灭菌乳中三聚氰胺检测方案

乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法 三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 LC1620高效液相色谱仪（含UV1620紫外-可见检测器1台，P1620高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。 1.2 标准品溶液配制 精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。 1.3 样品前处理 称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC测定溶液。 1.4 色谱条件： 色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm) 流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸） 流速：1.0ml/min 波长：240nm 温度：40℃ 进样量：20μl 2 实验结果 2.1 精密度实验 取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。 表1 精密度实验 NO. Retention time（min） Peak High Peak Area 1 11.933 289 4216.8 2 11.990 290 4264.2 3 11.928 287 4246.0 4 11.927 287 4242.8 5 11.923 284 4218.6 RSD(%) 0.23 0.82 0.57 图1 三聚氰胺标准品 2.2 标准曲线 配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。用最小二乘法以对照品浓度(横坐标X轴，µg/ ml)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归，求算标准曲线。 ​图表2 1038.8 2070.7 6982.5 11657.6 59993.9 118196.3 Sheet1 74 143 286 471 629 789 3941 7588 0.1422 0.2844 0.5688 0.8532 1.1376 1.422 7.11 14.22 1038.8 2070.7 4244.3 6982.5 9341.4 11657.6 59993.9 118196.3 Sheet2 0.142 0.284 0.853 1.422 7.11 14.22 1038.8 2070.7 6982.5 11657.6 59993.9 118196.3 Sheet3 1038.8 2070.7 6982.5 11657.6 59993.9 118196.3 0.142 0.284 0.853 1.422 7.11 14.22 ​ 2.3 加样回收率和重现性实验 取已知三聚氰胺含量的酸奶样品，加入一定量的标准储备液，按“样品前处理” 操作，平行制备3份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到加样回收率及重现性结果，见表2。 表2 加样回收率和重现性（n=3） Spiked(mg/kg) Recovery(%) RSD(%) 35.0 87.2 1.37 图2 空白酸奶样品 图3 加标酸奶样品 2.4 检测限及定量限 依据噪声值，按3倍信噪比，计算其理论检出限，为0.221 mg/kg；按10倍信噪比，计算其定量限，为0.738 mg/kg。 3 结论 本方法优化了高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺测定方法，该方法简化了前处理步骤，易于操作，线性关系良好，有较好的精密度和重现性，回收率满足国家标准的要求，检出限和定量限也符合目前三聚氰胺的检测要求。 LC1620系列液相色谱仪介绍 LC1620系列液相色谱仪立足自主开发，采用世界先进的结构设计和精密的机械加工，为您展现良好的稳定性和可靠性。整套仪器采用模块式设计和数字化智能控制，更增加了实验的灵活性和自由性，是一款真正的高性价比仪器。 仪器配置表 等度系统 高压二元梯度系统 P1620高压恒流泵 P1620高压恒流泵（２台） UV1620 紫外检测器 UV1620 紫外检测器 7725i 手动进样阀 7725i 手动进样阀 5µm,C18色谱柱 1500µL混合器 LC WorkStation工作站 5µm,C18色谱柱 附件包 LC WorkStation工作站 附件包 您可以针对不同需要，选配多种检测器：如示差折光检测器（RID）、蒸发光散射检测器（ELSD）等。 主要部件技术指标 P1620高压恒流泵 流量范围：0.001~9.999mL/min 工作压力：0~42MPa 流量设定值误差：Ss1%(1mL/min, 水，室温) 流量稳定性误差：RSD0.1% (1mL/min, 水，室温) 密封性：压降< 0.5MPa/10min (42 MPa) UV1620 紫外检测器 波长范围：190~680nm 光谱带宽：8nm 基线噪音：110-5AU 基线漂移：210-4AU/h 波长示值误差： 1nm 最小检测浓度：110-8g/mL（萘/甲醇溶液） 线性范围： 104 仪器特点： * 模块式设计，灵活组合，方便配置的多样性 * 高精度结构设计，性能稳定，指标优异，适于连续运行 * 数字化智能控制，系统所有设定均可由电脑完成 * 强大的数据处理功能，满足您的多种数据分析和报告输出需求