蔬菜水果中六六六检测方案(固相萃取仪)

Preekem 全自动固相萃取-气相色谱法检测蔬菜水果中的六六六 编号： PLAET1402 摘要：本方法参考《NY/T 761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基酸甲酯类农药多残留的测定》标准，结合实际情况优化实验条件，用乙腈提取试样中的有机氯农药，过滤后加入氯化钠使提取液中的有机相和水相分层，取一定量的有机层溶液氮吹浓缩后，用正己烷溶解，然后用EXTRA(上海屹尧)全自动固相萃取仪进行净化分析，洗脱液经浓缩定容后供 GC-ECD 分析，外标法定量。 关键词：有机氯、a-六六六、β-六六六、丫-六六六、8-六六六、GC、固相萃取 引言： 有机氯农药是一类于20世纪30年代后相继问世的氯代芳香烃类衍生物，该类农药作为高效光谱的杀虫剂，曾被世界各国广泛使用，但是这类农药化学性质稳定、不易分解、脂溶性大、残效期长、属于神经毒物和实质脏器毒物，易在脂肪组织中蓄积，造成慢性中毒，严重危及人体健康。且在食品的加工过程中经单纯的洗涤并不能完全去除而被禁止使用或限制使用。但目前仍有在食品中检出上述成分的报道，因此快速、高效的测定食品中有机氯的残留量是非常重要的。 本文参考《NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基酸甲酯类农药多残留的测定》标准，结合实际情况优化实验条件，用乙腈提取试样中的有机氯农药，过滤后加入氯化钠使提取液中的有机相和水相分层，取一定量的有机层溶液氮吹浓缩后，用正己烷溶解，然后用 EXTRA(上海屹尧)全自动固相萃取仪进行净化分析。选用EXTRA(上海屹尧)全自动固相萃取仪，免人工干预，自动完成 SPE柱活化、样品上样、目标物洗脱和收集等步骤，释放了大量实验室劳力。收集液再经氮吹浓缩、溶剂转换定容后，，以GC-ECD 完成了蔬菜水果中有机氯(a-六六六、β-六六六、Y-六六六、88-六六六)残留量的分析。本方法具有精确可靠、灵敏度高、重复性等优点，可以满足准确、快速的检测需要，运用到实际样品的检测中结果令人满意。 1.试剂、仪器及器材 1.1试剂 除另外有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为一级水。 乙腈。 氯化钠，140℃烘烤4h。 铝箔。 丙酮。 己烷。 单个农药标准溶液：准确称取一定量(精确至0.1mg)农药标准品(纯度≥96%)，用正己烷稀释，逐一配制成1000mg/L 单一农药标准储备液，储存在-18℃以下冰箱中，使用时根据各自农药在对应检测器上的响应值，准确吸取适量的标准储备液，用正己烷稀释配配成所需的标准工作液。 农药混合标准溶液：根据农药在仪器上的响应值，逐一吸取一定体积的单个农药储备液注入同一容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，采用同样方法配制成农药混合标准储备液，使用前用正己烷稀释成所需质量浓度的标准工作液。 1.2仪器及器材 全自动固相萃取仪 EXTRA(上海屹尧)、安捷伦气相色谱仪、ECD 检测器、电子天平、超纯水机、高速离心机、氮吹仪、移液枪、色谱柱：预柱：1.0m(0.25mm内径，脱活石英毛细管柱)；分析柱：100%聚甲基硅氧烷(DB-1柱)(30mX0.25mmX0.235um)、 弗罗里硅柱(1g/6mL) 2.实验方法 2.1提取 准确称取 25.0g试样放入匀浆机中，加入 50.0mL乙腈，在匀浆机中告诉匀浆 2min 后用滤纸过滤，滤液收集到装有 5g-7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液40mL-50mL，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min， 使乙腈相和水相分层。 2.2净化 从100mL 具塞量筒中吸取 10.00mL乙腈溶液，放入150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气或空气流，蒸发净干，加入2.0mL正己烷，盖上铝箔，待净化。 