克林霉素磷酸酯中有关物质检测方案(液相色谱柱)

Jul.29，2015LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31， BDA International Business Park，2 Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-6785-6801， FAX 010-6785-6882 克林霉素磷酸酯的药典分析 本实验分别尝试两款色谱柱，按照2015版药典方法对客户提供的克林霉素磷酸酯原料药样品进行分析。首先，使用 CAPCELL PAK MG 色谱柱，按照有关物质项下方法进行分析，结果如图1、2。克林霉素磷酸酯峰与杂质A分离度为1.84，大于要求的1.0，完全符合药典要求。 图1MG色谱柱分析色谱图 Minutes 图2MG色谱柱分析色谱图局部放大图 注：峰上标数字为分离度。 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK MG S5；4.6 mmi.d.×250 mm 流动相： A) 磷酸缓冲液*/90%乙腈甲醇溶液=92/8 B) 磷酸缓冲液*/90%乙腈甲醇溶液= 52/48B)5%(0min)->95%(40min)->5%(41min)->5%(46min) 流速1200 uL/ min温度检测 40℃ PDA 210nm 进样量： 50 uL 样 品： 3.75 mg/mL(以稀释剂[磷酸缓冲液(pH3.9)(取磷酸3.5ml，加水1000ml和浓氨溶液2.5ml，用浓氨溶液调节pH值至3.9±0.05)-90%乙腈甲醇溶液(80：20)]溶解稀释) *磷酸缓冲液：取磷酸3.5mL，加水1000mL 和浓氨溶液2.5mL，必要时用浓氨溶液调节 pH值至3.9±0.05) 其次，根据药典要求，使用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱 CAPCELL PAK C8 DD， 按照含量测定项下方法进行分析，结果如图3.克林霉素磷酸酯峰保留时间为 14.5 min(药典要求克林霉素磷酸酯峰保留时间约为16min)，克林霉素磷酸酯峰与杂质A峰间峰离度为1.84，大于药典要求的1.0，符合药典要求。 Minutes 图3 C8 DD色谱柱分析色谱图 图4 C8 DD色谱柱分析色谱图局部放大图 注：峰上标数字为分离度。 ( HPLC Conditions： ) 色谱柱： CAPCELL PAK C8 DD S5；4.6 mm i.d.×250mm ( 流动相： 磷酸盐盐冲液(取磷酸氢二钾13 . 61g，加水1000mL使溶解，用85%磷酸溶液调节 pH=2.5)/乙腈=80/20 ) 流速1000 uL /min温度检测 ( 35℃ ) ( PDA210nm ) 进样量： 20 pL 样 品： 3.75 mg/mL(以稀释剂[磷酸缓冲液(pH3.9)(取磷酸3.5ml，加水1000ml和浓氨溶液2.5ml，用浓氨溶液调节pH值至3.9±0.05)-90%乙腈甲醇溶液(80：20)]溶解稀释) 综上所述，资生堂两款色谱柱分析结果完全符合药典要求。 【附：实验所用试剂信息】 ( 甲醇品牌： 百百威规格：99.9%HPLC/ACS级 4L 货号： Cat No . ：116481 批号： Lot： L630P46 ) 乙腈品牌：百灵威规格：99.9%HPLC/ACS 级 4L 货号： Cat No.： 134752 批号： Lot： L990007 ( 王志欣郭彦丽 )