白细胞过滤器去除血液中肿瘤细胞及对红细胞的影响

整理： FFU-www.jiejingfang. com洁净棚价格www.jiejingfang.com/jinghuapeng/FFU价格www.jiejingfang.com/ffu/ 层流罩价格www.jiejingfang.com/cengliuzhao/·284· 维普资讯 http：//www.cqvip.com中国输血杂志2008年4月第21 卷第4期 Chin J Blood Transfusion，April，2008，Vol.21 ，No.4·285· 3 讨论 PCC 在2000年版《中国生物制品规程》中被收录于试行规程中，2005年版《中国药典》重新将其收录。新药典取消了原规程中用于标示凝血因子效价的 PE 效价，以FX活性作为该制品的标示量，FI、FM、FX3种因子活性也分别标示，基本与《欧洲药典》相一致。 采用直接以血浆为原料与以组分Ⅰ+Ⅲ沉淀为原料相比，减少了乙醇对凝血因子的破坏，生产出的制品收率较高，其中FIX活性的收率超过了 300IU/L 血浆，另外3种凝血因子的活性也保持较高，而且采用该生产工艺生产制品的质量较为稳定，FⅡ、FM、F、FX4种凝血因子的活性基本稳定，批间差异也非常小。使患者使用时更安全有效。制品的纯度提高，还能有效的去除与血栓(溶血)副作用有关的杂蛋白成分(AT-Ⅲ、Fn、Plg、PKA、R：Ag、抗-A、抗-B凝集素)，这样能大大降低致血栓的潜在威胁。 由于S/D 法仅对脂包膜病毒有效，而对非脂包膜病毒无效；(100±0.5)℃ 30min 能有效的灭活非脂包膜病毒，这两种病毒灭活方法结合使用能有效灭活制品中的病毒。这 两种病毒灭活方法，灭活相应的指示病毒均在4个 log 以上，且经细胞培养盲传3代，均未出现细胞病变。同时采用S/D 灭活和(100±0.5)℃灭活 30min 对制品中的凝血因子活性基本没有影响。 ( 参 考 文 献 ) ( [1] 骆成榆，巫善明，陈良.凝血酶原复合物在病毒性肝炎中的临床应用[J].上海预防医学杂志，1997，9(4)：165-167 ) ( [2] 刘隽湘.输血疗法与血液制剂[M].北京：人民卫生出版社， 1996，220-221 ) ( [3] 国家药典委员会.中国药典.2005，[M].北京：化学工业出版 社，2005，193--194 ) ( [4] 欧洲药典委员会.欧洲药典.(第4.6版)[M].2004，4033-4034 ) ( [5] 余蓉，刘文芳，赵青蓉，等.改良凝胶吸附法制备的凝血酶原 复合物[J].中国输血杂志，1997，10(2)：63-66 ) ( (2007-08-28收稿，12-31修回) ) ( 本文编辑：刘晓明 ) 实验研究· 白细胞过滤器去除血液中肿瘤细胞及对红细胞的影响 刘江月' 陈京霞 张雪莉 王占聚 (1.潍坊医学院病理生理学教研室，山东潍坊 261042，2.急诊教研室3.组织胚胎学教研室4.内科教研室) 摘要：目的 研究白细胞过滤器清除血液回收机漂洗后血液中残存肿瘤细胞的效果，并观察过滤后红细胞的数量、形态及其脆性的改变。方法 选择繁殖能力强，不易受损的细胞系肠肿瘤细胞(LOVO)和胃肿瘤细胞(SGC)进行体外培养，待细胞消化后制成单一细胞悬液；采集非肿瘤患者术野血液，经过滤、离心、漂洗收集浓缩红细胞。将细胞悬液中的肿瘤细胞计数后混入浓缩的红细胞中，混匀，再用血液回收机过滤、离心、漂洗，将漂洗后得到的浓缩红细胞用白细胞过滤器过滤，观察过滤对血样中肿瘤细胞的影响并与未经过滤处理的对照组进行比较，同时测定红细胞数、红细胞平均体积(MCV)、红细胞体积分布宽度变异(RDW)及红细胞渗透脆性，观察过滤对红细胞的影响。结果 过滤后的血样中未发现肿瘤细胞，而对照组血样中可见到肿瘤细胞。培养14天后观察，经白细胞过滤器过滤后的血样未见肿瘤细胞生长，而对照组血样中有大量肿瘤细胞生长。