猪肉中喹乙醇代谢标识物MQCA检测方案(固相萃取仪)

Preekem 全自动固相萃取-高效液相色谱-质谱/质谱法测定 猪肉中的喹乙醇代谢标识物 MQCA 乡号：J-ANIET-1 摘要：建立了检测猪肉中喹乙醇代谢标识物-MQCA残留量的ASPE-HPLC/MS/MS (ASPE， Automatic Solid-Phase Extration) 法。猪肉中添加1 ng的MQCA标准物质，样品处理后进行ASPE净化。 HPLC/MS/MS检测显示：喹乙醇代谢标识物-MQCA在0.5-10.0 ng/kg范围内，线性关系良好，回收率为113%。该方法回收率和稳定性好，适用范围广，满足检测要求。 关键词：猪肉，喹乙醇， MQCA， ASPE-HPLC/MS/MS 1猪肉样品处理 1.1猪肉样品提取 称取猪肉样品5.0g ↓ 加入10mL 0.1M Tris-HCL (pH=8.0)缓冲溶液，涡旋混合2 min， 加10 pLβ-盐酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酯酶， 超声振荡15 min 后，恒温37℃培养16h， 酶解后，加入2.5mL 0.3 mol/L HCL 溶液， 调pH=3.0左右， 4000rpm 离心 5min， 上清液用 EXTRA-ASPE净化， 1.2样品ASPE净化 (1)待净化液采用 EXTRA-ASPE进行净化。 (2)在阴离子交换 SPE (Solid-Phase Extration) 小柱上装上3mL柱密封塞。 (3)将塞好密封塞的固相萃取小柱放入EXTRA 全自动固相萃取仪的3mL SPE架上。 (4)将溶剂瓶 S1 中装入600 mL 蒸馏水；溶剂瓶 S2 中装入600 mL0.2%甲酸乙酸乙酯溶液；溶剂瓶V1中装入800 mL醇醇溶液：用来清洗探针。 (5)在控制 EXTR-ASPE 系统的PC软件方法设置界面上，设置猪肉中喹乙醇的固相萃取方法(详细步骤参见表1)。 表1 ASPE净化详细方法列表 动作 位置 溶剂 体积 抽溶剂速度 打溶剂速度 清洗 外针 甲醇 6mL 120 mL/min 120 mL/min 活化 甲醇 3mL 15 mL/min 1.5 mL/min 水 3mL 15 mL/min 1.5 mL/min 上样 样品 13mL 15 mL/min 1.0 mL/min 清洗 外针 甲醇 6mL 120 mL/min 120 mL/min 淋洗 水 5mL 15 mL/min 1.5mL/min 空气 8mL 60 mL/min 60 mL/min 洗脱 0.2%甲酸乙酸乙酯 6mL 15 mL/min 1mL/min 空气 5mL 60 mL/min 60 mL/min (6)将待净化样品放入样品架内。 (7)设置运行界面，开始样品净化操作。 (8)固相萃取完成后，净化液于40℃下氮吹蒸发至近干，0.1%甲酸乙腈+水(1+9， v/v)定容至1mL，过膜后，供HPLC/MS/MS 分析。 2色谱检测条件 2.1高效液相色谱条件 色谱柱： C18，50×2.1 mm， 1.8 um 流动相：A：乙腈+0.1%甲酸， B： 5mmol/L 乙酸铵水溶液+0.1%甲酸 进样量：30uL 流速：400 mL/min 柱温：常温 表1梯度洗脱程序表 时间(min) 流动相A 流动相B 0 10 90 2 10 90 4 90 10 4.5 90 10 5.0 10 90 10.0 10 90 2.2质谱条件 离子源：电喷雾 ESI 扫描方式：负离子 检测方式：多反应监测 MRM 电喷雾电压 (IS)：5000V 雾化气电压(GSI)： 50 psi 气帘气压力：30Psi 辅助气压力：45Psi 离子源温度(TEM)：500℃ 检测离子对、碰撞电压(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)、碰撞室出口电压(CXP)如表2所示 表 2 MQCA的碰撞电压、去簇电压、碰撞室入口电压、碰撞室出口电压参数表 化合物 母离子 子离子 CE DP EP CXP MQCA 186.9 143.0 -16 -40 -6 -10 102.0* -25 -40 -7 -10 注： “*”为定量离子 186.9/102 186.9/143 Time Tima min 图1猪肉中中乙醇代谢标识物MQCA标准 HPLC/MS/MS色普图 186.9/102 186.9/143 图2猪肉中喹乙醇代谢标识物 MQCA 加标 HPLC/MS/MS色谱图 表2样品加标回收实验 序号 化合物名称 标准加入量(ng) 实测值 (ng/mL) 回收率(%) 1 喹乙醇代谢标识物MQCA 1 1.13 113 3. 结论 建立了 APSE-HPLC/MS/MS 法测定猪肉中喹乙醇代谢标识物 MQCA 残留量的分析方法。实验显示：喹乙醇代谢标识物 MQCA 回收率为113%。该方法准确可靠，操作方便，重现性好。适合猪肉中喹乙醇代谢标识物MQCA 残留量的快速、准确检测。