线性范围均为0.5-50 ng/mL， 6个浓度点；内标浓度：20ng/mL；每个浓度点连续进样3次，溶剂为乙腈 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 图5.基质加标3 ug/kg样品的总离子流图TIC 图6.基质加标3 ug/kg样品中9种亚硝胺的MRM谱图结果 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 添加 浓度 Name NDMA NMEA NDEA NDPA NDBA NPIP NPYR NMorPh NDPhA 鸡肉肠-1 102% 60% 57% 57% 98% 70% 55% 74% 123% 1.5 ug/kg 鸡肉肠-2 88% 67% 72% 64% 99% 68% 59% 69% 82% 鸡肉肠-3 128% 97% 90% 151% 88% 87% 93% 102% 鸡肉肠-1 104% 91% 98% 111% 92% 103% 92% 99% 3 ug/kg 鸡肉肠-2 106% 102% 92% 111% 94% 93% 95% 纯肉制品-1 56% 60% 68% 64% 68% 60% 83% 纯肉制品-2 85% 94% 110% 101% 123% 91% 81% 鸡肉肠-1 97% 94% 91% 93% 90% 90% 93% 10 ug/kg 鸡肉肠-2 95% 91% 95% 94% 89% 88% 82% 鸡肉肠-3 92% 91% 90% 92% 92% 86% 90% 87% 82% 纯肉制品-1 89% 93% 94% 45% 96% 94% 91% 82% 124% 表1.两种肉制品在1.5，3， 10 ug/kg三个浓度添加水平的N-亚硝胺绝对回收率 添加 浓度 Name NDMA NMEA NDEA NDPA NDBA NPIP NPYR NMorPh NDPhA 鸡肉肠-1 116% 68% 65% 65% 112% 79% 63% 84% 140% 1.5 ug/kg 鸡肉肠-2 101% 78% 84% 76% 116% 79% 70% 81% 97% 鸡肉肠-3 140% 98% 107% 98% 166% 96% 95% 102% 112% 鸡肉肠-1 116% 109% 102% 110% 125% 104% 115% 103% 111% 3ug/kg 鸡肉肠-2 121% 108% 117% 106% 126% 107% 100% 107% 108% 纯肉制品-1 96% 100% 100% 109% 98% 101% 88% 64%94% 92% 128% 纯肉制品-2 95% 98% 102% 109% 96% 113% 87% 77% 鸡肉肠-1 107% 101% 103% 100% 102% 99% 99% 103% 10 ug/kg 鸡肉肠-2 109% 102% 104% 108% 107% 101% 103% 100% 93% 鸡肉肠-3 104% 103% 101% 104% 104% 97% 102% 98% 92% 纯肉制品-1 102% 107% 109% 52% 110% 108% 105% 94% 143% 表2.两种肉制品在1.5， 3， 10 ug/kg三个浓度添加水平的N-亚安胺相对回收率 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 图7.实际样品中检出NDBA和NDPhA NDBA=0.969 ug/kg NDPhA=1.134 ug/kg 订货须知： Agilent Bond Elut 陶瓷均质子(Part No. 5982-9313) Agilent Bond Elut QuEChERS萃取盐包 (Part No. 5982-5550) Agilent Bond Elut QuEChERS基质分散净化包(Part No. 5982-4950) Agilent Poroshell DB-WAXETR 色谱柱 30m*0.25mm*0.25um (Part No. 122-7332)  1 N-二甲基亚硝胺 N-Nitrosodimethylamine 62-75-9 NDMA 2 N-二乙基亚硝胺 N-Nitrosodiethylamine 55-18-5 NDEA 3 N-二丙基亚硝胺 N-Nitrosodi-n-propylamine 621-64-7 NDPA 4 N-亚硝基吡咯烷 N-Nitrosopyrollidine 930-55-2 NPYR 5 N-亚硝基哌啶 N-Nitrosopiperidine 100-75-4 NPIP 6 N-二丁基亚硝胺 N-Nitrosodi-n-butylamine 924-16-3 NDBA 7 N-甲基乙基亚硝胺 N-Nitrosomethylethylamine 10595-95-6 NMEA 8 N-二苯基亚硝胺 N-Nitrosodiphenylamine 86-30-6 NDPhA 9 N-亚硝基吗啉 N-Nitrosomorpholine 59-89-2 NMorPh IS N-二甲基亚硝胺-d6 N-Nitrosodimethylamine-d6 17829-05-9 NDMA-d6 IS N-二丙基亚硝胺-d14 N-Nitrosodi-n-propylamine-d14 93951-96-3 NDPA-d14