过滤后的 RBC、MCV、RDW和红细胞渗透脆性与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论 应用自体血液回收机配合白细胞过滤器，可有效去除血液中的肿瘤细胞，且对红细胞数量、形态及细胞膜无明显影响。 关键词：白细胞过滤；肿瘤；红细胞 中图分类号：R457.1 R318.6 文献标识码：A 文章编号：1004-549X(2008)04-0284-02 白细胞过滤器去除白细胞输血的技术在国外已普遍应用。在我国近年来也取得很大进展，受到了临床医务人员的重视。目前，白细胞过滤器以其去除白细胞效率高，操作简便，价格合理且无不良反应而成为最有效的去除白细胞的方法，在预防输血不良反应的产生及输血相关病毒的传染方面已取得了较为满意的效果效3.4]。但应用白细胞过滤器去除血液中肿瘤细胞国内报道很少。我们研究白细胞过滤器清除血液回收机漂洗后血液中残存肿瘤细胞的效果并观察过滤后红细胞的数量、形态及其脆性的改变。结 果报道如下。 材料与方法 1.1器材 RF-Ⅱ-200 型去白细胞过滤器(南京赛尔金生物医学有限公司)；BW-8100A型自体血液回收机(天津万东医疗器器有限公司)；OLYMPUS 显微镜(日本奥林巴斯公司)；SF-3000 型血细胞计数仪(Sysmex)。 1.2细胞系及培养 肠肿瘤细胞(LOVO)和胃肿瘤细胞(SGC)由上海第二医科大学提供。将肿瘤细胞接种于 RP MI1640 培养液，在37℃、含 5% CO， 饱和湿度培养箱内培养1周。待细胞成熟后用0.25%胰酶消化为单细胞悬液。 1.3血标本来源及处理 本院手术室采集非肿瘤患者术野血液 200ml(肝素抗凝)，加入自体血液回收机的储血罐中，经过滤、离心、票洗，得到浓缩的红细胞。 1.4实验方法 将培养成熟的肿瘤细胞计数后分别放入浓缩的红细胞中，混匀，再用血液回收机过滤、离离、漂漂，将漂洗后得到的浓缩红细胞分成过滤组和对照组，过滤组再用白细胞过滤器过滤，用台盼蓝进行染色，肿瘤细胞计数，观察过滤对血样中肿瘤细胞的影响并与未经过滤处理的对照组进行比较，并将两组血样均培养14天。14天后用台盼蓝染色，显微镜下观察两组血样细胞的生长情况，并进行肿瘤细胞计数。 1.5数据分析及统计学处理 用 SPSS11.5软件作统计学分析。采用配对t检验评价过滤前后 RBC、MCV、RDW、红细胞膜渗透脆性。检验水准α=0.05，P<0.05 为差异有显著性。 2 结果 过滤组的血样中未发现肿瘤细胞，而对照组血样中可见到肿瘤细胞，肿瘤细胞计数。培养14天后观察，经白细胞过滤器过滤后的过滤组血样未见肿瘤细胞生长，而对照组血样中有大量肿瘤细胞生长，肿瘤细胞计数(表1)。过滤组的红细胞数、MCV、RDW 与对照组相比差异无显著性(P>0.05)(表2)。过滤组与对照组红细胞渗透脆性开始溶血时均为(5.516±0.318)g/L，完全溶血后均为(3.694±0.315 )g/L。 表1 对照组与过滤组肿瘤细胞计数 (×10*ml) 组 别 SCG LOVO 过滤(当天) 过滤组 0 0 对照组 21 16 过滤(14天) 过滤组 0 0 对照组 53 42 表2 对照组与过滤组红细胞参数对比 (元±s) 对照组(n=10) 过滤组(n=10) RBC(10°/L) 7.157±0.582 7.112±0.579 MCV(fl) 31.23±0.99 30.28±1.02 RDW(%) 14，75±1，79 14.53±1，32 注：RBCt=2.262 MCVt=0.569 RDWt=0.497 P值均>0.05；两组 RBC渗透脆性无变化 3 讨论 异体输血会导致免疫抑制效应，增加肿瘤复发或扩散的机会，而自体输血可避免这一效应，逐渐受到人们的重视。因而有关术中自体血液回输的研究也越来越多!6}。血液回收技术是将术野中或所切除器官中的血液在术中进行采集，抗凝后进行离心，等渗盐水漂洗，得到能够回输的浓缩红细胞、白细胞和血小板，以及将其他的微粒、碎片去除。