中药中主要物质含量分析检测方案

HPLC法测定黄蜀葵花中金丝桃苷的含量 黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵（Abelmoschus manihot (L. ) Medic）的干燥花冠，具有通淋、消肿、解毒等功效，多用来治疗淋病、痈疽肿毒、烫伤等。有研究指出黄蜀葵花的主要成分为黄酮类化合物，其中以金丝桃苷、槲皮素，异槲皮素含量最高。本文建立了测定黄蜀葵花中金丝桃苷的含量的HPLC法，结果表明方法简单准确，结果可靠。 1 测试条件 1.1 仪器 分析型高效液相色谱仪（HPLC），由AS3000自动进样器，Laballiance Series 高压泵、DAD检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支C18 Kromasil 色谱柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱。 1.2试剂和样品 金丝桃苷对照品品（中国药品生物制品检定所），乙腈（色谱纯），水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂为分析纯，黄蜀葵花样品购自当地药店，产地为安徽。 1.3对照品溶液配制 精密称取金丝桃苷对照品5.00 mg，加甲醇定容至25 mL，制成0.200 g/L的金丝桃苷对照品储备液，冷藏备用。 1.4供试品溶液的制备 精密称取样品粉末200 mg，70%甲醇溶解，超声30 min，过滤液置于50mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，冷藏备用。 1.5色谱条件： 色谱柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)； 流动相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（v/v=20:80） 柱温：40℃； 流速：1.0 mL/min； 检测波长：360 nm； 进样量：20 uL。 2测试结果 2.1检测波长的选择 取金丝桃苷对照品溶液和样品溶液，分别进行紫外光谱扫描，金丝桃苷在258nm和360nm有两个最大吸收峰，兼顾样品和对照品，所以我们选用测定波长为360nm。 图1 金丝桃苷对照品的高效液相色谱图 2.2线性关系、方法检出限考察 分别移取金丝桃苷对照品储备液0.5、1、2、3、4 mL，分别用甲醇定容至10 mL，配制得到一系列对照品溶液。取上述溶液各20 uL，按1.5所述色谱条件进样分析。以峰面积Y为纵坐标，进样量X（ug）为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程。金丝桃苷的线性回归方程为Y = 209253 X +9531.5，r = 0.9998，线性范围为2～16 ug；以3倍信噪比计算该方法的最低检测限为30 ng. 2.3精密度和重现性实验 取供试品溶液重复进样6次，每次20 uL，测定峰面积。金丝桃苷峰面积测定结果的RSD为1.34%，表明方法精密度良好 。 取样品，按1.4条件制备6份供试品溶液，分别进样20 uL，测定峰面积，计算金丝桃苷的含量，含量测定结果的 RSD为1.03%，表明方法重现性良好。 2.4稳定性实验 取样品溶液分别在0、2、4、8、12按1.5的色谱条件进样，（不测时于冰箱4℃冷藏），测定峰面积，峰面积的RSD分别为1.86%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。 2.5加标回收率实验 精密称取已知金丝桃苷含量的黄蜀葵花样品，分别加入不同含量的金丝桃苷对照品，按1.4项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果如表1。 表1 加标回收试验结果 已知含量/mg 添加量/mg 测得值/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 1.18 1.03 2.13 92.2 93.8 1.6 1.24 1.01 2.19 95.2 1.16 1.01 2.10 94.0 1.18 1.20 2.31 94.2 95.6 1.33 1.20 1.23 2.39 96.7 1.19 1.21 2.35 95.9 1.21 1.50 2.65 96.0 97.1 1.04 1.23 1.46 2.65 97.3 1.22 1.49 2.68 98.0 3结论 黄蜀葵花的主要化学成分是黄酮类，其中金丝桃苷，含量较高，活性较强，且性质稳定，所以选择测定金丝桃苷的含量做为质量控制的指标。本文采用高效液相色谱法测定黄蜀葵花中金丝桃苷的含量，经过精密度、回收率等试验考查，均符合要求。该方法灵敏，快速，准确，可用于对黄蜀葵花的质量进行评价。