猪肉中喹乙醇代谢标识物-MQCA残留量检测检测方案

ASPE-HPLC/MS/MS法检测猪肉中 喹乙醇代谢标识物-MQCA的残留量 微波化学·样品前处理 猪肉中喹乙醇检测重要性 3-甲基喹噁啉-2-羧酸是喹噁啉在动物体内的代谢产物，以喹乙醇为主要代表。动物摄入含有喹乙醇的饲料后，会在肾脏、肠道、肌肉等组织中代谢生成3-甲基喹噁啉-2-羧酸，-这种代谢物-直接危害动物机体的健康，-受污染的动物产品被人食用后就会造成其在人体内的蓄积，导致细菌产生耐药性，从而危害人体的健康 猪肉中喹乙醇检测标准 GB/T 20746-2006 仪器 HPLC： Agilent 1290 EXTRA全自动固相萃取仪 猪肉样品提取 称取5g(精确至0.01g)猪肉样品于50mL具塞塑料离心管中 加入10mL 0.1M Tris-HCL (pH=8.0)缓冲溶液，涡旋混合2min 加10 plβ-盐酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酯酶 超声振荡15min后， 恒温37℃培养16h 酶解后，加入2.5mL 0.3 mol/L HCL 溶液 ， 调pH=3.0左右 4000rpm离心5min， 取上清液待测 猪肉样品净化 (1)待净化液采用EXTRA-ASPE进行净化 (2)在阴离子交换SPE (Solid-Phase Extraction)小柱1上装上3mL柱密封塞(3)将塞好密封塞的固相萃取小柱放入EXTRA全自动固相萃取仪的3mL SPE架 (44)将溶剂瓶S1中装入600mL蒸馏水；溶剂瓶S2中装入入6000mL0.2%甲酸乙酸乙酯溶液 溶剂瓶V1中装入800mL甲醇溶液(用来清洗探针)(55)在控制EXTR-ASPE系统的PC软件方法设置界界i面上，设置猪肉中喹乙醇代谢物检测测固 相萃取方法(固相萃取方法设置如图2) 的 图2哇乙醇代谢物ASPE净化方法设置图 (6)将待净化样品放入样品架架内(7)设置运行界面，开始猪肉样品净化操作 (8)EXTRA-ASPE净化方法如下 活化 设置活化程序，向SPE柱中依次加入3mL甲醇和3ml 上样 设置上样程序，将待净化液加入SPE小柱中 清洗探针 能，完成探针清清洗 淋洗 洗脱 设置洗脱程序，将6mL 0.2%甲酸乙酸乙加入SPE小柱中 (9)固相萃取完成后，净化液于40℃下氮吹蒸发至近干，0.1%甲酸乙腈+水(1+9，v/v定容至1mL，过膜后，供HPLC/MS/MS分析 液相色谱/质谱检测条件 液相色谱条件色谱柱：C18柱， 50mmx2.1mm，1.8pm 流动相：A：乙腈+0.1%甲酸B： 5mmol/L乙酸铵水溶液+0.1%甲酸流速：柱温： 常温 进样量：30pL 梯度洗脱程序(表1) j间(min) 流动相A(9 动相B(%%) 0.0 10.0 离子源： 电喷雾ESI扫描方式 负离子 检测方式： 多反应监测MRM电喷雾电压(IS 5)雾化气电电(GSI 50psi 5000V 气帘气压力： 30Psi 辅助气压力： 4：45Psi 离子源温度(TEM)：：500℃ 检测离子对、碰撞电压(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)、碰撞室出口 电压(CXP)：见表： (表2)注：“*”为定量离子 离子 子离子 CE143.0 -16 -6|186.9 -10 102.0)1-25 40 - 10 图4猪 /MS/MS色谱图 结论