该项技术在我国已推广使用，但能否用于肿瘤患者目前仍 有较大争议。即自体输血是否会造成肿瘤细胞栓子或癌细胞的扩散或转移是医学界争论的焦点。从理论上看本法有促使肿瘤细胞转移至其它部位的可能，因此通常被认为是禁用的。肿瘤病人术野的血液可检测到肿瘤细胞，这些肿瘤细胞经克隆后接种到裸鼠，能够引起肿瘤生长”。但近年研究表明，自体血液回输并不能增加肿瘤转移的危险性。Perseghin等报告16例肺癌手术失血中有9例(56%)找到癌细胞，但经一种聚酯网过滤后，全部被安全清除。因此，有人提出该技术用于恶性肿瘤患者是可行的。本研究采用白细胞过滤器对漂洗后的血样进行过滤，过滤后的血样中未发现肿瘤细胞，而对照组血样中可见到肿瘤细胞。培养14天后观察，经白细胞过滤器过滤后的血样未见肿瘤细胞生长，而对照组血样中有大量肿瘤细胞生长。从而证明，应用自体血液回收机配合白细胞过滤器，可有效去除血液中的肿瘤细胞。本研究结果也显示过滤组红细胞数、MCV、RDW与对照组相比差异无显著性(P>0.05)，说明滤器对红细胞体积无影响，白细胞过滤器的滤芯是以经严格孔径控制的聚酯无纺布作为滤材，使得体积较大的肿瘤细胞被阻滞，而体积较小的红细胞得以顺利通过，未造成红细胞体积的改变。过滤组与对照组红细胞渗透脆性无变化，表明该滤器对红细胞膜无机械性损伤，未出现明显的溶血现象。综上所述，应用自体血液回收机配合白细胞过滤器，可有效去除血液中的肿瘤细胞，且对红细胞数量、形态及细胞膜无明显影响。 ( 参 考 文 献 ) ( [1] 姚芳芳，孙启俊，孙元国.超细玻璃纤维膜白细胞过滤器的 研究[J].中国输血杂志，2003，13(13)：168—170 ) ( [2] 王娟，蒋茜.白细胞过滤器的临床应用[J].中国现代医学 杂志，2006，16(22)：3457—3459 ) ( [3] Muller-Steinhardt M， S chlenke P， Wagner T， et al. Transfusionof platelet concentrates from pooled buffy-coats： comparison o fbedside vs. prestorage l e ukofiltration. T ransfus M e d， 2000， 10 (1)：59--65 ) ( [4] Wadhwa M ， Seghatchian M J ， Di l ger P， et al. C y tokines inWBC-reduced apheresis PCs during storage： a comparison oftwoWBC-reduction methods[J]. Transfusion， 2 000， 40 ( 9 ) ： 1118—1126 ) ( [5] 于新发.恶性肿瘤患者的合理输血[J].中国输血杂志， 2002，15(3)：222—223 ) ( [6] Sakert T， Gilw ， Rosenberg I. Cell saver efficacyfor routine cor- onary artery by pas s surgery [J]. Perfusi o n ，199 6 ，11 (1)： 71-77 ) ( [7] 张彦，王亮，郑玉华.肿瘤病人输血的研究进展[J].中国麻 醉与镇痛，2003，5(2)：157-160 ) ( [8] Perseghin P，Vigano M ， Rocco G，et a1. Effectiveness of leuko- cyte filters in reducing tumor cell contamination after intraopera- tive blood salvage in lung cancer patients [J]. Vox Sang，1997， 72(4)：221—224 ) ( (2007-12-04收稿，2008-01-20修回) )