DPX封片胶在牙组织免疫组化染色防脱片中的作用

ISSN1007-8738细胞与分子免疫学杂志(Chin J Cell Mol Immunol)2012，28(4)418文章编号：1007-8738(2012)04-0418-02 ·论著· DPX封片胶在牙组织免疫组化染色防脱片中的作用 王文勇'，黄晓峰2*，闫庆国，李擒龙，张素珍，王伯法 (第四军医大学基础医学院：病理学与病理生理学教研室暨西京医院病理科；中心实验室，陕西西安710032) [摘要] 目的：研究 DPX封片胶在牙组织免疫组化染色中的防脱片效果。方法：狗上前牙EDTA 脱钙、常规石蜡包包、切片、脱蜡、水洗、干燥后，用 DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈，37℃烤干 DPX封片胶， EnVision 技术观察IL-1、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-9的表达。结果： DPX封片胶处理后的切片，经微波抗原修复后，切片上的组织完整没有边缘脱落破损现象。免疫组化染色后，组织形态基本完整，相应分子表达定位准确，染色结果清晰。结论：DPX封片胶在牙齿等含钙组织免疫组化染色中有良好的防脱片作用。 [关键词] DPX封片剂；免疫组化；组织防脱片；抗原修复 [中图分类号] R392.12 [文献标识码]A 免疫组化染色过程中组织切片要经过很多的操作步骤，切片虽然用了防脱片的黏附剂多聚赖氨酸或3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷等处理并60℃烤4h，但也可能导致组织脱片，特别是含钙组织更容易脱片，使免疫组织化学染色失败。DPX是一种合成的树脂封片胶，是由联苯乙烯(distyrene)、增塑剂(plasticizer)和二甲苯(xylene)组成的混合物。本实验室利用 DPX封片胶在组织脱蜡至水后吹干组织切片，再用 DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈，37℃烤干后再做免疫组化染色，收到了满意的效果，报道如下。 1材料和方法 1.1材料3条狗18颗上前牙经种植钉支抗加力作用2周，X线片观察根尖出现阴影后，经100 mL/L中性甲醛灌注处死实验狗， EDTA脱钙8~10周，常规石蜡包埋，制备3~5 pm连续切片备用(载玻片用3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷涂片)。兔抗IL-1、兔抗基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1，MMP-1)、兔抗 MMP-9抗体购自 Abcam 公司，兔 EnVision 试剂购自 Dako 公司， DPX封片胶购自 Sigma 公司。NN-520B微波炉购自日体松下公司。 1.2方法分别设两组进行相同抗体、相同染色步骤的免疫组化染色：对照组不用 DPX 封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈。实验组使用 DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈。进行MMP-1、MMP-9、IL-1免疫组化 EnVision 方法检测。 ( 收稿日期：2012-01-20；接受日期：2012-02-06 ) ( 作者简介：王文勇(1963-)，男，四川巴中人，高级实验师 Tel：029-84773921；E - mail： w wyong@ fmmu. edu. cn*Corresponding author， E -mail： h uangxf@ fmmu. edu. c n ) 免疫组化染色步骤如下：①石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水振洗，电风扇吹干；②将实验组切片用牙签蘸取少量 DPX封片胶，沿切片上组织周围将组织边沿组织和玻片涂抹上 DPX封片胶，反复操作涂抹组织一圈，将切片平放37℃烤干 DPX封片胶， PBS 振洗5 min×2；③3 mol/L尿素消化 30 min， PBS振洗5 min×2；④ 30 mL/L 双氧水室温封闭内源性过氧化物酶30 min， PBS振洗5 min×2；⑤组织微波抗原修复(柠檬酸盐缓冲液， pH6.0)，用高火约3.5 min 至修复液微开，转至恒温10 min， 切忌修复液沸腾，自然冷却， PBS 振洗 5 min ×2；组织滴加一抗(IL-1、MMP-1、MMP-9抗体，稀释度分别为100、1：20、1：100)，4℃冰箱过夜，37℃孵育30 min， PBS 振洗5 min×2；⑥滴加EnVision 复合物，37℃孵育40 min， PBS 振洗5 min ×2； ⑦ DAB 显色，苏木素复染，梯度酒精脱水、透明(组织在二甲苯中透明时，组织周围的 DPX封片胶就被二甲苯融掉，不影响组织封片)、封固。 