将弗罗里硅柱依主用 5.0mL 丙酮+正己烷(10+90)、5.0mL 正己烷预淋洗，条件化后上样并收集，用5mL丙酮+正己烷(10+90)稀释后上样，并重复一次。 2.3分析 将收集管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮吹蒸发至小于5mL，用正己烷定容至 5.0mL， 在涡旋混合器上混匀。 2.4仪器条件 2.4.1EXTRA 净化程序 EXTRA 净化程序如表1所示： 表1EXTRA净化程序 动作 位置 溶剂 体积(mL) 抽溶剂速度 打溶剂速度 (mL/min) (mL/min) 清洗 外针 正己烷 6 120 120 活化 丙酮+正己烷(10+90) 5 20 2 正己烷 20 2 上样并收集 样品溶液 2.1 20 1.5 清洗 外针 正己烷 6 120 120 稀释 丙酮+正己烷(10+90) 5 20 15 上样并收集 样品溶液 5 20 1.5 清洗 外针 正己烷 120 120 稀释 丙酮+正己烷(10+90) 5 20 15 上样并收集 样品溶液 5 20 1.5 空气 60 60 2.4.2色谱条件 温度： 进样口温度：200℃。 检测器温度：320℃。 6℃/min 柱温：：150℃保持 2min 270℃(保持8min)。 气体及载流量： 载气：氮气，纯度大于99.999%， 流速为1mL/min 辅助气：氮气，纯度大于99.999%，流速为60mL/min。 进样方式： 分流进样，分流比：10：1。 色谱分析：分别吸取1.0uL 标准混合溶液和净化后的样品溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积和标准溶液峰面积比较定量。 3.结果与讨论 3.1色谱图 通过气相色谱分离，利用 ECD 检测器检测，在2.4.2色谱条件下，标准溶液、加标样品和空白样品的色谱图如下所示： 图1蔬菜样品图 归一化ECD1B， 后部信号(VC140157\有机氯\3.D) 图2蔬菜加标样品图 图3混标图 由图中可以看出，4种六六六保留时间重现性良好，样品经净化后无明显干扰。 3.2加标回收率、相对标准偏差 在25.0g空白样品中添加适量的标准混合液，平行三份，进行加标回收实验。加标回收率、相对标准偏差如下表所示： 表5回收率及精密度实验结果 组分 本底值 加标值 平均测定值 RSD (n=3) 平均回收率% (ug/mL) (ug/mL) (ug/mL) α-六六六 0 0.05 0.035 5.59 70 β-六六六 0 0.05 0.051 6.63 102 y-六六六 0 0.05 0.037 1.67 74 8-六六六 0 0.05 0.048 4.61 96 3.4讨论 3.5.1本方法适用于大批量样品的同时检测，样品量大，所以本实验采用了 EXTRA 全自动固相萃取仪进行净化处理，免人工干预，自动完成 SPE 柱活化、样品上样、目标物洗脱和收集等步骤。全自动固相萃取仪采用正压技术控制液体流速，保证液体传送的准确性和重现性，从而避免了重复的人工操作及人为误差，并且能够确保良好的重现性和精确性，便于方法的实验室间转移，也便于建立行业乃至国家的实验室标准。 3.5.2洗脱液浓缩时，洗脱液体积要接近5mL， 因为六六六为易挥发性农药，浓缩体积太小会造成损失，使回收率偏低。 4.结论 本实验采用全自动固相萃取仪(上海屹尧)结合气相色谱(GC-ECD)检测蔬菜水果中的有机氯残留量。该方法抗干扰性强，具有较高的灵敏度，回收率符合要求，精密度 RSD 值也都较小，运用到实际样品的检测中结果令人满意。因此本方法可以满足准确、快速的检测需要，应用到实际样品检测中。 ( 参考文献 ) ( [1] 《NY/T 761-2008蔬菜和水果中 有 机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基酸甲酯类农药多残留的测定》 )