食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖检测方案(液相色谱仪)

SDPTOP 食品中四种糖的含量测定 1实验部分 1.1仪器与试剂 LC1600 高效液相色谱仪(含RI-201H示差折光检测器1台， P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司)； FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品(>97%，国药试剂)；乙腈(色谱纯，美国 Tedia)；纯净水(杭州娃哈哈)。 1.2标准品溶液配制 1)糖标准贮备液 分别称取1g(精确至0.1mg)的果糖、萄萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品，于 50ml容量瓶中，加水定容至刻度，得到浓度为 20mg/ml 的上述四种糖的混标标准贮备液。 2)糖标准溶液 分别取标准贮备液 0.50ml、1.00 ml、2.00 ml、3.00 ml、5.00 ml 于 10ml容量瓶中，加水定容至刻度，分别得浓度为 1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml、6.0mg/ml、10.0mg/ml 的混标标准溶液。 1.3 样品前处理 含有二氧化碳的饮料，参考 GB/T 22221-2008进样样品前处理。 精密量取除了 CO2的样品5ml，移入10ml 的容量瓶中，缓慢加入乙酸锌和亚铁氰化钾溶液各 0.5ml， 放置室温后，用水定容至刻度，摇匀，静置30min，用干燥滤纸过滤，取2ml滤液，过0.45um微孔滤膜，作为待测样品溶液。 1.4色谱条件： 色谱柱： Shodex NH2P-50(4.6×250mm) 流动相：乙腈/水=75/25 流速： 1.0ml/min 柱温：30℃ 进样量：5ul 2 实验结果 2.1精密度实验 将浓度为 4.0mg/ml 的混合标准溶液，在上述 HPLC 条件下连续进样5次，考察分析方法在同一浓度水平分析的精密度，结果如下表所示。 表1.同一浓度混合标准溶液连续进样5次的测定结果 No. 果糖 葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 Rt/min A Rt/min Rt/min Rt/min A Rt/min A 1 7.394 6716.4 9.586 5828.7 13.505 7405.9 16.44 5590.6 2 7.394 6873.8 9.586 5673.2 13.522 7285.8 16.423 5396.1 3 7.402 6710.15 9.595 5776.5 13.547 7499.7 16.448 5640 4 7.394 6958.4 9.595 5918.4 13.513 7467.2 16.432 5630.7 5 7.327 6675.05 9.47 5659.6 13.388 7169 16.423 5713.8 RSD/% 0.42 1.81 0.57 1.88 0.46 1.45 0.06 2.13 图1标准品 HPLC 谱图 2.2标准曲线 将一系列浓度的标准溶液由低浓度到高浓度进样，以峰面积(纵坐标Y轴)对标准品浓度(横坐标X轴， mg/ml)进行线性回归，求算标准曲线，结果如下： 表2不同浓度混合标准溶液测定结果 浓度/mg/ml A/果糖 A/葡萄糖 A/蔗糖 A/麦芽糖 1.0 1715.2 1427.4 1983.7 1513.8 2.0 3489.62 2965.23 3714.17 2848.63 4.0 6734.05 5497.75 6783.8 5183.1 6.0 10215.13 8349.7 10763.1 7922.45 10.0 17249.2 14148.8 17957.2 13278.7 通过线性回归，以峰面积-浓度作图，分别得到四种糖的回归方程如下： 果糖： v=1721.8X-39.9 R=0.9999 葡萄糖： v=1405.2X+13.9 R=0.9998 蔗糖： v=1780.6X+49.4 R=0.9994 麦芽糖： y=1305.3X+145.0 R=0.9997 2.3加样回收率和重现性实验 取已知含量的样品，加入浓度为 10.0mg/ml 的混合标准品溶液1ml， 按“样品前处理”操作，平行制备3份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到加样回收率及重现性结果。 表3.加样回收率及重现性测定结果 果糖 样品中含量 加入标准品实际量 测定含量 加入标准品计算 加样回收率 /mg /mg /mg /mg /% 1 22.2 10.0 32.2 10.0 100.0 2 22.2 10.0 32.5 10.3 103.0 3 22.2 10.0 32.3 10.1 101.0 平均值% 101.3 RSD% 1.51 葡萄糖 样品中含量 加入标准品实际量- 测定含量 加入标准品计算 加样回收率 /mg /mg /mg /mg /% 26.9 10.0 36.5 样品中含量 加入标准品实际量 麦芽糖 加入标准品计算 加样回收率 样品中含量 加入标准品实际量 测定含量 加入标准品计算 加样回收率 1 /mg /mg /mg /mg /% 1 0 10.0 10.09 10.09 100.9 2 0 10.0 10.18 10.18 101.8 3 0 10.0 10.28 10.28 102.8 平均值% 101.8 RSD% 0.93 2.4含量测定 2.4.1雪菲力样品中含含量的测定 按“样品前处理”操作制备样品，按上述所建立的 HPLC 方法，对雪菲力样品进行了分析。测定结果计算如下： 表4.雪菲力样品中糖含量的测定结果 A/果糖 A/葡萄糖 A/蔗糖 A/麦芽糖 峰面积 7605.7 7580.3 含量 mg/ml 8.88 10.77 — 图2雪菲力样品的 HPLC 谱图 2.4.2可乐样品中糖含量的测定 按“样品前处理”操作制备样品，按上述所建立的 HPLC 方法，对可乐样品进行了分析。测定结果计算如下： 表5.可乐样品中糖含量的测定结果 A/果糖 A/葡萄糖 A/蔗糖 A/麦芽糖 峰面积 9599.6 6889.4 2689.7 含量 mg/ml 11.20 9.82 2.96 图3可乐样品的 HPLC 谱图 3 结论 使用 LC1600 泵配合 shodex 示差检测器，按 GB/T 22221-2008方法操作，四种糖在 Shodex NH2P-50氨基柱上能得到良好的分离效果，精密度≤2.13%，回收率在96.7%~101.8%之间。根据信噪比，按3倍噪声值计算，理论检出限为 0.2mg/ml，符合 GB/T22221-2008的要求。 上 上海舜宇恒平科学仪器有限公司 发现未来 上海舜宇恒平科学仪器有限公司SHANGHAI SUNNY HENGPING SCIENTIFICINSTRUMENT CO.，LTD. 食品中四种糖的含量测定1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含RI-201H示差折光检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品(>97%，国药试剂)；乙腈(色谱纯，美国Tedia)；纯净水(杭州娃哈哈)。