2 结果 对照组在经过微波抗原修复后，切片上的组织变得破损，组织与玻片贴的不紧组织边沿掀起折叠，再经过后面步骤的反复振洗，不到显色或最终封片时，大部分组织都脱落了，最终没有得到满意的免疫组化结果。实验组在经过微波抗原修复后，切片上的组织完整没有边缘脱落破损现象。免疫组化染色后，组织形态基本完整，相关分子表达定位准准，染色结果清晰(图1)。 A： IL-1表达；B： MMP-1表达；C： MMP-9表达. 图1牙组织 EnVision 免疫组化染色结果(×100) 3 讨论 要做免疫组化染色的组织切片，一般在在切片贴片前，载玻片已经用黏附剂如多聚赖氨酸或3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷等进行处理防止组织在染色过程中脱片。通过黏附剂处理后的切片，通常情况下 (下转421页) 胞激活信号的缺陷，将有助于进一步理解调节性B细胞在银屑病发病中的作用。丰富银屑病的病因学及发病机制研究，为银屑病等自身免疫性疾病的细胞治疗奠定基础。 ( 参考文献： ) ( [1] Mizoguchi A， Mizoguchi E， Smith NR ， et a l. 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Dev e lopment of psoriasis after B c e ll ) (上接418页) 可以防止组织掉片。含钙组织虽然经过脱钙处理，但一般很难达到完全脱钙，残留的少量钙影响组织和载玻片的黏附，特别是进行抗原修复处理时，组织经过微波热处理或胰酶消化等步骤，极易导致组织与载玻片的黏附性下降，组织边缘脱落掀起。在以后的染色步骤中逐步脱片，导致免疫组化染色的失败3-6]，造成人力物力的浪费。尤其是有些标本取材不易，造成的损失更大。本实验室利用 DPX 封片胶在组织脱蜡至水后吹干组织切片，再用 DPX 封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈，使组织边缘与载玻片的黏附牢固程度加强，组织边缘不再脱落掀起。37℃烤干后再做免疫组化染色，极好的解决了牙齿等含钙组织免疫组化染色中的脱片问题，收到了满意的效果。此方法简单实用、效果好，在遇到容易脱 ( depletion with rituximab[J] . Arthritis Rheum ， 2007， 56(8)：2 7 15 -2718. ) ( [6] Mizoguchi A， B han AK. A case for regulatory B cells[J]. J Immu-nol， 2006， 176(2)：705-710. ) ( [7] M atsushita T， Yanaba K， Bo u aziz JD， et al . Regulatory B cells inhibitEAE initiation i n m ice while other B cells promote d i sease p r ogression [J] . J Clin Inves t ， 200 8 ， 118(1 0 )：3420-3430. ) ( [8] H ussain S， Delovitch TL. I n travenous transfusion of BCR-activated B cells protects NOD m ice from t y pe 1 d i abetes i n a n I L -10-dependent manner[J]. 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A m J Pathol，2007，171(2)：560-570. ) 片组织做免疫组化染色时值得推荐使用。 ( 参考文献： ) ( [1]王伯云，李玉松，黄高昇，等.病理学技术[M].北京：人民卫生 出版社，2000：1094-1095. ) ( [2]吴鸿雁，王景美，郑金榆.免疫组组染色中骨组织脱钙方法[J]. 临床与实验病理学杂志，2005，21(3)：358-358. ) ( [3]彭敦发.防止免疫组化染色中组织脱片的方法与体会[J].皖南医学院学报，1996，15(2)：177. ) ( [4]徐国祥，何 雷，李佳嘉，等.防止免疫组化染色组织脱片的处 理方法[J].诊断病理学杂志，2008，15(4)：278-293. ) ( [5]王 珏，张健，汤显斌.免疫组化染色过程中组织脱片的处理方 法[J].阳医学院学报，2007，26(6)：376. ) ( [6]崔 飞，陶晓钰，吴晓华，等.免疫组织化学技术中防止组织脱片的几个关键环节[J].华北煤炭医学院学报，2004，6(2)：153. )